杀虫毒素和编码这些毒素的核苷酸序列

暂无

                        发明背景\n昆虫和其它害虫，使农民由于产量降低和用于抑制这些害虫的花 费，每年损失数十亿美元。昆虫害虫在农业生产环境中引起的损失， 包括农作物产量降低、农作物质量下降、和收获费用上升。\n刺激不定根系生长的耕作方法，诸如轮作和高水平氮的应用，已 经部分提出了农业害虫引起的难题。利用农田的经济需要限制了使用 轮作。此外，有些昆虫的越冬性状正在破坏一些地区的轮作。因此严 重依赖化学杀虫剂来实现期望的抑制水平，导致了杀虫剂结合或掺入 到土壤中。\n使用化学杀虫剂有几个缺点。连续使用杀虫剂导致抗性昆虫的进 化。诸如极高密度幼虫、大雨、和杀虫剂应用设备的不适当标准等情 形，可能导致抑制效果差。使用杀虫剂常常唤起环境关注，诸如土壤 污染和地表及地下水源的污染。公众也已经开始关注可能会在食品上 发现的人工合成化学药品的残留量。操作杀虫剂还可能对使用它们的 人造成危险。因此，人们正日益观察人工合成化学杀虫剂的潜在有毒 环境后果，这样做是正确的。广泛使用的人工合成化学杀虫剂的实例， 包括有机氯，例如DDT、灭蚁灵(mirex)、十氯酮(kepone)、林丹 (lindane)、艾氏剂(aldrin)、氯丹(chlordane)、涕灭威(aldicarb)、 和狄氏剂(dieldrin)；有机磷杀虫剂，例如氯螨硫磷(chlorpyrifos)、 柏拉息昂(parathion)、马拉硫磷(malathion)、和二嗪农(diazinon)； 和氨基甲酸酯。对使用杀虫剂的新的严谨限制和从市场上清除一些有 效的杀虫剂，可能限制了控制有破坏性的和代价昂贵的害虫的经济和 有效的选择。\n由于与使用有机合成化学杀虫剂有关的难题，显然存在着限制使 用这些试剂的需要和鉴定替换控制剂的需要。用生物学杀虫剂取代人 工合成化学杀虫剂或这些试剂的组合，可以降低有毒化学药品在环境 中的水平。\n声望渐增的一种生物学杀虫剂是土壤微生物苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensis，B.t.)。土壤微生物苏云金芽孢杆菌是 一种形成芽孢的革兰氏阳性细菌。B.t.的大多数菌株不具有杀虫活性。 一些B.t.菌株产生伴孢晶体蛋白质内含物，并以此为特征。这些内含 物通常在显微镜下表现为独特形状的晶体。一些B.t.蛋白质对害虫(诸 如昆虫)有高度毒性，并且它们的毒性活性是特异的。某些杀虫B.t. 蛋白质与内含物有关。这些δ-内毒素与具有非特异性宿主范围的外毒 素不同。芽孢杆菌的其它物种也产生杀虫蛋白质。\n已经分离得到某些芽孢杆菌毒素的基因并测序，而且已经生产了 基于重组DNA的产品并批准使用。此外，通过使用基因工程技术，正 在发展将这些毒素投递到农业环境中的方法，包括用毒素基因将植物 经基因工程改造成具有昆虫抗性的应用，和将稳定的完整微生物细胞 作为毒素投递载体的应用。由此，分离的芽孢杆菌毒素基因日益具有 商业价值。\n直到最近十五年，商业性使用的B.t.杀虫剂才被严谨限制到针对 小范围的鳞翅目(毛虫)害虫。苏云金芽孢杆菌库尔斯塔克亚种(B. thuringiensis subsp.kurstaki)的芽孢和晶体，作为针对鳞翅目 害虫的商业性杀虫剂，已经使用了许多年。例如，苏云金芽孢杆菌库 尔斯塔克HD-1变种(B.thuringiensis var.kurstaki HD-1)产生 对许多鳞翅目昆虫的幼虫有毒的结晶状δ-内毒素。\n然而，在最近几年中，调查人员已经发现对更广范围的害虫具有 特异性的B.t.杀虫剂。例如其它B.t.物种即以色列亚种和莫氏亚种 (a.k.a.tenebrionis，a.k.a.B.t.M-7，a.k.a.B.t.san diego)， 已经分别商业性应用于控制双翅目和鞘翅目昆虫。已经有报道，苏云 金芽孢杆菌粉虫变种(Bacillus thuringiensis var.tenebrionis) 对鞘翅目的两种甲虫(Colorado potato beetle，马铃薯叶甲 (Lepinotarsa decemlineata)和蓝毛臀萤叶甲(Agelastica alni)) 有活性。\n更近的，已经鉴定了B.t.新亚种，而且已经分离得到了负责有活 性的δ-内毒素蛋白质的基因。Hfte和Whiteley将结晶状蛋白质基 因分类成四个主要种类(H.Hfte，H.R.Whiteley[1989] Microbiological Reviews 52(2)：242-255)：Cry I(鳞翅目特异 的)、CryII(鳞翅目和双翅目特异的)、CryIII(鞘翅目特异的)、和 CryIV(双翅目特异的)。已经报道了对其它害虫有特异毒性的株系。 例如，已经提出用CryV和CryVI命名对线虫特异的一类毒素基因。\nHfte和Whiteley对结晶状蛋白质的1989年命名和分类方案， 是基于推导的氨基酸序列和毒素的宿主范围。那种系统覆盖了14种不 同类型的毒素，分成五个主要种类。经测序的苏云金芽孢杆菌结晶状 蛋白质基因的数目目前超过50种。已经有人提出了仅仅基于氨基酸同 一性的经修正的命名方案(Crickmore等人[1996]无脊椎动物病理学 学会，第29次年会，第三次苏云金芽孢杆菌讨论会，University of Clrdoba，Spain，September 1-6，1996，abstract)。除了仍然保留 为单独类型的cytA和cytB外，新方案保留了所有毒素基因中的“cry”。 将第一级中的罗马数字改为阿拉伯数字，并除去了第三级中的圆括号。 虽然许多种类进行了重新分类，但是保留了许多最初的名称，除了注 明的例外。\n现在已经鉴定了许多其它B.t.基因。WO 94/21795、WO 96/10083、 WO 98/44137、和J.J.Estruch等人(1996)PNAS93：5389-5394描 述了由芽孢杆菌微生物得到的Vip1A(a)、Vip1A(b)、Vip2A(a)、 Vip2A(b)、Vip3A(a)、和Vip3A(b)毒素。据报道，这些毒素产生于营 养细胞生长期，并因此命名为营养杀虫蛋白质(vegetative insecticidal protein，VIP)。据报道，这些毒素对某些鳞翅目和鞘 翅目害虫有活性。WO 98/18932公开了杀虫毒素的新类型。\n芽孢杆菌毒素成功应用于农业的障碍包括昆虫发展对B.t.的抗 性。此外，某些昆虫可能是不受芽孢杆菌毒素作用的。后者包括诸如 棉铃象甲(boll weevil)和小地虎(black cutworm)等昆虫，以及 迄今已经证明对B.t.δ-内毒素没有明显重大敏感性的大多数物种的 成年昆虫。当B.t.转基因植物技术中的抗性处理策略已经成为兴趣焦 点时，仍然很需要发展能够在植物中表达以有效控制多种昆虫的其它 基因。\n除那些描述于WO 98/18932中的之外，本申请提供了毒素和基因 的新类型，并与WO 94/21795、WO 96/10083、WO 98/44137、和Estruch 等人公开的那些截然不同。\n                   发明的简要概述\n本发明涉及对控制非哺乳动物害虫(特别是植物害虫)有用的物 质和方法。在一个实施方案中，本发明提供了针对非哺乳动物害虫具 有有利活性的新的芽孢杆菌分离物。在另一个实施方案中，本发明提 供了对控制非哺乳动物害虫有用的新毒素。在优选的实施方案中，这 些害虫是鳞翅目和/或鞘翅目昆虫。本发明的毒素包括δ-内毒素，以 及可以由芽孢杆菌培养物上清液得到的可溶性毒素。\n本发明还提供了编码本发明毒素的核苷酸序列。本发明还提供了 对鉴定和分析杀虫毒素的编码基因有用的核苷酸序列和方法。\n在一个实施方案中，本发明涉及作为杂交探针和/或PCR技术中的 引物有用的独特核苷酸序列。这些引物产生可以用于鉴定、分析、和/ 或分离特异毒素基因的特征性基因片段。本发明的核苷酸序列编码的 毒素与先前描述的毒素截然不同。\n在特殊的实施方案中，本发明提供了具有有利杀虫活性的毒素新 类别。这些毒素类别可以由多核苷酸序列编码，所述多核苷酸序列特 征为能够与某些例示序列杂交，和/或能够使用某些例示引物由PCR扩 增。\n本发明的一方面是关于具有有利杀虫特性的芽孢杆菌毒素的全新 家族的鉴定和分析。本发明包括此处称为MIS-7和MIS-8的基因和毒 素新类型。本发明还公开了新的WAR和SUP类基因和毒素。此处还进 一步分析了某些MIS-1和MIS-2毒素和基因。\n这些毒素家族和它们的编码基因，可以由为例如毒素或基因的大 小、DNA或氨基酸序列、杀虫活性、和/或抗体反应性鉴别。关于本发 明毒素新家族的编码基因，当前公开内容提供了独特杂交探针和PCR 引物，可以用于鉴定和分析每种例示家族的DNA。\n在本发明的一个实施方案中，可以在导致微生物高度增殖的条件 下培养芽孢杆菌分离物。在对微生物进行处理以提供单链基因组核酸 之后，可以将DNA与本发明的引物接触并用于PCR扩增。毒素编码基 因的特征性片段将通过此步骤得到扩增，由此鉴定毒素编码基因的存 在。\n本发明的另一方面是将公开的核苷酸序列作为探针使用，以检测 对抗害虫有活性的芽孢杆菌毒素的编码基因。\n本发明的另一方面包括使用此处公开的方法和核苷酸序列鉴定的 基因和分离物。由此鉴定的基因编码对抗害虫有活性的毒素。相似的， 分离物具有对抗这些害虫的活性。在优选的实施方案中，这些害虫是 鳞翅目或鞘翅目害虫。\n在优选的实施方案中，本发明涉及用至少一种本发明的多核苷酸 序列转化的植物细胞，从而经转化的植物细胞在目的害虫取食的组织 中表达杀虫毒素。正如此处描述的，根据本发明有用的毒素可以是通 过将多种毒素部分结合产生的嵌合毒素。此外，可以根据本发明使用 毒素的混合物和/或组合物。\n用此处公开的基因构建物转化植物，可以使用本领域技术人员熟 知的技术实现，通常涉及对基因进行修饰以优化毒素在植物中的表达。\n或者，可以将本发明的芽孢杆菌分离物、或表达此处描述的毒素 的重组微生物用于控制害虫。