一种土壤改良型生物肥料及其制备方法

1.一种土壤改良型生物肥料的制备方法，其特征在于，步骤如下：
（1）将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ACCC03120、胶冻样芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）CICC23640、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC21694分别接种于液体种子培养基，均在30～37℃条件下液体培养18～24h，然后按10～20wt%的接种量接种于液体发酵培养基中，在30～37℃培养3～5天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1～2g草炭，吸附15～30min，35～45℃烘干，粉碎，过筛；
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分别制得含有枯草芽孢杆菌ACCC03120活菌数3～8×10 个/g的菌剂A、胶冻样芽
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孢杆菌CICC23640活菌数3～8×10 个/g的菌剂B、含有巨大芽孢杆菌CICC21694活菌数
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3～8×10 个/g的菌剂C；
（2）将褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）ACCC11104 接种于液体种子培养基中，在25～30℃条件下液体培养18～24h，然后按10～20wt%的接种量将褐球固氮菌接种于液体发酵培养基中，在25～30℃培养3～5天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入
1~2g草炭，吸附15~30min，35~45℃烘干，粉碎，过筛，制得含有褐球固氮菌ACCC11104 活菌
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数1～5×10 个/g的菌剂D；
（3）将粉状毕赤酵母菌（Pichia farinosa）ACCC20025接种于液体种子培养基中，在
25~30℃条件下液体培养48~72h，然后按10~20wt%的接种量将粉状毕赤酵母菌接种于液体发酵培养基中，在25～30℃培养3~5天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1~2g草炭，吸附15~30min，35~45℃烘干，粉碎，过筛，制得含有粉状毕赤酵母菌ACCC20025活菌数1～
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5×10 个/g的菌剂E；
（4）将乳糖细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC23627接种于固体培养基，在
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25～30℃条件下培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度至10 个/mL，然后按10~20wt%的接种量接种于液体发酵培养基中，在25～30℃培养5～7天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1~2g草炭，吸附15~30min，35~45℃烘干，粉碎，过筛，制得含有乳糖细黄链霉菌
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CICC23627孢子数1～5×10 个/g的菌剂F；
（5）将步骤（1）～（4）制得的菌剂A、菌剂B、菌剂C、菌剂D、菌剂E、菌剂F按重量比
1~5：1~5：1~5：1~5：1~5：1~5的比例混合，制得复合微生物菌剂；
（6）将草炭、有机肥、无机肥料、多孔无机物、微量元素、粘土与步骤（5）制得的复合微生物菌剂按如下比例混合，均为重量份数：
草炭200~400份，有机肥200~400份，无机肥料100~400份，多孔无机物50~200份，微量元素10~30份，粘土50~80份，复合微生物菌剂10~20份；制得土壤改良型生物肥料；
所述多孔无机物选自蛭石、沸石、麦饭石、珍珠岩中的一种或两种以上；
所述步骤（1）中的液体种子培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：
酵母膏 5g，蛋白胨 10g，NaCl 10g，加蒸馏水至1000mL，pH 7.0~8.0；
所述步骤（1）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：
玉米面15~25g，豆浆30~40mL，葡萄糖3~8g，(NH4)2SO4 3~7g，KH2PO4 0.1~0.5g，MnSO4
