咖啡酸、阿魏酸拮抗内皮素生物效应的新用途

1、咖啡酸或阿魏酸在制备对内皮素具有拮抗作用的药物中的应用。
2、咖啡酸或阿魏酸在制备对内皮素弓起小鼠急性死亡具有保护作用的药物 中的应用。
3、咖啡酸或阿魏酸在制备对内皮素缩血管效应具有拮抗作用的药物中的应 用。
4、咖啡酸或阿魏酸在制备对内皮素升血压效应具有拮抗作用的药物中的应 用。
5、咖啡酸或阿魏酸在制备对内皮素致血管平滑肌细胞增殖效应具有拮抗作 用的药物中的应用。

本发明是关于咖啡酸、阿魏酸的新制药用途发明，具体地说是咖 啡酸、阿魏酸在制备对内皮素-1生物效应有拮抗作用的药物中的应 用，属于药物领域。\n咖啡酸和阿魏酸在化学上均属于苯乙烯型化合物，二者的区别为 苯环3位上的基团，咖啡酸的苯环3位上是羟基，而阿魏酸的苯环3 位上是为甲氧基。咖啡酸和阿魏酸为我国传统中医药中活血化淤药的 重要成分，如当归、川芎嗪等药材中含量较多。\n内皮素是国际上最新报道的一种生物活性物质。许多心脑血管疾 病的发生发展与内皮素有着密切的关系，如高血压、冠心病、脑血管 意外、心力衰竭等，内皮素参与这些疾病的病理、生理过程。许多国 家已经把内皮素作为高血压、冠心病、脑血管意外、心力衰竭等疾病 的一项病理指标，并通过调节内皮素的生物作用来治疗上述疾病。另 外内皮素还与其他疾病如器官移植后的慢性排异反应、子痫、肝炎等 有关。因此，筛选一种能够拮抗内皮素生物活性的药物是目前非常重 要而有意义的事情。\n本发明人基于大量的实验研究，发现了咖啡酸和阿魏酸对内皮素 的拮抗作用，从而完成了本发明。\n因此，本发明目的是提供咖啡酸和阿魏酸的新制药用途。\n如上所述，咖啡酸和阿魏酸在化学上均属于苯乙烯型化合物，其 结构式分别为： 咖啡酸的化学结构式阿魏酸的化学结构式\n本发明人通过实验研究证明，咖啡酸、阿魏酸对内皮素-1 (ET-1)的生物效应具有良好的拮抗作用，主要表现在：\n(1)咖啡酸、阿魏酸对内皮素-1(ET-1)引起小鼠急性死亡的保 护作用。\n(2)咖啡酸和阿魏酸对ET-1缩血管效应的拮抗作用。\n(3)咖啡酸和阿魏酸对ET-1升血压效应的拮抗作用。\n(4)咖啡酸和阿魏酸对ET-1致血管平滑肌细胞增殖效应的拮 抗作用。\n咖啡酸和阿魏酸是两种在结构上非常接近的化合物，按照常规的 药物制剂工艺，可以将其作为有效成分，加入常规的赋性剂，制备成 任何一种适合于临床上使用的药物制剂。例如，丸剂、片剂、胶囊剂、 口服液体制剂、注射剂、散剂、膏剂、气雾剂等。制备这些药物制剂 是本领域普通技术人员的常规性技术活动。\n由于本发明人通过实验研究发现了咖啡酸和阿魏酸的上述新药 理作用，因此，按照制药领域的常规制剂工艺所制成的任何一种适合 于临床使用的药物剂型，均具有如下作用：\n(1)对内皮素-1引起小鼠急性死亡的保护作用。\n(2)对ET-1缩血管效应的拮抗作用。\n(3)对ET-1升血压效应的拮抗作用。\n(4)对ET-1致血管平滑肌细胞增殖效应的拮抗作用。\n因此，本发明提供了咖啡酸、阿魏酸的如下新制药用途：\n咖啡酸、阿魏酸在制备对内皮素具有拮抗作用的药物中的应用；\n咖啡酸、阿魏酸在制备对内皮素-1引起小鼠急性死亡具有保护 作用的药物中的应用；\n咖啡酸、阿魏酸在制备对内皮素-1缩血管效应具有拮抗作用的 药物中的应用；\n咖啡酸、阿魏酸在制备对内皮素-1升血压效应具有拮抗作用的 药物中的应用；\n咖啡酸、阿魏酸在制备对内皮素-1致血管平滑肌细胞增殖效应 具有拮抗作用的药物中的应用。\n咖啡酸、阿魏酸在制备成药剂时，可以加入药物赋性剂，如，填 充剂、崩解剂、溶剂、防腐剂、矫味剂、增稠剂、乳化剂等。\n在将咖啡酸、阿魏酸在制备成药剂时，药剂中所含咖啡酸或阿魏 酸有效成分的量一般为用于人体的治疗有效量。