在这点上，本发明包括对基本上完整的 芽孢杆菌细胞、和/或表达本发明毒素的重组细胞进行处理，使当基本 上完整的细胞被应用于目的害虫的环境时可延长杀虫活性。经处理的 细胞作为杀虫毒素的保护性覆料。毒素经目的害虫消化后变得有活性。\n                     序列的简要描述\nSEQ ID NO.1是编码来自B.t.菌株Javelin 1990的毒素的核苷 酸序列。\nSEQ ID NO.2是Javelin 1990毒素的氨基酸序列。\nSEQ ID NO.3是根据本发明使用的正向引物。\nSEQ ID NO.4是根据本发明使用的反向引物。\nSEQ ID NO.5是来自B.t.菌株PS66D3的毒素基因的核苷酸序列。\nSEQ ID NO.6是来自66D3毒素的氨基酸序列。\nSEQ ID NO.7是来自B.t.菌株PS177C8的MIS毒素基因的核苷酸 序列。\nSEQ ID NO.8是来自177C8-MIS毒素的氨基酸序列。\nSEQ ID NO.9是来自B.t.菌株PS177I8的毒素基因的核苷酸序列。\nSEQ ID NO.10是177I8毒素的氨基酸序列。\nSEQ ID NO.11是编码来自B.t.菌株PS177C8的177C8-WAR毒素 基因的核苷酸序列。\nSEQ ID NO.12是来自B.t.菌株PS177C8的177C8-WAR毒素的氨 基酸序列。\nSEQ ID NO.13-21是根据本发明使用的引物。\nSEQ ID NO.22是SEQ ID NO.14引物的反向互补链。\nSEQ ID NO.23是SEQ ID NO.15引物的反向互补链。\nSEQ ID NO.24是SEQ ID NO.17引物的反向互补链。\nSEQ ID NO.25是SEQ ID NO.18引物的反向互补链。\nSEQ ID NO.26是SEQ ID NO.19引物的反向互补链。\nSEQ ID NO.27是SEQ ID NO.20引物的反向互补链。\nSEQ ID NO.28是SEQ ID NO.21引物的反向互补链。\nSEQ ID NO.29是MIS-7正向引物。\nSEQ ID NO.30是MIS-7反向引物。\nSEQ ID NO.31是MIS-8正向引物。\nSEQ ID NO.32是MIS-8反向引物。\nSEQ ID NO.33是来自B.t.菌株PS157C1、命名为157C1-A的MIS-7 毒素基因的核苷酸序列。\nSEQ ID NO.34是来自B.t.菌株PS157C1、命名为157C1-A的MIS-7 毒素的氨基酸序列。\nSEQ ID NO.35是来自B.t.菌株PS201Z的MIS-7毒素基因的核苷 酸序列。\nSEQ ID NO.36是来自B.t.菌株PS31F2的MIS-8毒素基因的核苷 酸序列。\nSEQ ID NO.37是来自B.t.菌株PS185Y2的MIS-8毒素基因的核 苷酸序列。\nSEQ ID NO.38是来自B.t.菌株PS33F1的MIS-1毒素基因的核苷 酸序列。\nSEQ ID NO.39是根据本发明使用的MIS引物。\nSEQ ID NO.40是根据本发明使用的MIS引物。\nSEQ ID NO.41是根据本发明使用的WAR引物。\nSEQ ID NO.42是根据本发明使用的WAR引物。\nSEQ ID NO.43是来自PS205C的MIS-7基因的部分核苷酸序列。\nSEQ ID NO.44是来自PS205C的MIS-7毒素的部分氨基酸序列。\nSEQ ID NO.45是来自PS205C的WAR基因的部分核苷酸序列。\nSEQ ID NO.46是来自PS205C的WAR毒素的部分氨基酸序列。\nSEQ ID NO.47是来自PS31F2的MIS-8基因的核苷酸序列。\nSEQ ID NO.48是来自PS31F2的MIS-8毒素的氨基酸序列。\nSEQ ID NO.49是来自PS31F2的WAR基因的核苷酸序列。\nSEQ ID NO.50是来自PS31F2的WAR毒素的氨基酸序列。\nSEQ ID NO.51是根据本发明使用的SUP引物。\nSEQ ID NO.52是根据本发明使用的SUP引物。\nSEQ ID NO.53是来自KB59A4-6的SUP基因的核苷酸序列。\nSEQ ID NO.54是来自KB59A4-6的SUP毒素的氨基酸序列。\n                     发明的详细公开\n本发明涉及控制非哺乳动物害虫的物质和方法。在特殊的实施方 案中，本发明涉及新的苏云金芽孢杆菌分离物，和对抗鳞翅目和/或鞘 翅目昆虫具有活性的毒素。本发明还涉及编码杀虫毒素的新基因，和 鉴定及分析编码具有有用特性的毒素的芽孢杆菌基因的方法。本发明 不仅涉及编码这些毒素的多核苷酸序列，而且还涉及使用这些多核苷 酸序列，以产生表达毒素的重组宿主。本发明的蛋白质与先前从苏云 金芽孢杆菌中分离得到的蛋白质毒素截然不同。\n根据本发明有用的B.t.分离物已经保存于农业研究机构专利培养 物收藏中心(Agricultural Research Service Patent Culture Collection)(NRRL)，北方地区研究中心(Northern Regional Research Center)，北方大学街1815号(1815 North University Street)，Peoria，伊利诺斯(Illinois)61604美国。B.t.菌株培 养物保藏编号如下：\n                                       表1.   培养物   保藏号   存放日期   专利号   B.t.PS157C1(MT104)   NRRL B-18240   July 17，1987   5,262,159   B.t.PS31F2   NRRL B-21876   October 24，1997   B.t.PS66D3   NRRL B-21858   October 24，1997   B.t.PS177C8a   NRRL B-21867   October 24，1997   B.t.PS177I8   NRRL B-21868   October 24，1997   KB53A49-4   NRRL B-21879   October 24，1997   KB68B46-2   NRRL B-21877   October 24，1997   KB68B51-2   NRRL B-21880   October 24，1997   KB68B55-2   NRRL B-21878   October 24，1997   PS33F1   NRRL B-21977   April 24，1998   PS71G4   NRRL B-21978   April 24，1998   PS86D1   NRRL B-21979   April 24，1998   PS185V2   NRRL B-21980   April 24，1998   PS191A21   NRRL B-21981   April 24，1998   PS201Z   NRRL B-21982   April 24，1998   PS205A3   NRRL B-21983   April 24，1998   PS205C   NRRL B-21984   April 24，1998   PS234E1   NRRL B-21985   April 24，1998   PS248N10   NRRL B-21986   April 24，1998   KB63B19-13   NRRL B-21990   April 29，1998   KB63B19-7   NRRL B-21989   April 29，1998   KB68B62-7   NRRL B-21991   April 29，1998   KB68B63-2   NRRL B-21992   April 29，1998   KB69A125-1   NRRL B-21993   April 29，1998   KB69A125-3   NRRL B-21994   April 29，1998   KB69A125-5   NRRL B-21995   April 29，1998   KB69A127-7   NRRL B-21996   April 29，1998   KB69A132-1   NRRL B-21997   April 29，1998   KB69B2-1   NRRL B-21998   April 29，1998   KB70B5-3   NRRL B-21999   April 29，1998   KB71A125-15   NRRL B-30001   April 29，1998   KB71A35-6   NRRL B-30000   April 29，1998   KB71A72-1   NRRL B-21987   April 29，1998   KB71A134-2   NRRL B-21988   April 29，1998   PS185Y2   NRRL B-30121   May 4，1999   KB59A4-6   NRRL B-   MR992   NRRL B-30124   May 4，1999   MR983   NRRL B-30123   May 4，1999   MR993   NRRL B-30125   May 4，1999   MR951   NRRL B-30122   May 4，1999\n所述培养物已进行了保藏，在该专利申请的待审期内，保证根据 37 CFR 1.14和35 U.S.C.122.授权的专利和商标委员会所确定的人 能获取所述培养物。在提交了该申请的副本或其后续申请的国家中， 可以按照该国专利法的要求提供所述保藏物。但是，应当明白保藏物 的可获得性并不构成对以侵犯由政府行为授予的专利权来实施本发明 的许可。