0.1~0.3g，MgSO4·7H2O 0.1~0.3g，加水至800~1000mL，pH 7.0~8.0；
所述步骤（2）中的液体种子培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：
葡萄糖 20g，K2HPO4 1g，MgSO4·7H2O 0.2g，FeSO4·7H2O 0.25g，Na2MoO4·2H2O 0.5g，CaCO3 0.5g，加水至1000mL，pH7.0~7.5；
所述步骤（2）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：
蔗糖15~20g，MgSO4·7H2O 0.2~0.5g ，K2HPO4 0.2~0.5g，NaCl 0.2~0.5g，CaCl2·2H2O
0.05~0.1g，酵母膏2~5g，微量元素液2~3滴，加水至800~1000mL，pH7.0~7.5；
上述微量元素液组分如下：
Na2MoO4·2H2O 4~6g，H3BO3 4~6g，蒸馏水定容至1000mL；
所述步骤（3）中的液体种子培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：
5°Bé麦芽汁1000mL；
所述步骤（3）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：
蔗糖30~50g，可溶性淀粉1~3g，酵母粉30~50g，蛋白胨8~15g，NaCl 3~8g，pH
6.5~7.0；
所述步骤（4）中的固体培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：
马铃薯汁1000mL，葡萄糖20g，琼脂20g；
所述步骤（4）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：
棉籽饼20~40g，玉米面10~15g，可溶性淀粉8~12g，蔗糖3~5g，(NH4)2SO4 1~2g，NaCl
2~4g，CaCO3 3~5克，K2HPO4 0.3~0.5g，加水至800~1000 mL，pH 7.0~8.0。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述有机肥采用如下方法制备：
将20~40wt%的作物秸秆粉和60~80wt%的动物粪便混合均匀，调节pH6.0~7.0，加水调节含水率至40～60wt%，堆肥，待堆内温度达到50~70℃时，发酵20~40天，然后烘干、粉碎。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述无机肥料选自尿素、磷酸一铵、硫酸铵、硫酸钾中的一种或两种以上。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，上述无机肥料是由40~60wt%的尿素、
10~20wt%的磷酸一铵、20~40wt%的硫酸钾的混合制得。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述多孔无机物是由30~70wt%的蛭石与30~70wt%的沸石混合均匀，用8~12wt%浓度的盐酸浸泡20~28小时，加入氢氧化钠溶液，调节pH 4.0~8.5，过滤，120℃烘至恒重，粉碎。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述微量元素选自硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸镁、硫酸铜、硼酸、硫酸锰中的一种或两种以上。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，上述微量元素是由15~20wt%的硫酸锌、
8~10wt%的硫酸亚铁、35~45wt%的硫酸镁、8~10wt%的硫酸铜、15~20wt%的硼酸、8~10wt%的硫酸锰混合均匀制得。

一种土壤改良型生物肥料及其制备方法\n技术领域\n[0001] 本发明涉及一种土壤改良型生物肥料及其制备方法，属于生物肥料技术领域。\n技术背景\n[0002] 随着我国农业的发展，施用化肥成为农业增产的主要措施，氮、磷等化学肥料的长期使用，会破坏土壤结构，造成土壤板结、耕地土壤退化、耕层变浅、保水保肥能力下降，严重影响了农作物的产量和质量；农药的大量施用，造成农药在植物中的积累，通过食物、饲料危害人体和牲畜健康。因此，有效合理使用化肥，减少农药施用量，减少环境污染、消除土壤板结已成为摆在农业生产上的一个重要课题。\n[0003] 近年来，通过以农业废弃物制作而成的土壤改良型生物肥料备受推崇，其既可以实现废物的利用，增加土壤肥效，又可以减少环境污染，具有良好的经济效益和环境效益。\n[0004] 中国专利文献CN 102344814A（申请号201110203021.X）公开了一种用于改善土壤盐碱性的土壤改良剂及其制备方法。