\n本发明所说的药剂优选含有0.1-99.9％重量份的咖啡酸或阿 魏酸；\n本发明所说的药剂优选含有10-90％重量份的咖啡酸或阿魏 酸；\n本发明所说的药剂优选含有15-80％重量份的咖啡酸或阿魏 酸；\n本发明所说的药剂优选含有20-70％重量份的咖啡酸或阿魏 酸；\n将本发明所说的咖啡酸或阿魏酸制成胶囊剂的方法是：\n取咖啡酸或阿魏酸纯品，加入赋性剂，入搅拌机混匀，装胶囊， 制得胶囊剂。\n将本发明所说的咖啡酸或阿魏酸制成片剂的方法是：\n取咖啡酸或阿魏酸纯品，加入赋性剂，混合均匀，造粒，整粒， 压片，包糖衣，得片剂。\n下述的药理实验进一步说明了咖啡酸或阿魏酸的新制药用途。\n实验例1咖啡酸、阿魏酸对内皮素-1引起小鼠急性死亡的保 护作用\n昆明种小鼠(购自北京医科大学实验动物科学部)90只，雌雄各 半，体重20±2.0g，禁食不禁水16小时后，自腹腔注射咖啡酸、阿魏 酸30分钟后(给药的剂量范围为0.1～100mg/kg)，从尾静脉注射 ET-1 12nmol/kg，记录动物的死亡数及死亡时间；对照组自腹腔注射 与药物处置组等同量的生理盐水后30分钟，从尾静脉注射ET-1 12nmol/kg，记录动物的死亡数及死亡时间，并将数据做统计学处理。\n咖啡酸和阿魏酸均能有效地拮抗ET-1致小鼠急性死亡作用，死 亡时间与对照组相比有显著性意义；在给药剂量为0.1～100mg/kg 的范围内，该作用具剂量依赖性；药物浓度相同时，阿魏酸的拮抗效能 大于咖啡酸。\n表1．咖啡酸和阿魏酸拮抗ET-1致小鼠急性死亡的保护作用 药物  给药剂量   动物数    (只)    动物死亡时间        (min) ET-1 咖啡酸+ET-1 阿魏酸+ET-1  12nmol/kg  100mg/kg  10mg/kg  1mg/kg  0.1mg/kg  100mg/kg  10mg/kg  1mg/kg  0.1mg/kg     10     10     10     10     10     10     10     10     10     2.24±1.02     12.72±3.11***     3.19±0.88*     2.58±0.21*     2.33±0.19*     14.37±1.89***     5.54±1.06**     4.04±0.50**     3.33±1.84*\n实验例2咖啡酸和阿魏酸对ET-1缩血管效应的拮抗作用\n雄性SD大鼠，体重230±10g，将大鼠击昏后快速摘取胸主动脉， 经分离结缔组织后，剪成2～3mm宽的血管环，分别置于Krebs- Henseleit生理溶液(K-H液，pH7.40±0.05,95％O2+5％CO2,37.0± 0.5℃)中，加2g基础张力、用10-7mol/L去甲肾上腺素预激二次、平 衡、稳定后，加入ET-1 10-9mol/L，待达到最大收缩效应后，分别加入 不同浓度的咖啡酸、阿魏酸和CA-1201(用2％DMSO为溶媒，实验用 2％DMSO作对照)，经张力换能器连台式平衡记录仪(上海大华仪表厂)， 记录血管等张收缩与舒张情况。\n咖啡酸和阿魏酸能明显地拮抗ET-1的缩血管效应，且给拮抗作 用具剂量依赖性；药物剂量-效应曲线经sigmiodal方法拟合后(参见 图1)，从所得出的效应动力学参数可见，阿魏酸拮抗ET-1缩血管的 效能较咖啡酸强(p＜0.05)。\n表2．