\n此外，应按照微生物保藏的布达佩斯条约款项来保存和对公众发 放所述保藏培养物，即应小心储存以保证其在最近一次要求重新提供 保藏物样品后至少5年内，以及任何情况中在保藏日后至少30年内或 公开该培养物的专利授权后的有效期内存活并不被污染。由于保藏物 状况使得无法由保藏物提供样品时，保藏者承担替换保藏物的责任。 公众获取所述培养物的全部限制在公开该培养物的专利被授权时去 除。\n通过公开这些菌株的专利的发行效力，通过在公共收藏中心的保 藏，或通过它们在商业中的销售，可以容易的获得根据本发明有用的 许多菌株。例如，用于商业生产的B.t.菌株Javelin和HD分离物都 可以公开得到。\n此处提及的分离物的突变体可以通过本领域熟知的步骤产生。例 如，通过甲烷磺酸乙酯(EMS)诱变分离物，可以得到不产孢子的突变 体。使用紫外线和亚硝基胍，通过本领域熟知的步骤也可以产生突变 体。\n在一个实施方案中，本发明涉及包括用于分离、分析、和鉴定芽 孢杆菌基因(编码对抗非哺乳动物害虫有活性的蛋白质毒素)的核苷 酸引物和探针的物质和方法。此处描述的核苷酸序列还可以用于鉴定 新的杀虫芽孢杆菌分离物。本发明还涉及使用此处描述的方法和物质 鉴定到的基因、分离物、和毒素。\n此处提供的新的毒素和多核苷酸序列由多个参数详细说明。此处 描述的毒素的一个特征是杀虫活性。在特殊的实施方案中，这些毒素 具有针对鞘翅目和/或鳞翅目害虫的活性。本发明的毒素和基因还可以 由它们的氨基酸和核苷酸序列详细说明。分子的序列可以由与某些例 示序列的同源性，以及与某些例示探针杂交、或被某些例示引物扩增 的能力详细说明。此处提供的毒素还可以根据它们与某些抗体的免疫 反应性鉴定。\n本发明的一个重要方面是芽孢杆菌毒素新家族和编码这些毒素的 基因的鉴定和分析。这些家族已经命名为MIS-7和MIS-8。此处还公 开了新的WAR和SUP类毒素家族。这些家族的毒素，以及编码这些家 族内的毒素的基因，可以容易的如此处所述，通过例如大小、氨基酸 或DNA序列、和抗体活性等鉴定。氨基酸和DNA序列特征包括与例示 序列的同源性、与DNA探针杂交的能力、和用特殊引物扩增的能力。\n此处还进一步分析了MIS-1家族的一种基因和毒素(可从PS33F1 得到)和MIS-2家族的一种基因和毒素(可从PS66D3得到)。\n此处鉴定的毒素新家族是MIS-7家族。这个家族包括可以由B.t. 分离物PS157C1、PS205C、和PS201Z得到的毒素。本发明进一步提供 了用于鉴定MIS-7基因和毒素的探针和引物。\n此处鉴定的另一个毒素新家族是MIS-8家族。这个家族包括可以 由B.t.分离物PS31F2和PS185Y2得到的毒素。本发明进一步提供了 用于鉴定MIS-8基因和毒素的探针和引物。\n在优选的实施方案中，MIS家族基因编码分子量为大约70-大约 100kDa的毒素，最优选大小为大约80kDa的毒素。这些毒素通常是可 溶性的，而且可以由此处所述的芽孢杆菌培养物的上清液得到。这些 毒素具有针对非哺乳动物害虫的毒性。在优选的实施方案中，这些毒 素具有针对鞘翅目害虫的活性。MIS蛋白质由于它们在细胞中形成孔 的能力而进一步有用。这些蛋白质可以与第二种实体，例如其它蛋白 质一起使用。当与第二种实体一起使用时，MIS蛋白质将促进第二种 试剂进入靶细胞。在优选的实施方案中，MIS蛋白质与靶细胞中的MIS 受体相互作用，并引起靶细胞中孔的形成。第二种实体可以是毒素或 需要进入细胞的其它分子。\n本发明还涉及命名为WAR类毒素的毒素家族。WAR毒素通常大小 为大约30-50kDa，而且最常见的大小为大约40kDa。这些毒素通常是 可溶性的，而且可以由此处所述的芽孢杆菌培养物的上清液得到。WAR 毒素可以用此处所述的引物以及抗体鉴定。\n根据本发明提供的其它毒素家族是命名为SUP类的毒素。这些毒 素通常是可溶性的，而且可以由此处所述的芽孢杆菌培养物的上清液 得到。在优选的实施方案中，SUP毒素对抗鳞翅目害虫有活性。SUP毒 素通常大小为大约70-100kDa，优选大约80kDa。SUP家族此处由来 自分离物KB59A4-6的毒素例示。本发明提供了对鉴定SUP家族毒素和 基因有用的探针和引物。\n本发明还提供其它的芽孢杆菌毒素和基因，包括其它的MIS、WAR、 和SUP毒素和基因。\nMIS、WAR、和SUP家族的毒素都是可溶性的，而且可以如此处所 述由芽孢杆菌培养物的上清液得到。这些毒素可以单独或与其它毒素 组合使用来控制害虫。例如，MIS家族的毒素可以与WAR类毒素结合 使用以实现控制害虫，特别是鞘翅目害虫。这些毒素可以，例如，与 由芽孢杆菌分离物得到的δ-内毒素一起使用。\n表2提供了本发明的毒素和基因新家族的概要。某些MIS家族在 此处通过可以由表2所示的特殊B.t.分离物得到的毒素具体例示。编 码这些家族的毒素的基因可以通过多种高度特异参数鉴定，包括与表 2列出的特殊探针杂交的能力。与表2列出的探针超过大约80％相同 的序列，也可以用来鉴定多种家族的基因。表2还例示了可以用来扩 增本发明的基因的特殊引物对。用至少一对列举的引物，通常可以扩 增所指家族内的基因的一部分。在优选的实施方案中，被扩增的部分 将大约是所指的片段大小。表2所示引物由编码此处所附序列表中所 示的肽的多核苷酸序列组成。本领域的那些技术人员可以容易的构建 其它引物和探针，从而可以利用编码相同氨基酸序列的其它多核苷酸 序列鉴定和/或分析编码杀虫毒素的其它基因。在优选的实施方案中， 可以由芽孢杆菌分离物得到这些其它毒素和它们的基因。\n                                           表2.   家族   分离物   探针   (SEQ ID NO.)   引物对   (SEQ ID NO.)   片段大小   (nt)   MIS-1   PS33F1   37   13和22   13和23   14和23   69   506   458   MIS-2   PS66D3   5   16和24   16和25   16和26   16和27   16和28   17和25   17和26   17和27   17和28   18和26   18和27   18和28   19和27   19和28   20和28   160   239   400   509   703   102   263   372   566   191   300   494   131   325   213   MIS-7   PS205C、PS157C1(157C1-A)、   PS201Z   33，35   29和30   598   MIS-8   PS31F2、PS185Y2   36，37   31和32   585   SUP   KB59A4-6   1   51和52\n此外，根据本发明可以使用嵌合毒素。已经发展了通过B.t.蛋白 质各部分的组合产生有用嵌合毒素的方法。组合的各部分自身不需要 是杀虫的，只要组合各部分产生的嵌合蛋白质是杀虫的即可。这可以 使用限制酶实现，例如欧洲专利0 228 838；A.Z.Ge，N.L.Shivarova， D.H.Dean(1989)美国国家科学院进展(Proc.Natl.Acad.Sci.USA) 86：4037-4041；A.Z.Ge，D.Rivers，R.Milne，D.H.Dean(1991) 生物化学杂志266：17954-17958；H.E.Schnepf，K.Tomczak， J.P.Ortega，H.R.Whiteley(1990)生物化学杂志265：20923- 20930；G.Honee，D.Convents，J.Van Rie，S.Jansens，M.Peferoen， B.Visser(1991)分子微生物学5：2799-2806中所述。或者，利 用细胞重组机制的重组可以实现相似的结果。见，例如，T.Caramori， A.M.Albertini，A.Galizzi(1991)基因98：37-44；W.R.Widner， H.R.Whiteley(1990)细菌学杂志172：2826-2832；D.Bosch， B.Schipper，H.van der Kliej，R.A.de Maagd，W.J.Stickema(1994) 生物技术(Biotechnology)12：915-918。本领域已有许多其它方法 可以产生这些嵌合DNA。本发明意欲包括利用本申请鉴定的新序列的 嵌合蛋白质。\n用此处提供的教学，本领域的技术人员可以容易的产生和使用此 处所述的多种毒素和多核苷酸序列。\n基因和毒素。根据本发明有用的基因和毒素不仅包括全长序列， 还有这些序列的片段、变体、突变体、和融合蛋白质(保留了此处特 别例示毒素的特征性杀虫活性)。根据本发明的教学，也可以利用通过 组合一种以上芽孢杆菌毒素或基因的部分产生的嵌合基因和毒素。如 此处所用，术语基因的“变体”或“突变体”指编码相同毒素或编码 具有杀虫活性的相当毒素的核苷酸序列。如此处所用，术语“相当毒 素”指具有与例示毒素相同或本质上相同的对目的害虫的生物学活性 的毒素。例如，美国专利号5,605,793描述了通过重新组装经随机片 段化的DNA产生的多种其它分子的方法。\n对本领域技术人员是明显的，可以通过多种方法鉴定和得到编码 活性毒素的基因。可以从保存于上述培养物保藏单位的分离物得到此 处例示的特殊基因。这些基因，或者它们的部分或变体，也可以通过 人工合成构建，例如，使用基因合成仪。使用产生点突变的常规技术， 可以容易的构建基因的变体。还有，根据常规步骤，使用商业性可获 得的核酸外切酶或核酸内切酶，可以产生这些基因的片段。例如，可 以用酶诸如Bal31或定点诱变来从这些基因的末端系统切除核苷酸。 还可以使用多种限制酶得到编码活性片段的基因。可以使用蛋白酶直 接得到这些毒素的活性片段。\n使用此处提供的教学，可以由芽孢杆菌分离物和/或DNA文库得到 相当毒素和/或编码这些相当毒素的基因。