该发明所述的盐碱土壤改良剂通过将沼泽红假单胞菌、膜醭毕赤酵母菌、干酪乳杆菌、细黄链霉菌与海藻浆料混合，经多次发酵使多种有益微生物菌和海藻有机结合，复合培养而成的新型微生物活菌剂-海藻生物菌，并添加适量份数的腐植酸、有机质、活性沸石粉以及糖蜜，再经发酵后将发酵产物干燥。该专利通过添加海藻浆料，使该产品具有独特的离子吸附剂功能，从而达到改善盐碱土壤性状的目的。但该产品适用于普通土壤时，对土壤性状、肥力的改善和对作物品质的提高效果并不明显。\n[0005] 草炭：又名“泥炭”，亦叫作“泥煤”，是沼泽发育过程中的产物，形成于第四纪，由沼泽植物的残体，在多水的嫌气条件下，不能完全分解堆积而成。\n[0006] 蛭石：蛭石的化学式为（Mg，Ca）0.7（Mg，Fe，Al）6.0[（Al，Si）8.0]（OH4.8H2O），是一种含镁的水铝硅酸盐次生变质矿物，外形似云母，通常由黑（金）云母经热液蚀变作用或风化而成，因其受热失水膨胀时呈挠曲状，形态酷似水蛭，故称蛭石。\n[0007] 沸石：化学成分变化大，化学式为：AmBpO2p·nH2O，结构式为Ax/q[(AlO2)x(SiO2)y]nH2O，其中：A为Ca、Na、K、Ba、Sr等阳离子，B为Al和Si，p为阳离子化合价，m为阳离子数，n为水分子数，x为Al原子数，y为Si原子数，(y/x)通常在1～5之间，(x+y)是单位晶胞中四面体的个数。具特征笼状晶体结构、含沸石水的铝硅酸盐矿物。有方沸石、斜发沸石、丝光沸石等。可作为吸附材料、催化材料。\n[0008] 麦饭石：麦饭石是一种对生物无毒、无害并具有一定生物活性的复合矿物或药用岩石。麦饭石的主要化学成分是无机的硅铝酸盐。其中包括Si2O3、Fe2O3、FeO、MgO、CaO、K2O、Na2O、TiO2、P2O5、MnO等，还含有动物所需的全部常量元素，如：K、Na、Ca、Mg、Cu、Mo等微量元素和稀土元素，约58种之多。\n[0009] 珍珠岩：一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，因其具有珍珠裂隙结构而得名。珍珠岩矿包括珍珠岩，黑曜岩和松脂岩。三者的区别在于珍珠岩具有因冷凝作用形成的圆弧形裂纹，称珍珠岩结构，含水量2~6%；松脂岩具有独特的松脂光泽，含水量6~10%；黑曜岩具有玻璃光泽与贝壳状断口，含水量一般小于2%。\n[0010] 粘土：粘土是一种重要的矿物原料。由多种水合硅酸盐和一定量的氧化铝、碱金属氧化物和碱土金属氧化物组成，并含有石英、长石、云母及硫酸盐、硫化物、碳酸盐等杂质。\n发明内容\n[0011] 本发明针对现有技术的不足，提供一种土壤改良型生物肥料及其制备方法。\n[0012] 一种土壤改良型生物肥料，由以下原料混合制得，均为重量份数：\n[0013] 草炭200~400份，有机肥200~400份，无机肥料100~400份，多孔无机物50~200份，微量元素10~30份，粘土50~80份，复合微生物菌剂10~20份；\n[0014] 所述多孔无机物选自蛭石、沸石、麦饭石、珍珠岩中的一种或两种以上；\n[0015] 所述的复合微生物菌剂是由枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ACCC03120、胶冻样芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）CICC23640、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC21694、褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）ACCC11104、粉状毕赤酵母菌（Pichia farinosa）ACCC20025、乳糖细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC23627经发酵制得。\n[0016] 根据本发明优选的，所述有机肥可采用常用有机肥，也可用动物粪便和作物秸秆经堆肥发酵制得，堆肥发酵可按现有技术进行，也可按如下方法制备：\n[0017] 将20~40wt%的作物秸秆粉和60~80wt%的动物粪便混合均匀，调节pH6.0~7.0，加水调节含水率至40～60wt%，堆肥，待堆内温度达到50~70℃时，发酵20~40天，然后烘干、粉碎。\n[0018] 根据本发明优选的，所述无机肥料选自尿素、磷酸一铵、硫酸铵、硫酸钾中的一种或两种以上。无机肥料能够为植物生物提供生长所必需的氮、磷、钾元素，其中氮肥能促使农作物的茎叶生长茂盛，含有组成叶绿素的重要元素。磷肥促进农作物根系发达，增强养分的吸收和抗旱能力，促进作物穗数增多、籽粒饱满。钾肥促进农作物生长旺盛，茎干粗壮，增强抗病虫害能力，促进糖和淀粉的生成。\n[0019] 进一步优选的，上述无机肥料是由40~60wt%的尿素、10~20wt%的磷酸一铵、\n20~40wt%的硫酸钾的混合制得。\n[0020] 根据本发明优选的，上述多孔无机物是由30~70wt%的蛭石与30~70wt%的沸石混合均匀，用8~12wt%浓度的盐酸浸泡20~28小时，加入氢氧化钠溶液，调节pH 4.0~8.5，过滤，120℃烘至恒重，粉碎。多孔无机物具有疏松土壤、透气性好、吸水力强、防止病虫害等多种功效，有利于作物的生长，对土壤具有良好的调理效果。