咖啡酸和阿魏酸拮抗ET-1缩血管效应动力学参数 药物                动力学参数    Emax(％)     IC50(×10-6mol/L) 咖啡酸 阿魏酸  70.95±6.30  92.10±0.81     1.80±0.80     0.063±0.005\n实验例3咖啡酸和阿魏酸对ET-1升血压效应的拮抗作用\n雄性SD大鼠，体重230±10g，，禁食不禁水18h后，咖啡酸和阿魏 酸不同剂量尾静脉注射后，立即按6μg/kg量自尾静脉注射ET-1，用 阻抗法测定大鼠尾动脉收缩压变化(SBP)；对照组以等量生理盐水 处理后尾静脉注射与药物处置组相同剂量的ET-1；并将收缩压变化 值与对照组比较。\n咖啡酸和阿魏酸能明显地拮抗ET-1静脉注射后对大鼠的升血压 效应；与对照组相比，在给予ET-1后30分钟内，升压效应明显减弱， 随后的时间内其作用与对照组相比无显著性差异(p＞0.05)(参见图 2)。\n实验例4咖啡酸和阿魏酸对ET-1致血管平滑肌细胞增殖效应的 拮抗作用\n取第5代已长成致密单层的兔主动脉平滑肌细胞(RAVSMC)以传 代培养法调整细胞数为1×105·ml-1，接种于96孔培养板(100μ 1·孔-1),37℃、5％CO2孵育24h，吸去培养液，换以1％小牛血清的DMEM 培养液，加入ET-1(10nmol·L-1)后继续孵育不同时间后，得到ET-1 作用与RAVSMC的时间-效应曲线；加入咖啡酸和阿魏酸后考察其对 ET-1致平滑肌细胞的增殖作用。以结晶紫染色后用酶标检测仪在 570nm处测定各孔光密度(OD)值。 4.1细胞形态观察\n经结晶紫固定染色的培养板晾干后，直接在倒置显微镜下观察，未 见明显的细胞形态改变。     4.2 ET-1刺激RAVSMC增殖的时间-效应关系\n表3．ET-1引起RAVSMC增殖的时间效应     时间     (d)     增殖率     (％)     1     2     7     33.3±25.0**     50.0±13.6***     40.0±9.28**\n*p＞0.05；**p＜0.05；***p＜0.01\n由表3可见，ET-1可刺激RAVSMC增殖，于第2天达峰值，第1、2 和第7天的数值与对照组相比，细胞增殖率的增加有显著性意义；该 作用呈时间依赖性。 4.3咖啡酸和阿魏酸拮抗ET-1引起RAVSMC增殖\n由ET-1引起RAVSMC增殖的时间-效应关系，10nmol·L-1 ET-1与 咖啡酸、阿魏酸和CA-1201共孵第2天测定OD(570nm)值，结果见表 4。\n表4．咖啡酸、阿魏酸1对ET-1引起RAVSMC增殖的抑制作用        组别                          OD值(×102)  10-11  10-10  10-9  10-8        空白        ET-1 咖啡酸+ET-1 阿魏酸+ET-1  1.6±0.5  2.4±0.2Δ  1.2±0.1***  1.4±0.3***  1.2±0.4***  1.5±0.7***  1.2±0.8***  1.2±0.2***  0.9±0.1***  1.2±0.4\nΔ与空白组相比，p＜0.05:*p＞0.05；**p＜0.05；***p＜0.01\n由表4可见，咖啡酸和阿魏酸可显著性地拮抗ET-1引起的RAVSMC 增殖，且该作用具剂量依赖性。\n从理论上推测，内皮素可能是中医气滞血淤证的病因之一。本实验 结果可以得出：咖啡酸、阿魏酸为内皮素拮抗剂，对内皮素相关性疾病 的治疗及探索气滞血淤的成因及对其治疗会有很大的发展远景。\n实施例1\n取咖啡酸纯品10克，加入100克淀粉，入搅拌机混匀，装胶囊， 每粒装药粉1克，制得胶囊剂。\n实施例2\n取阿魏酸纯品100克，加入淀粉500克，混合均匀，造粒，整粒， 压片，包糖衣，得片剂。\n附图1是咖啡酸和阿魏酸拮抗ET-1缩血管作用剂量-效应曲 线。\n附图2是咖啡酸和阿魏酸拮抗ET-1升血压作用时间-效应曲 线。