有许多方法可以得到本发明 的杀虫毒素。例如，可以使用此处公开和要求保护的杀虫毒素的抗体， 从蛋白质混合物中鉴定和分离毒素。具体地说，可以制得针对毒素中 最保守和与其它芽孢杆菌毒素相比最独特的部分的抗体。然后通过免 疫沉淀、酶联免疫吸附反应(enzyme linked immunosorbent assay， ELISA)、或Western印渍，可以将这些抗体用于特别鉴定具有特征性 活性的相当毒素。使用本领域的常规步骤，可以容易的制备针对此处 公开的毒素、相当毒素、或这些毒素的片段的抗体。然后可以由微生 物得到编码这些毒素的基因。\n保留了例示毒素的杀虫活性的片段和相当物属于本发明的范围之 内。还有，因为遗传密码的冗余，多种不同DNA序列可以编码此处公 开的氨基酸序列。产生编码相同或本质上相同的毒素的这些替换DNA 序列，是属于本领域训练的工作人员的技术范围内的。这些变体DNA 序列属于本发明的范围之内。如此处所用，提及的“本质上相同的” 序列指具有本质上不影响杀虫活性的氨基酸取代、删除、增加、或插 入的序列。这个定义还包括保留了杀虫活性的片段。\n鉴定本发明毒素和基因的另一种方法是使用寡核苷酸探针。这些 探针是可检测的核苷酸序列。探针提供了鉴定本发明毒素编码基因的 快速方法。可以使用DNA合成仪和常规步骤，人工合成根据本发明作 为探针使用的核苷酸片段。\n此处已经特别例示了本发明的某些毒素。既然这些毒素仅仅是本 发明毒素的范本，显然本发明应当包含具有与例示毒素相同或相似杀 虫活性的变体或相当毒素(和编码相当毒素的核苷酸序列)。相当毒素 与例示毒素具有氨基酸同源性。这种氨基酸同一性通常超过60％，优 选超过75％，更优选超过80％，更优选超过90％，而且可以超过95 ％。这些同一性是使用常规排序技术测定的。氨基酸同源性在确定生 物学活性或涉及决定最终负责生物学活性的三维构型的毒素关键区将 是最高的。在这一点上，某些氨基酸取代是可接受的而且可预计的， 如果这些取代位于对活性不重要的区域内或是不影响分子三维构型的 保守氨基酸取代。例如，氨基酸可以归为下列种类：非极性氨基酸、 不带电氨基酸、碱性氨基酸、和酸性氨基酸。只要取代本质上不改变 化合物的生物学活性，用一种氨基酸取代其它同类氨基酸的保守取代 属于本发明的范围之内。表3提供了属于每一类的氨基酸实例的列表。\n                         表3.   氨基酸类型   氨基酸实例   非极性   不带电、极性   酸性   碱性   Ala、Val、Leu、Ile、Pro、Met、Phe、Trp   Gly、Ser、Thr、Cys、Tyr、Asn、Gln   Asp、Glu   Lys、Arg、His\n在某些情况中，还可以进行非保守取代。关键因素是这些取代不 能显著影响毒素的生物学活性。\n本发明的δ-内毒素的特征可以用如上所述的毒素的形状和位置 表述。\n如此处所用，提及的“分离的”多核苷酸和/或“经纯化的”毒素 指这些分子与在自然条件下共存的其它分子分开。因此，提及“分离 和经纯化的”表示涉及此处所述的“人为处理”。嵌合毒素和基因也涉 及“人为处理”。\n重组宿主。可以将本发明的毒素编码基因导入广泛的微生物或 植物宿主。毒素基因的表达直接的或间接的导致杀虫剂的产生和维持。 对于合适的微生物宿主，例如假单胞菌(Pseudomonas)，可以应用于 害虫地点，它们将增殖并被摄取。结果是控制了害虫。或者，在延长 毒素活性和稳定细胞的条件下，可以杀死和处理含有毒素基因的微生 物。然后可以将保留了毒性活性的、经处理的细胞应用于目的害虫的 环境。\n通过合适的载体将芽孢杆菌毒素基因导入微生物宿主，并将该宿 主以活的状态应用于环境时，重要的是使用特定的宿主微生物。微生 物宿主选自已知占据一种或多种感兴趣农作物的“植物群落”(叶表、 叶圈、根际和/或根表)。选择这些微生物是为了能够成功的在特殊环 境中(农作物和其它昆虫栖息地)与野生型微生物竞争，提供表达多 肽杀虫剂的基因的稳定维持和表达，并理想地使杀虫剂免于环境降解 和灭活。\n已知大量的微生物栖息于广泛的重要农作物的叶面(植物叶片表 面)和/或根际(植物根部周围的土壤)。这些微生物包括细菌、藻类、 和真菌。特别感兴趣的是微生物，诸如细菌，例如，假单胞菌属 (Pseudomonas)、欧文氏菌属(Erwinia)、沙雷氏菌属(Serratia)、 克雷白氏菌属(Klebsiella)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、链霉菌属 (Streptomyces)、根瘤菌属(Rhizobium)、红假单胞菌属 (Rhodopseudomonas)、嗜甲基菌属(Methylophilius)、土壤杆菌属 (Agrobacterium)、醋杆菌属(Acetobacter)、乳杆菌属 (Lactobacillus)、节杆菌属(Arthrobacter)、固氮菌属 (Azotobacter)、明串珠菌属(Leuconostoc)、和产碱菌属 (Alcaligenes)；真菌，特别是酵母，例如，酵母属(Saccharomyces)、 隐球酵母属(Cryptococcus)、克鲁维酵母属(Kluyveromyces)、掷孢 酵母属(Sporobolomyces)、红酵母属(Rhodotorula)、和短梗霉属 (Aureobasidium)。特别感兴趣的是这些植物群落细菌物种，如丁香 假单胞菌(Pseudomonas syringae)、荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)、粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)、木醋杆菌 (Acetobacter xylinum)、根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)、球形红假单胞菌(Rhodopseudomonas spheroides)、 野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)、苜蓿根瘤菌(Rhizobium melioti)、真养产碱菌(Alcaligenes entrophus)、和维涅兰德固氮 菌(Azotobacter vinlandii)；和植物群落酵母物种，诸如深红酵母 (Rhodotorula rubra)、胶粘红酵母(R.glutinis)、海滨红酵母(R. marina)、橙黄色红酵母(R.aurantiaca)、浅白隐球酵母 (Cryptococcus albidus)、流散隐球酵母(C.diffluens)、罗伦隐 球酵母(C.laurentii)、罗氏酵母(Saccharomyces rosei)、普地 酵母(S.pretoriensis)、啤酒酵母(S.cerevisiae)、红色掷孢酵 母(Sporobolomyces roseus)、香气掷孢酵母(S.odorus)、佛地克 鲁维酵母(Kluyveromyces veronae)、和Aureobasidium pollulans。 特别感兴趣的是有色微生物。\n有许多方法可以在允许基因稳定维持和表达的条件下将编码毒素 的芽孢杆菌基因导入微生物宿主。这些方法对于本领域的技术人员是 众所周知的，并描述于，例如，美国专利号5,135,867，此处引用作 为参考。\n还可以将与本发明毒素功能相当的人工合成基因用于转化宿主。 可以在，例如，美国专利号5,380,831中找到产生人工合成基因的方 法。\n细胞的处理。正如上文提到的，可以对表达芽孢杆菌毒素的芽 孢杆菌或重组细胞进行处理，以延长毒素活性和稳定细胞。形成的杀 虫微囊在细胞结构中包含芽孢杆菌毒素，该细胞结构经稳定处理并在 微囊应用于目的害虫环境时保护毒素。合适的宿主细胞包括原核细胞 或真核细胞。作为宿主，特别感兴趣的是原核细胞和低级真核细胞， 诸如真菌。细胞通常是完整的，并在处理时基本上处于繁殖形式而非 孢子形式。\n微生物细胞，例如含有芽孢杆菌毒素基因的微生物的处理，可以 通过化学的或物理的方法，或者通过化学和/或物理方法的组合，只要 该技术不损害毒素的特性，并且不减小细胞保护毒素的能力即可。处 理微生物细胞的方法公开于美国专利号4,695,455和4,695,462，此 处引用作为参考。\n用于控制害虫的方法和制剂。可以通过本领域技术人员知道的 多种方法，使用本发明的分离物、毒素、和基因来实现控制害虫。这 些方法包括，例如，将芽孢杆菌分离物应用于害虫(或它们的所在地)、 将重组微生物应用于害虫(或它们的所在地)、和用编码本发明的杀虫 毒素的基因转化植物。转化可以由本领域技术人员使用常规技术进行。 此处公开了用于这些转化的必要物质，或者熟练的技术人员可以通过 其它方法容易的获得。\n可以将配制的含有引诱剂和芽孢杆菌分离物毒素、或包含可由此 处公开的芽孢杆菌分离物得到的基因的重组微生物的诱饵颗粒应用于 土壤。还可以将配制的产品作为种子覆料或根部处理或作物生长周期 晚期的完整植株处理应用。植物和土壤的芽孢杆菌细胞处理可以以可 润湿粉末、颗粒或粉尘，通过与多种惰性物质混合，诸如无机矿物质 (phyllosilicates、碳酸盐、硫酸盐、磷酸盐、等等)或植物材料(玉 米穗轴粉、稻壳、胡桃壳、等等)混合使用。制剂可以包括扩散-增 稠佐剂、稳定剂、其它杀虫添加剂、或表面活性剂。液体制剂可以是 基于水的或非水的，并以泡沫、凝胶、悬浮液、可乳化浓缩物等等形 式使用。成分可以包括流变剂、表面活性剂、乳化剂、分散剂、或聚 合物。\n本领域技术人员可以理解，杀虫剂浓度将由于特殊制剂的本性广 泛变化，特别是可作为浓缩物或直接使用。杀虫剂将以至少1％(重量 计)存在，而且可能是100％(重量计)。干燥制剂通常有大约1-95 ％(重量计)的杀虫剂，而液体制剂将通常是液相中固体重量大约1 -60％。含有细胞的制剂将通常含有大约102-大约104个细胞/mg。