\n[0021] 根据本发明优选的，所述微量元素选自硫酸锌、硫酸亚铁、硫酸镁、硫酸铜、硼酸、硫酸锰中的一种或两种以上。微量元素对植物的生长发育起着至关重要的作用，是植物体内酶或辅酶的组成部分，具有很强的专一性，是作物生长发育不可缺少的和不可相互代替的。植物缺乏任何一种微量元素，生长发育都会受到抑制，导致减产和品质下降，因此需要适当的补充微量元素，促进植物的生长发育。\n[0022] 进一步优选的，上述微量元素是由15~20wt%的硫酸锌、8~10wt%的硫酸亚铁、\n35~45wt%的硫酸镁、8~10wt%的硫酸铜、15~20wt%的硼酸、8~10wt%的硫酸锰混合均匀制得。\n[0023] 根据本发明优选的，上述土壤改良型生物肥料的制备方法，步骤如下：\n[0024] （1）将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ACCC03120、胶冻样芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）CICC23640、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC21694分别接种于液体种子培养基，均在30～37℃条件下液体培养18～24h，然后按10～20wt%的接种量接种于液体发酵培养基中，在30～37℃培养3～5天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1～2g草炭，吸附15～30min，35～45℃烘干，粉碎，过筛；\n[0025] 分别制得含有枯草芽孢杆菌ACCC03 120活菌数3～8×109个/g的菌剂A、胶冻\n9\n样芽孢杆菌CICC23640活菌数3～8×10 个/g的菌剂B、含有巨大芽孢杆菌CICC21694活\n9\n菌数3～8×10 个/g的菌剂C；\n[0026] （2）将褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）ACCC11104接种于液体种子培养基中，在25～30℃条件下液体培养18～24h，然后按10～20wt%的接种量将褐球固氮菌接种于液体发酵培养基中，在25～30℃培养3～5天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1~2g草炭，吸附15~30min，35~45℃烘干，粉碎，过筛，制得含有褐球固氮菌ACCC11104活\n9\n菌数1～5×10 个/g的菌剂D；\n[0027] （3）将粉状毕赤酵母菌（Pichia farinosa）ACCC20025接种于液体种子培养基中，在25~30℃条件下液体培养48~72h，然后按10~20wt%的接种量将粉状毕赤酵母菌接种于液体发酵培养基中，在25～30℃培养3~5天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1~2g草炭，吸附15~30min，35~45℃烘干，粉碎，过筛，制得含有粉状毕赤酵母菌ACCC20025活菌数\n9\n1～5×10 个/g的菌剂E；\n[0028] （4）将乳糖细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC23627接种于固体培\n8\n养基，在25～30℃条件下培养48～72h，加入无菌水调整孢子浓度至10 个/mL，然后按\n10~20wt%的接种量接种于液体发酵培养基中，在25～30℃培养5～7天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1~2g草炭，吸附15~30min，35~45℃烘干，粉碎，过筛，制得含有乳糖细\n9\n黄链霉菌CICC23627孢子数1～5×10 个/g的菌剂F；\n[0029] （5）将步骤（1）～（4）制得的菌剂A、菌剂B、菌剂C、菌剂D、菌剂E、菌剂F按重量比1~5：1~5：1~5：1~5：1~5：1~5的比例混合，制得复合微生物菌剂；\n[0030] （6）将草炭、有机肥、无机肥料、多孔无机物、微量元素、粘土与步骤（5）制得的复合微生物菌剂按比例混合，制得土壤改良型生物肥料。\n[0031] 根据本发明优选的，所述步骤（1）中的液体种子培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0032] 酵母膏5g，蛋白胨10g，NaCl 10g，加蒸馏水至1000mL，pH 7.0~8.0；\n[0033] 根据本发明优选的，所述步骤（1）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0034] 玉米面15~25g，豆浆30~40mL，葡萄糖3~8g，(NH4)2SO4 3~7g，KH2PO4 0.1~0.5g，MnSO4 0.1~0.3g，MgSO4·7H2O 0.1~0.3g，加水至800~1000mL，pH 7.0~8.0。\n[0035] 根据本发明优选的，所述步骤（2）中的液体种子培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0036] 葡萄糖20g，K2HPO4 1g，MgSO4·7H2O 0.2g，FeSO4·7H2O 0.25g，Na2MoO4·2H2O 0.5g，CaCO3 0.5g，加水至1000mL，pH7.0~7.5。\n[0037] 根据本发明优选的，所述步骤（2）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0038] 蔗 糖 15~20g，MgSO4·7H2O 0.2~0.5g，K2HPO4 0.2~0.5g，NaCl 0.2~0.5g，CaCl2·2H2O0.05~0.1g，酵母膏2~5g，微量元素液2~3滴，加水至800~1000mL，pH7.0~7.5；\n[0039] 上述微量元素液组分如下：\n[0040] Na2MoO4·2H2O 4~6g，H3BO3 4~6g，蒸馏水定容至1000mL。\n[0041] 根据本发明优选的，所述步骤（3）中的液体种子培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0042] 5°Bé麦芽汁1000mL；\n[0043] 根据本发明优选的，所述步骤（3）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0044] 蔗糖30~50g，可溶性淀粉1~3g，酵母粉30~50g，蛋白胨8~15g，NaCl 3~8g，pH \n6.5~7.0。\n[0045] 根据本发明优选的，所述步骤（4）中的固体培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0046] 马铃薯汁1000mL，葡萄糖20g，琼脂20g；\n[0047] 根据本发明优选的，所述步骤（4）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0048] 棉籽饼20~40g，玉米面10~15g，可溶性淀粉8~12g，蔗糖3~5g，(NH4)2SO4 1~2g，NaCl2~4g，CaCO3 3~5克，K2HPO4 0.3~0.5g，加水至800～1000mL，pH 7.0~8.0。\n[0049] 上述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ACCC03120、粉状毕赤酵母菌（Pichia farinosa）ACCC20025和褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）ACCC11104均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。\n[0050] 上述胶冻样芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）CICC23640、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC21694、乳糖 细黄链 霉菌（Streptomyces microflavus）CICC23627均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。\n[0051] 草炭、无机肥料、多孔无机物可通过市场购买。优选的，草炭中有机质含量达60wt%以上，氮磷钾总量达3wt%以上。\n[0052] 本发明所述土壤改良型生物肥料中有机质含量达10~30wt%，N、P、K总含量达\n10~25wt%，有效活菌数达0.3~0.9亿个/g。\n[0053] 本发明产品可作为底肥，施用量为50~100kg/亩，整地时施入土壤中。\n[0054] 有益效果\n[0055] 1、本发明在肥料中添加了具有固氮、解磷、解钾作用的多种微生物，可以增加土壤的含氮量，提高了化学肥料的利用率，有利于改良土壤结构，提高作物产量和品质；\n[0056] 2、本发明在肥料中添加了有机肥、无机肥料、微量元素，即为肥料提供了丰富的营养成分，又实现了废弃物的合理利用；\n[0057] 3、本发明在肥料中添加了草炭、多孔无机物，可有效提高土壤质量，改善土壤团粒结构和吸附特性，提高了土壤保肥能力，从而提高土壤质量，有利于提高肥料利用效率和作物产量；\n[0058] 4、本发明制备工艺简单，生产过程不需要大型设备，生产成本低，对环境污染低。\n[0059] 具体实施方法\n[0060] 下面结合实施例对本发明做进一步阐述，但本发明所保护范围不限于此。\n[0061] 实施例中所述枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ACCC03120、粉状毕赤酵母菌（Pichia farinosa）ACCC20025和褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）ACCC11104均购自中国农业微生物菌种保藏管理中心。