这 些制剂将以每公顷大约50mg(液体的或于的)-1kg或更多的量使用。\n通过喷、撒、洒、等等，可以将制剂应用于害虫环境，例如土壤 和植物。\n多核苷酸探针。众所周知的，DNA具有叫做碱基互补性的基本 特性。自然界中，DNA通常以成对的反向平行链的形式存在，每条链 上的碱基从该链上凸出并指向相对链。一条链上的腺嘌啉(adenine， A)碱基总是对应另一条链上的胸腺嘧啶(thymine，T)碱基，而鸟嘌 啉(guanine，G)碱基对应胞嘧啶(cytosine，C)碱基。由于碱基能 够以这种特殊方式形成氢键，它们保持并置。虽然每一个单独的键是 相对微弱的，但是许多邻近碱基的氢键结合的的净作用，与碱基堆叠 作用一起，形成两条互补链的稳定连接。这些键可以通过处理诸如高 pH或高温打断，而且这些条件导致两条链的解离，或“变性”。然后 如果将DNA置于热动力学上有利于碱基氢键形成的条件中，那么DNA 链将退火，或“杂交”，并重新形成最初的双链DNA。如果在适当的条 件下进行，这种杂交可以是高度特异的。即只有具有高度碱基互补的 链能够形成稳定的双链结构。杂交特异性与反应条件的关系是众所周 知的。由此，杂交可以用于测试两段DNA的碱基序列是否互补。正是 这种杂交机制促进了使用本发明的探针来容易的检测和分析感兴趣的 DNA序列。\n探针可以是RNA、DNA、或PNA(peptide nucleic acid，肽核酸)。 探针将通常具有至少大约10个碱基，更通常至少大约17个碱基，而 且可以具有多至大约100个碱基或更多。可以容易的利用较长的探针， 而且这种探针可以是例如长度为几千个碱基。探针序列被设计成至少 与编码感兴趣的毒素的基因的一部分基本互补。探针不需要与它要杂 交的序列完全互补。可以使用本领域技术人员熟知的技术，对探针进 行标记。\n使用本发明作为探针的尝试，首先需要通过Southern印渍分析， 鉴定与公开的核苷酸序列同源的芽孢杆菌分离物的所有DNA片段基因 库。由此，仍可能在没有生物学分析帮助的情况下，预先知道许多新 的芽孢杆菌分离物、和给定的芽孢杆菌分离物表达的个别基因产物的 大概活性。这种探针分析提供了在各种B.t.亚种中快速鉴定具有潜在 商业价值的杀虫毒素基因的方法。\n根据本发明有用的一种杂交操作，通常包括分离感兴趣的DNA样 品并化学纯化之的起始步骤。可以使用经裂解的细菌或从细菌分离得 到并经片段化的所有核酸。可以使用已知技术对细胞进行处理，以释 放它们的DNA(和/或RNA)。使用适当的限制酶可以将DNA样品切成片 段。通过凝胶(通常是琼脂糖或丙烯酰胺)电泳可以将片段根据大小 分开。可以将感兴趣的片段转移到固定化膜上。\n特别的杂交技术对本发明并不重要。由于杂交技术中做了改进， 所以它们可以容易的应用。\n然后可以将探针和样品在杂交缓冲液中混合，并在适当的温度中 保持到发生退火。此后，洗膜至无无关物质，留下样品和结合的探针 分子，通常通过自显影和/或液闪计数检测和定量。正如本领域众所周 知的，如果探针分子和核酸样品通过形成两分子间强非共价键杂交， 那么可以合理的推测探针和样品基本相同。探针的可检测标记提供了 以已知方式测定杂交是否发生的方法。\n将核苷酸片段作为探针使用时，用本领域技术人员知道的任何合 适的标记，包括放射性和非放射性标记，对特别的探针进行标记。典 型的放射性标记包括32P、35S等等。非放射性标记包括，例如，配基诸 如生物素或甲状腺素，以及酶诸如水解酶或perixodase，或各种化学 发光剂诸如萤光素、或荧光化合物如荧光素及其衍生物。可以使探针 固有的发荧光，如国际申请号WO 93/16094中描述的。\n可以应用各种程度的严谨条件。越严谨的条件，形成双螺旋要求 的互补程度越高。可以通过温度、探针浓度、探针长度、离子强度、 时间等等控制严谨程度。优选的，通过本领域众所周知的技术在中度 -高度严谨条件下进行杂交，例如，G.H.Keller，M.M.Manak(1987) DNA探针，Stockton出版社，New York，NY.，pp.169-170所述。\n如此处使用的杂交的“中度-高度严谨”条件指，达到与本申请 人应用的条件的杂交相同或大致相同程度特异性的条件。此处提供了 中度和高度严谨条件的实例。具体地说，使用常规方法(Maniatis等 人)进行Southern印渍上固定的DNA与32P标记的基因特异探针的杂 交。通常，在中度-高度严谨条件下进行杂交和随后的清洗，这种严 谨条件下能够检测到与例示毒素基因同源的目的序列。对于双链DNA 基因探针，杂交于低于DNA杂合体熔解温度[melting temperature， Tm])20-25℃下在6X SSPE、5X Denhardt氏溶液、0.1％SDS、0.1mg/ml 变性DNA中进行过夜。熔解温度由下面的公式描述(G.A.Beltz， K.A.Jacobs，T.H.Eickbush，P.T.Cherbas，和F.C.Kafatos[1983] 酶学方法，R.Wu，L.Grossman和K.Moldaye[编]Academic Press，New York 100：266-285)。\nTm＝81.5℃+16.6Log[Na+]+0.41(％G+C)-0.61(％甲酰胺)- 600/双螺旋长度(单位：碱基对)。\n清洗通常如下进行：\n(1)于室温在1X SSPE、0.1％SDS中两次15分钟(低度严谨 条件清洗)。\n(2)于Tm-20℃在0.2X SSPE、0.1％SDS中一次15分钟(中 度严谨条件清洗)。\n对于寡核苷酸探针，杂交于低于杂合体的熔解温度Tm 10-20℃ 下在6X SSPE、5X Denhardt氏溶液、0.1％SDS、0.1mg/ml变性DNA 中进行过夜。寡核苷酸探针的Tm由下面的公式描述：\nTm(℃)＝2(T/A碱基对数目)+4(G/C碱基对数目)(S.V.Suggs， T.Miyake，E.H.Kawashime，M.J.Johnson，K.Itakura，和 R.B.Wallace[1981]ICN-UCLA symp.Dev.Biol.Using Purified Genes，D.D.Brown[编]，学术出版社，纽约，23：683-693)。\n清洗通常如下进行：\n(1)于室温在1X SSPE、0.1％SDS中两次15分钟(低度严谨 条件清洗)。\n(2)于杂交温度在1X SSPE、0.1％SDS中一次15分钟(中度 严谨条件清洗)。\n通常，可以改变盐和/或温度来改变严谨条件。对于长度＞70碱基 左右的、经标记的DNA片段，可以使用下面的条件：\n低度：1或2X SSPE，室温\n低度：1或2X SSPE，42℃\n中度：0.2X或1X SSPE，65℃\n高度：0.1X SSPE，65℃\n双螺旋的形成和稳定性取决于杂合体两条链之间实质上的互补 性，并且，如上所述，可以承受一定程度的错配。因此，本发明的探 针序列包括所述序列的(单个和多个)突变、删除、插入、及其组合， 其中所述突变、插入和删除可以允许与感兴趣的目的多核苷酸形成稳 定的杂合体。可以用许多方法在给定的多核苷酸序列中产生突变、插 入、和删除，而且普通熟练工作人员知道这些方法。将来可以有其它 一些方法。\n由此，通过那些本领域技术人员熟知的方法，可以容易的制备公 开的核苷酸序列的突变的、插入的、和删除的变体。这些变体可以以 与例示引物序列相同的方式使用，只要变体与原始序列具有实质上的 序列同源性即可。如此处所用的，实质上的序列同源性指足够使得变 体探针以与原始探针相同能力发挥功能的同源性。优选的，此同源性 超过50％；更优选的，此同源性超过75％；最优选的，此同源性超过 90％。变体以预计能力发挥功能需要的同源性程度，将取决于序列预 计用途。产生设计用来改进序列的功能或提供方法学优点的突变、插 入、和删除突变的技术，属于本领域训练的技术人员的技术范围之内。\nPCR技术。聚合酶链反应(PCR)是一种反复的、酶催化的、引导性 的核酸序列合成。该过程是公知并被本领域技术人员广泛使用的(参 见，Mullis.美国专利4,683,195、4,683,202和4,800,159；Saiki. Randall K.，Stephen Scharf，Fred Faloona.Kary B.Mullis，Glenn T.Horn，Henry A.Erlich，Norman Artiheim[1985]″诊断镰形细 胞贫血病的β-珠蛋白基因组序列的酶法扩增以及限制位点分析″科 学230：1350-1354.)。PCR基于对侧翼为两个与目的序列相对链可杂 交的寡核苷酸引物的目的DNA片段进行酶法扩增。该引物的方向是3’ 端相对。反复循环的模板热变性、引物与其互补序列退火以及DNA聚 合酶引导的退火引物的延伸使由PCR引物5’末端界定的片段得以扩 增。由于每个引物的延伸产物可以作为另一引物的模板，每次循环基 本能使前一循环产生的DNA片段的量加倍。这就导致特异靶片段的指 数累积，在几个小时内达到几百万倍。通过使用热稳定的DNA聚合酶， 比如Taq聚合酶(其分离自嗜热杆菌水生栖热菌)，扩增过程可以完全 自动化。其他可以使用的酶是本领域技术人员已知的。\n本发明的DNA序列可以作为PCR扩增的引物使用。在进行PCR扩 增中，可以承受引物和模板之间一定程度的错配。因此，例示引物的 突变、删除、和插入(尤其在5’末端加入核苷酸)属于本发明的范围。 通过普通熟练技工知道的方法，可以在给定的引物中产生突变、插入 和删除。\n此处引用的所有文献由此作为参考引用。\n下列实施例举例说明了实行本发明的步骤。不应当把这些实施例 解释为限制。除非特别注明，所有百分比是指重量百分比，而所有溶 剂混合物的比例是指体积比。\n实施例1-根据本发明有用的芽孢杆菌分离物的培养\n含有芽孢杆菌杀虫基因的细胞宿主可以在任何方便的营养培养基 中培养。然后可以用常规方法收获这些细胞。或者，可以在收获之前 对细胞进行处理。\n本发明的芽孢杆菌细胞可以使用常规技术培养基和发酵技术培 养。在发酵循环中，可以使用本领域众所周知的方法，首先从发酵液 中分离芽孢杆菌营养细胞、芽孢、晶体、和裂解细胞碎片，从而收获 细菌。使用众所周知的技术，可以回收形成的任何芽孢杆菌芽孢或δ- 内毒素晶体，并作为传统的B.t.δ-内毒素制备物使用。发酵工艺中 的上清中含有本发明的毒素。使用众所周知的技术分离并纯化毒素。\n芽孢杆菌分离物的传代培养物或它们的突变体，可以用来接种下 面叫做TB的培养基：\n胰蛋白胨    12g/l\n酵母提取物  24g/l\n甘油        4g/l\nKH2PO4   2.1g/l\nK2HPO4   14.7g/l\npH          7.4\n经高压灭菌的培养液冷却后加入磷酸钾。将烧瓶于30℃在旋转摇 床上以250rpm培养24-36小时。\n上述步骤可以通过本领域众所周知的步骤容易的放大至大发酵 罐。\n可以通过本领域众所周知的步骤，分离在上述发酵中得到的芽孢 杆菌。经常使用的步骤是对收获的发酵液进行分离技术，如离心。在 特殊的实施方案中，可以从上清液中得到根据本发明有用的芽孢杆菌 蛋白质。含有活性蛋白质的培养物上清液可以用于生物实验。\n或者，芽孢杆菌分离物的传代培养物或它们的突变体，可以用来 接种下面的蛋白胨、葡萄糖、盐培养基：\n细菌用蛋白胨    7.5g/l\n葡萄糖          1.0g/l\nKH2PO4       3.4g/l\nK2HPO4       4.35g/l\n盐溶液          5.0ml/l\nCaCl2          5.0ml/l\npH              7.2\n盐溶液(100ml)\nMgSO4·7H2O  2.46g\nMnSO4·H2O   0.04g\nZnSO4·7H2O  0.28g\nFeSO4·7H2O  0.40g\nCaCl2溶液(100ml)\nCaCl2·2H2O  3.66g\n将盐溶液和CaCl2溶液过滤除菌，并在接种时加到经高温灭菌的 培养液中。烧瓶于30℃在旋转摇床上以200rpm培养64小时。\n上述步骤可以通过本领域众所周知的步骤容易的放大至大发酵 罐。\n可以通过本领域众所周知的步骤，分离在上述发酵中得到的芽孢 杆菌芽孢和/或晶体。经常使用的步骤是对收获的发酵液进行分离技 术，如离心。\n实施例2-用于PCR的细胞DNA的分离和制备\n可以从在Spizizen氏琼脂或其它本领域技术人员众所周知的基 本或丰富琼脂上培养了大约16小时的细胞制备DNA。Spizizen氏酪蛋 白氨基酸琼脂含有23.2g/l Spizizen氏基本盐[(NH4)2SO4，120g； K2HPO4，840g；KH2PO4，360g；柠檬酸钠，60g；MgSO4·7H2O，12g。合 计：1392g]、1.0g/l不含维生素的酪蛋白氨基酸、15.0g/l Difco琼 脂。在制备琼脂过程中，将混合物高压灭菌30分钟，然后加入无菌的 50％葡萄糖溶液至终浓度0.5％(1/100体积)。一旦细胞培养了大约 16小时，从琼脂上刮取大约1cm2菌苔，加到300μl 10mM Tris-HCl(pH8.0)-1mM EDTA中。加入蛋白酶K至50μg/ml，并于55 ℃温育15分钟。也可以使用其它适当的无核酸酶活性的蛋白酶。然后 将样品置于沸水浴中15分钟，使蛋白酶失活并使DNA变性。这还使不 想要的成分沉淀。然后将样品于14,000g在Eppendorf微量离心机中 于室温离心5分钟，除去细胞碎片。将含有粗制DNA的上清液转移到 新管中，并冻存于-20℃直至用于PCR反应。\n或者，可以使用购自Qiagen(Santa Clarita，CA)的QIAamp Tissue Kit，依照制造商的说明书，从平板培养的细胞制备总细胞DNA。\n实施例3-对分析和/或鉴定毒素基因有用的引物\n下面的PCR引物对可以用于鉴定和/或分析编码杀虫毒素的本发 明的基因：\nGGRTTAMTTGGRTAYTATTT(SEQ ID NO.3)\nATATCKWAYATTKGCATTTA(SEQ ID NO.4)\n本发明公开的序列中的冗余核苷酸密码子与IUPAC协定一致，并 且包括：\nR＝A或G\nM＝A或C\nY＝C或T\nK＝G或T\nW＝A或T\n实施例4-编码来自芽孢杆菌菌株的新可溶性蛋白质毒素的基因的鉴 定和测序\n在从广泛的B.t.菌株分离得到的总细胞基因组DNA上，使用引物 SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4进行PCR。选择那些产生大约1kb条带 的样品，通过DNA测序进行分析。首先，如供应商(Invitrogen，San Diego，CA)所述，将扩增的DNA片段克隆到PCR DNA TA-克隆质粒载 体pCR2.1中。从重组克隆中分离质粒，并使用质粒载体引物T3和T7 通过PCR测试大约1kbp插入片段的存在。\n下列菌株产生期望的大约1000bp条带，由此说明MIS类毒素基因 的存在：PS66D3、PS177C8、PS177I8、PS33F1、PS157C1(PS157C1-A)、 PS201Z、PS31F2、和PS185Y2。\n然后使用QIAGEN(Santa Clarita，CA)微量制备试剂盒，如供 应商所述分离质粒作为测序模板使用。使用购自PE Applied Biosystems的Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit，在ABI PRISM 377Automated Sequencer上，进行测序反应。 使用购自PE ABI的ABI PRISM 377 Collection、Factura、和 AutoAssembler软件收集、编辑、并装配序列数据。\n测定了来自下列分离物的新毒素基因部分的DNA序列：PS66D3、 PS177C8、PS177I8、PS33F1、PS157C1(157C1-A)、PS201Z、PS31F2、 和PS185Y2。这些核苷酸序列分别显示于SEQ ID NO.5、7、9、38、33、 35、36、和37。推导了编码的、来自下列分离物的新可溶性毒素部分 的多肽序列：PS66D3、PS177C8、PS177I8、和PS157C1(毒素157C1-A)。 这些核苷酸序列分别显示于SEQ ID NO.6、8、10、和34。\n实施例5-来自苏云金芽孢杆菌菌株的毒素的限制性片段长度多态性 (Restriction  Fragment Length Polymorphism，RFLP)\n从培养至600nm可见光处的光密度为0.5-0.8的各种苏云金芽孢 杆菌(B.t.)菌株制备总细胞DNA。使用Qiagen Genomic-tip 500/G kit 和Genomic DNA Buffer Set，根据用于革兰氏阳性细菌的方案(Qiagen Inc.，Valencia，CA)，提取DNA。\n在总基因组DNA制备物中，用常规Southern杂交(使用32P标记 的探针)鉴定和分析新的毒素基因。将制备的总基因组DNA用各种限 制酶消化、在1％琼脂糖凝胶上电泳、并使用常规方法固定到支持尼 龙膜上(Maniatis等人)。\n将PCR扩增的长度为1.0-1.1kb的DNA片段凝胶纯化，作为探 针使用。使用DNA聚合酶I Klenow片段(New England Biolabs)、 随机六核苷酸引物(Boehringer Mannheim)32P dCTP，每种DNA片 段大约25ng作为模板，用来引发DNA合成。\n每种32P标记的片段充当针对相应基因组DNA印渍的特异探针。经 固定的DNA与随机标记的32P探针的杂交，在由5X SSPE、5X Denhardt’s 溶液、0.5％SDS、0.1mg/ml组成的常规含水缓冲液中，于65℃进行过 夜。在中等严谨条件下，在0.2X SSC、0.1％SDS中于65℃清洗印渍， 并对胶片曝光。得到每种菌株的显示特异杂交条带(包含所有或部分 感兴趣的新基因)的RFLP数据。\n                               表3   (菌株)/   基因名   探针的   序列编号   RFLP数据(大致条带大小)   (PS)66D3   24   BamH I：4.5kbp，HindIII：＞23kbp，Kpn I：23kbp，   Pst I：15kbp，Xba I：＞23kbp   (PS)177I8   33   BamH I：＞23kbp，EcoR I：10kbp，Hind III：2kbp，   Sal I：＞23kbp，Xba I：3.5kbp\n在单独的实验中，通过32P自显影或通过使用DIG核酸标记和检测 系统(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)的非放射性方法， 分别使用MIS和WAR基因的探针，在基因组DNA的Southern印渍上检 测新的毒素基因。从质粒pMYC2450中，使用与相应基因5’和3’末端 同源的引物，PCR扩增长度大约为2.6kbp(PS177C8 MIS毒素基因； SEQ ID NO.7)和1.3kbp(PS177C8 WAR毒素基因；SEQ ID NO.11) 的DNA片段。pMYC2450是在pHTBlue II(包含pBluescript S/K[Stratagene，La Jolla，CA]和来自B.t.常住质粒的复制起点的 大肠杆菌/苏云金芽孢杆菌穿梭载体[D.Lereclus等人1989，FEMS微 生物学通讯60：211-218])含有大约14kbp Cla I片段上的PS177C8 MIS和WAR基因的重组质粒。将这些DNA片段作为MIS RFLP类型A-N 和WAR RFLP类型A-L的探针使用。表4中类型0的RFLP数据是使用 引物S1-633F(CACTCAAAAAATGAAAAGGGAAA；SEQ ID NO.39)和S1-2269R (CCGGTTTTATTGATGCTAC；SEQ ID NO.40)扩增的、大约1636bp的MIS 片段产生的。