\n[0062] 实施例中所述胶冻样芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）CICC23640、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC21694、乳糖细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC23627均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。\n[0063] 实施例中所述草炭购自辽宁省盛源泥炭加工厂，其中草炭中有机质含量达60wt%以上，氮磷钾总量在3wt%以上；蛭石购自灵寿县卓越矿产品加工厂；沸石购自法库县包家屯兴业沸石粉厂；粘土购自山西省左云县粘土开发经销公司。\n[0064] 实施例中所述多孔无机物按如下方法制备：\n[0065] 多孔无机物是将50wt%的蛭石，沸石50wt%用10wt%浓度的盐酸浸泡24小时，加入氢氧化钠溶液，调节pH 7.0，过滤，120℃烘至恒重，粉碎。\n[0066] 实施例中所述有机肥按如下方法制备：\n[0067] 将30wt%的作物秸秆粉和70wt%的猪粪便混合均匀，调节pH7.0，加水调节含水率至60wt%，堆肥，待堆内温度达到60℃时，发酵30天，然后烘干、粉碎，即得。\n[0068] 实施例中所述无机肥料是将55wt%的尿素、15wt%的磷酸一铵、30wt%的硫酸钾混合均匀；\n[0069] 实施例中所述微量元素是将17wt%硫酸锌、9wt%硫酸亚铁、40wt%硫酸镁、9wt%硫酸铜、16wt%硼酸、9wt%硫酸锰混合均匀。\n[0070] 实施例中培养基的原料均为本领域常用市售产品，配制方法按本领域现有技术制备；实施例中所用其他化学试剂均为常用市售产品。\n[0071] 实施例1\n[0072] 一种土壤改良型生物肥料的制备方法，步骤如下：\n[0073] （1）将枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ACCC03120、胶冻样芽孢杆菌（Bacillus mucilaginosus）CICC23640和巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）CICC21694分别接种于液体种子培养基，在30℃条件下液体培养24h，然后按10wt%的接种量接种于液体发酵培养基中，在30℃培养3天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1.5g草炭，吸附30min，\n45℃烘干，粉碎，过筛；\n[0074] 分别制得含有枯草芽孢杆菌ACCC03120活菌数8×109个/g的菌剂A、胶冻样芽孢\n9 9\n杆菌CICC23640活菌数6×10 个/g的菌剂B、含有巨大芽孢杆菌CICC21694活菌数5×10个/g的菌剂C；\n[0075] 所述步骤（1）中的液体种子培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0076] 酵母膏5g，蛋白胨10g，NaCl 10g，加蒸馏水至1000mL，pH 7.0；\n[0077] 所述步骤（1）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0078] 玉米面20g，豆浆40mL，葡萄糖5g，(NH4)2SO4 5g，KH2PO4 0.3g，MnSO4 0.2g，MgSO4·7H2O 0.2g，加水至1000mL，pH 7.0。\n[0079] （2）将褐球固氮菌（Azotobacter chroococcum）ACCC11104接种于液体种子培养基中，在28℃条件下液体培养24h，然后按10wt%的接种量将褐球固氮菌接种于液体发酵培养基中，在28℃培养3天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1.5g草炭，吸附30min，45℃\n9\n烘干，粉碎，过筛，制得含有褐球固氮菌ACCC11104活菌数3×10 个/g的菌剂D；\n[0080] 根据本发明优选的，所述步骤（2）中的液体种子培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0081] 葡萄糖20g，K2HPO4 1g，MgSO4·7H2O 0.2g，FeSO4·7H2O 0.25g，Na2MoO4·2H2O 0.5g，CaCO3 0.5g，加水至1000mL，pH7.2。\n[0082] 根据本发明优选的，所述步骤（2）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0083] 蔗糖15g，MgSO4·7H2O 0.2g，K2HPO4 0.2g，NaCl 0.2g，CaCl2·2H2O 0.05g，酵母膏\n2g，微量元素液2滴，加水至1000mL，pH7.2；\n[0084] 上述微量元素液组分如下：\n[0085] Na2MoO4·2H2O 5g，H3BO3 5g，蒸馏水定容至1000mL。