表5中类型M的RFLP数据是使用引物S2-501F (AGAACAATTTTTAGATAGGG；SEQ ID NO.41)和S2-995R (TCCCTAAAGCATCAGAAATA；SEQ ID NO.42)扩增的、大约495bp的WAR 片段产生的。\n将片段凝胶纯化，每种DNA片段取大约25ng用32P随机标记用于 放射性检测，或者取300ng用DIG High Prime kit随机标记用于非 放射性检测。经固定的DNA与随机标记的32P探针的杂交，在常规甲酰 胺条件：50％甲酰胺、5X SSPE、5X Denhardt’s溶液、2％SDS、0.1mg/ml 经超声波降解的精子DNA中，于42℃进行过夜。在低严谨条件下，在 2X SSC、0.1％SDS中于42℃清洗印渍，并对胶片曝光。得到每种菌株 的显示DNA条带(包含所有或部分感兴趣的新基因)的RFLP数据。\n如上所述使用MIS探针的RFLP数据如下：\n                                      表4   RFLP   类型   菌株名   RFLP数据(大致条带大小，单位：碱基对)   A   177C8，74H3，66D3   HindIII：2,454；1,645   XbaI：14,820；9,612；8,138；5,642；   1,440   B   177I8   HindIII：2,454   XbaI：3,500(很弱7,000)   C   66D3   HindIII：2,454(弱20,000)   XbaI：3,500(弱7,000)   D   28M，31F2，71G5，   71G7，71I1，71N1，   146F，185Y2，201JJ7，   KB73，KB68B46-2，   KB71A35-4，   KB71A116-1   HindIII：11,738；7,614   XbaI：10,622；6,030   D1   70B2，71C2   HindIII：11,738；8,698；7,614   XbaI：11,354；10,622；6,030   E   KB68B51-2，KB68B55-   2   HindIII：6,975；2,527   XbaI：10,000；6,144   F   KB53A49-4   HindIII：5,766   XbaI：6,757   G   86D1   HindIII：4,920   XbaI：11,961   H   HD573B，33F1，67B3   HindIII：6,558；1,978   XbaI：7,815；6,558   I   205C，40C1   HindIII：6,752   XbaI：4,618   J   130A3，143A2，157C1   HindIII：9,639；3,943，1,954；1,210   XbaI：7,005；6,165；4,480；3,699   K   201Z   HindIII：9,639；4,339   XbaI：7,232；6,365   L   71G4   HindIII：7,005   XbaI：9.639   M   KB42A33-8，KB71A72-   1，KB71A133-11   HindIII：3,721   XbaI：3,274   N   KB71A134-2   HindIII：7,523   XbaI：10,360；3,490   O   KB69A125-3，   KB69A127-7，   KB69A136-2，   KB71A20-4   HindIII：6,360；3,726；1,874；1,098   XbaI：6,360；5,893；5,058；3,726 如上所述使用WAR探针的RFLP数据如下：\n                             表5   RFLP   类型   菌株名   RFLP数据(大致条带大小，单位：碱基对)   A   177C8，74H3   HindIII：3,659，2,454，606   XbaI：5,457，4,469，1,440，966   B   177I8，66D3   数据难以获得   C   28M，31F2，71G5，71G7，71I1，   71N1，146F，185Y2，201JJ7，   KB73，KB68B46-2，KB71A35-   4，KB71A116-1   HindIII：7,614   XbaI：10,982，6,235   C1   70B2，71C2   HindIII：8,698，7,614   XbaI：11,354，6,235   D   KB68B51-2，KB68B55-2   HindIII：7,200   Xba1：6,342   (51-2有11,225)(55-2有9,888)   E   KB53A49-4   HindIII：5,766   XbaI：6,757   F   HD573B，33F1，67B3   HindIII：3,348，2,037   (只有HD573B有6,558)   XbaI：6,953   (只有HD573B有7,815；6,185)   G   205C，40C1   HindIII：3,158   XbaI：6,558，2,809   H   130A3，143A2，157C1   HindIII：4,339，3,361，1,954，   660，349   XbaI：9.043，4,203，3,583，   2,958，581，464   I   201Z   HindIII：4,480，3,819，703   XbaI：9,336，3,256，495   J   71G4   HindIII：7,005   XbaI：9,639   K   KB42A33-8，KB71A72-1，   KB71A133-11   没有杂交信号   L   KB71A134-2   HindIII：7,523   XbaI：10,360   M   KB69A125-3，KB69A127-7，   KB69A136-2，   KB71A20-4   HindIII：5,058；3,726；3,198；   2,745；257   XbaI：5,255；4,341；3,452；1,490；   474\n实施例6-WAR毒素的分析和/或鉴定\n在本发明的另一个实施方案中，可以通过杀虫毒素与此处例示的杀 虫毒素抗体的反应水平来进行分析和/或鉴定。在特殊的实施方案中， 可以制备针对WAR毒素(诸如可从PS177C8a得到的毒素)的抗体。然 后其它WAR毒素可以通过与这些抗体的反应来进行鉴定和/或分析。在 优选的实施方案中，抗体是多克隆抗体。在这个实施例中，与177C8a-WAR 毒素具有最大相似性的毒素，应该与多克隆抗体有最大反应性。具有 较大差异的WAR毒素与177C8a多克隆抗体发生反应，但是程度较弱。 可以从例如命名为PS177C8a，PS177I8，PS66D3，KB68B55-2，PS185Y2，KB53A49-4， KB68B51-2，PS31F2，PS74H3，PS28M，PS71G6，PS71G7，PS71I1，PS71N1，PS201JJ7， KB73，KB68B46-2，KB71A35-4，KB71A116-1，PS70B2，PS71C2，PS86D1，HD573B， PS33F1，PS67B3，PS205C，PS40C1，PS130A3，PS143A2，PS157C1，PS201Z，PS71G4， KB42A33-8，KB71A72-1，KB71A133-11，KB71A134-2，KB69A125-3，KB69A127-7， KB69A 136-2， 和KB71A20-4的分离物，得到与针对177C8a WAR毒素的多克隆抗体发 生免疫反应的毒素。分离物PS31F2和KB68B46-2显示非常微弱的抗体 反应，暗示有差异。\n实施例7-来自苏云金芽孢杆菌菌株PS205C的可溶性杀虫蛋白质(MIS 和WAR)基因的分子克隆和DNA序列分析\n从在Luria Bertani(LB)培养液中培养至600nm可见光处的光 密度为0.5-0.8的苏云金芽孢杆菌菌株PS205C制备总细胞DNA。使 用Qiagen Genomic-tip 500/G kit和Genomic DNA Buffer Set，根 据用于革兰氏阳性细菌的方案(Qiagen Inc.，Valencia，CA)提取 DNA。使用PS205C总细胞DNA经Nde II部分消化的插入片段，在 SuperCos载体(Stratagene)中构建了PS205C粘粒文库。将经包装 的粘粒转染XL1-Blue细胞(Stratagene)，得到抗羧苄青霉素和卡那 霉素的克隆。576个粘粒菌落在96孔板中、1ml LB+羧苄青霉素(100 μg/ml)+卡那霉素(50μg/ml)中于37℃培养18小时，并将平板复 制到尼龙滤膜上用于杂交筛选。\n如实施例4所述，使用引物SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，从PS205 基因组DNA扩增得到包含大约1000bp PS205C MIS基因的PCR扩增子。 使用Qiaex II extraction(Qiagen)，将DNA片段凝胶纯化。使用 Prime-It II kit(Stratagene)，用32P-dCTP对探针进行放射性标记， 并与菌落复制滤膜在含水杂交溶液(6X SSPE、5X Denhardt氏溶液、 0.1％SDS、0.1mg/ml变性DNA)于65℃杂交16小时。将菌落复制滤 膜用2XSSC/0.1％SDS于室温简单洗一次，随后再在0.5XSSC/0.1％SDS 中洗10分钟两次。然后用滤膜使X光胶片曝光5.5小时。