\n[0086] （3）将粉状毕赤酵母菌（Pichia farinosa）ACCC20025接种于液体种子培养基中，的28℃条件下液体培养48h，然后按15wt%的接种量将粉状毕赤酵母菌接种于液体发酵培养基中，在30℃培养4天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1.5g草炭，吸附30min，\n9\n45℃烘干，粉碎，过筛，制得含有粉状毕赤酵母菌ACCC20025活菌数10 个/g的菌剂E；\n[0087] 根据本发明优选的，所述步骤（3）中的液体种子培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0088] 5°Bé麦芽汁1000mL；\n[0089] 根据本发明优选的，所述步骤（3）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0090] 蔗糖40g，可溶性淀粉2g，酵母粉40g，蛋白胨10g，NaCl 5g，pH 7.0。\n[0091] （4）将乳糖细黄链霉菌（Streptomyces microflavus）CICC23627接种于固体培养\n8\n基，在28℃条件下培养72h，加入无菌水调整孢子浓度至10 个/mL，然后按15wt%的接种量接种于液体发酵培养基中，在28℃培养7天，然后向每毫升液体发酵培养基中加入1.5g草\n9\n炭，吸附30min，45℃烘干，粉碎，过筛。制得含有乳糖细黄链霉菌CICC23627孢子数3×10个/g的菌剂F。\n[0092] 根据本发明优选的，所述步骤（4）中的液体发酵培养基采用如下原料混合、经灭菌后制得：\n[0093] 棉籽饼30g，玉米面10g，可溶性淀粉10g，蔗糖5g，(NH4)2SO4 1g，NaCl 3g，CaCO3 5克，K2HPO4 0.4g，加水至1000mL，pH 7.0。\n[0094] （5）将步骤（1）~（4）制得的菌剂A、菌剂B、菌剂C、菌剂D、菌剂E和菌剂F按重\n9\n量比2﹕2﹕2﹕2﹕1﹕1﹕的比例混合，制得复合微生物菌剂，总菌数为4.8×10 个/g；\n[0095] （6）将草炭200kg、有机肥350kg、无机肥料200kg、多孔无机物135kg、粘土80kg、微量元素20kg与步骤（5）制得的复合微生物菌剂15kg混合，将混合好的复合混料通过输送机输送到造粒机造粒，低温烘干即制得复合微生物肥料。\n[0096] 所得复合微生物肥料中有机质含量为25wt%，N、P、K总含量为10wt%，有效活菌数大于0.7亿个/g。\n[0097] 实施例2\n[0098] 如实施例1所述的制备方法，不同之处在于，步骤（5）中，将制得的菌剂A、菌剂B、菌剂C、菌剂D、菌剂E和菌剂F按重量比1﹕2﹕2﹕3﹕1﹕1的比例混合，制得复合微\n9\n生物菌剂，总菌数为4.3×10 个/g。\n[0099] 实施例3\n[0100] 将草炭200kg、有机肥200kg、无机肥料400kg、多孔无机物80kg、粘土80kg、微量元素20kg与实施例2中制得的复合微生物菌剂20kg混合，将混合好的复合混料通过输送机输送到造粒机造粒，低温烘干即制得复合微生物肥料。\n[0101] 所得肥料有机质含量为20wt%，N、P、K总含量为20wt%，有效活菌数为0.8亿个/g。\n[0102] 实施例4\n[0103] 如实施例1所述的制备方法，不同之处在于，步骤（6）中，将草炭200kg、有机肥\n250kg、无机肥料300kg、多孔无机物130kg、粘土80kg、微量元素20kg与步骤（5）制得的复合微生物菌剂20kg混合，将混合好的复合混料通过输送机输送到造粒机造粒，低温烘干即制得复合微生物肥料。\n[0104] 所得肥料有机质含量为20wt%，N、P、K总含量为15wt%，有效活菌为0.9亿个/g。\n[0105] 试验例\n[0106] 土壤改良型生物肥料的应用：\n[0107] 采用随机区组法，小区面积100m2，设3个重复，以实施例1和实施例3中的土壤改良型生物肥料作为底肥，施用量100kg/亩；分别标记为处理组1、处理组2。\n[0108] 以施用专利CN 102344814A中实施例1的肥料作为底肥，施用量100kg/亩，标记为处理组3。\n[0109] 以不施用肥料区作为对照组。\n[0110] 种植指示作物为大白菜，品种为早熟五号。\n[0111] 施用土壤改良型生物肥料前，先采集土样测定土壤理化性状，标记为原始组，试验结束每小区采集土样测定土壤理化性状，分别标记为对照组、处理组1、处理组2、处理组\n3。采用土壤容重应用环刀法（详见NY/T 1121.4-2006标准）、pH值应用电位法（详见NY/T1121.2-2006标准）、有机质应用重铬酸钾容量法测定（详见NY/T 1121.6-2006标准）。\n[0112] 上述组别，除所施底肥不同，后期追肥及管理均相同。\n[0113] 检测结果：\n[0114] 表1 不同处理对白菜产量的影响\n[0115] \n 处理 对照组 处理组1 处理组2 处理组3\n 平均产量（kg/亩） 3388 4020 4081 3865\n 增产（%） 18.65 20.45 14.08\n[0116] 表2 不同处理组对土壤物理性质的影响\n[0117]