选择与探针 强杂交的一个粘粒克隆，进行进一步的分析。通过使用引物SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4的PCR扩增，确认了这个粘粒克隆包含MIS基因。 这个粘粒克隆命名为pMYC3105；包含pMYC3105的重组大肠杆菌 XL-Blue MR细胞命名为MR992。\nMR992的传代培养物于1999年5月4日保存于专利培养物收藏中 心(NRRL)，Regional Research Center，1815 North University Street，Peoria，Illinois，61604美国。编号是NRRL B-30124。PS205C 经截短的质粒克隆也于1999年5月4日收存。编号是NRRL B-30122。\n为了对PS205C MIS和WAR基因进行测序，使用GPS-1Genome Priming System和方案(New England Biolabs)产生了pMYC3105 的随机转座子插入。选择编码氯霉素抗性的GPS2转座载体用于选择包 含插入的粘粒。通过转化和在含有氨苄青霉素、卡那霉素和氯霉素的 培养基上选择大肠杆菌XL1-Blue细胞，鉴定获得了转座子的pMYC3105 粘粒。使用Multiscreen 96-well plasmid prep(Millipore)，从单 个菌落制备粘粒模板，作为测序模板使用。使用ABI377自动测序系统 和相关软件，用GPS2引物对pMYC3105编码的MIS和WAR毒素基因进 行测序。发现MIS和WAR基因在一个表观转录操纵子中彼此相邻。其 核苷酸和推导的多肽序列命名为SEQ ID NO.43-46。\n实施例8-来自苏云金芽孢杆菌菌株PS31F2的可溶性杀虫蛋白质(MIS 和WAR)基因的分子克隆和DNA序列分析\na.基因组DNA的制备和克隆\n从在Luria Bertani(LB)培养液中培养至600nm可见光的光 学密度为0.5-0.8的苏云金芽孢杆菌菌株PS31F2制备总细胞DNA。 使用Qiagen Genomic-tip 500/G kit或Genomic-tip 20/G和Genomic DNA Buffer Set(Qiagen Inc.，Valencia，CA)，根据用于革兰氏阳 性细菌的方案，提取DNA。\n由经Nde II部分消化的DNA制备包含来自苏云金芽孢杆菌菌株 PS31F2的总基因组DNA的λ文库。在0.7％琼脂糖凝胶上进行部分Nde II限制性消化产物的电泳，从凝胶上切下包含DNA片段大小范围为9 -20kbp的区域。在0.1X TAE缓冲液中，于大约30V进行-小时，将 DNA从凝胶块上电洗脱下来，并使用Elutip-d层析柱(Schleicher 和Schuell；Keene，NH)纯化。\n将经纯化、片段化的DNA连接到经BamH I消化的λ-GEM-11臂 (Promega Corp.，Madison，WI)中。然后使用GigapackIII Gold packaging extract(Stratagene Corp.，La Jolla，CA)将经连接 的DNA包装成λ噬菌体。用重组噬菌体感染大肠杆菌菌株KW251，并 在LB顶层琼脂中铺到LB平板上。将噬斑复制到硝酸纤维素滤膜上， 并准备用于使用常规方法(Maniatis等人)的杂交。从质粒pMYC2450 中PCR扩增长度大约为1.1kb(PS177C8MIS)或700bp(PS177C8WAR) 的DNA片段，作为探针使用。将片段凝胶纯化，并且每种DNA片段取 大约25ng，用32P-dCTP进行随机标记。经固定的DNA与随机32P标记 的PS177C8探针的杂交在常规甲酰胺条件：50％甲酰胺、5X SSPE、5X Denhardt氏溶液、2％SDS、0.1mg/ml中，于42℃进行过夜。在低严 谨条件下，在2X SSC、0.1％SDS中于42℃清洗印渍，并使对胶曝光。 从平板上分离杂交噬斑，并重悬于SM缓冲液。使用LambdaSorb phage adsorbent(Promega，Madison，WI)制备噬菌体DNA。使用寡核苷酸 引物SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，噬菌体DNA模板，进行PCR以检 验目的基因的存在。两份DNA样品的PCR反应都产生期望的1kb条带， 确认了那些噬菌体克隆含有感兴趣的基因。为进行亚克隆，将噬菌体 DNA用各种酶消化、在1％琼脂糖凝胶上分离、并转膜用于Southern 分析。如上所述进行Southern分析。鉴定了大小大约为8kb的Hind III片段含有PS31F2毒素基因。将这个片段凝胶纯化，并克隆到 pBluescriptII(SK+)的HindIII位点；这个质粒克隆命名为pMYC2610。 重组大肠杆菌XL10 Gold[pMYC2610]菌株命名为MR983。\nMR983的传代培养物于1999年5月4日保存于专利培养物收藏中 心(NRRL)，Regional Research Center，1815North University Street，Peoria，Illinois，61604美国。编号是NRRL B-30123。\n                    b.DNA测序\n通过限制性消化、在0.7％琼脂糖凝胶上分离、并使用QiaexII kit(Qiagen Inc.；Valencia，CA)从凝胶基质上纯化，分离了含有 PS31F2毒素基因的pMYC2610 HindIII片段。然后将经凝胶纯化的插入 DNA，分别用限制酶Alu I、Mse I、或Rsa I消化，并在1％琼脂糖凝 胶上分离。从凝胶上切下0.5-1.5kb之间的DNA片段，并使用Qiaex II kit纯化。将回收的片段连接到经EcoR V消化的pBluescript II中， 并转化到大肠杆菌XL10 Gold细胞中。从随机选择的转化体制备质粒 DNA，用Not I和Apa I消化以检验插入片段的大小，并作为测序模板 和与质粒载体序列同源的引物一起使用。由引物步行法(primer walking)来完成序列。使用dRhodamine或BigDye Sequencing kit (ABI Prism/Perkin Elmer Applied Biosystems)，并在ABI 373或 377自动测序仪上进行测序反应。使用Factura、Autoassembler(ABI Prism)和Gentics Computer Group(Madison，WI)程序分析数据。 发现MIS和WAR基因在一个表观转录操纵子中彼此相邻。WAR基因位 于MIS基因的5’，并且两个基因被4个核苷酸碱基分开。\n来自PS31F2的新的MIS和WAR基因的核苷酸序列和推导的肽序列 报导于新的SEQ ID NO.47-50。\n      c.苏云金芽孢杆菌的亚克隆和转化\n为了在天然的芽孢杆菌启动子后表达，通过8kb的HindIII片段， 将PS31F2毒素基因从pMYC2610亚克隆到大肠杆菌/苏云金芽孢杆菌穿 梭载体pHT370(O.Arantes和D.Lereclus，1991，基因108：115- 119)中。得到的质粒构建物命名为pMYC2615。从重组大肠杆菌XL10 Gold制备pMYC2415质粒DNA，通过电穿孔转化无晶体(Cry-)苏云金 芽孢杆菌宿主CryB(A.Aronson，Purdue University，West Lafayette， IN)。重组CryB[pMYC2615]菌株命名为MR558。\n实施例9-来自苏云金芽孢杆菌菌株KB59A4-6的新的SUP毒素基因的 分子克隆和DNA序列分析\n从在Luria Bertani(LB)培养液中培养至600nm可见处的光学密度 为0.5-0.8的苏云金芽孢杆菌菌株KB59A4-6制备总细胞DNA。使用Qiagen Genomic-tip 500/G kit和Genomic DNA Buffer Set，根据用于革兰氏阳 性细菌的方案(Qiagen Inc.；Valencia，CA)提取DNA。将DNA用Hind III消化，并进行0.7％琼脂糖凝胶电泳，用于常规方法(Maniatis等人) 的Southern印渍分析。使用寡核苷酸“3A-atg” (GCTCTAGAAGGAGGTAACTTATGAACAAGAATAATACTAAATTAAGC)(SEQ ID NO.51) 和“3A-taa”(GGGGTACCTTACTTAATAGAGACATCG)(SEQ ID NO.52)，得到含 有来自Javelin-90基因组DNA的SUP类基因(SEQ ID NO.1)的PCR扩增 子。将这个DNA片段凝胶纯化，并使用Prime-It II Random Primer Labeling Kit(Stratagene)用放射性的32P-dCTP进行标记，作为探针使 用。Southern印渍滤膜的杂交，在溶液6X SSPE、5X Denhardt氏溶液、 0.1％SDS、0.1mg/ml变性DNA中，在振摇水浴中于42℃进行过夜。随后将 滤膜在1X SSPE和0.1％SDS中于25℃清洗一次，随后于37℃清洗两次。 然后用经杂交的滤膜对X光胶片于-80℃曝光。鉴定了KB59A4-6基因组DNA 大约1kbp的HindIII片段与Javelin 90SUP探针杂交。\n如下构建了KB59A4-6基因组DNA的λ文库。将DNA用Sau3A部分 消化，并在琼脂糖凝胶上进行大小分离。切下含有9.0-23kbp之间片 段的凝胶区域，并通过在0.1X TAE缓冲液中电洗脱来分离DNA，随后 使用Elutip-d层析柱(Schleicher和Schuell，Keene，NH)纯化。 将经大小分离的DNA插入片段连接到经BamH I消化的λ-Gem 11 (Promega)中，并使用GigapackIII XL Packing Extract(Stratagene) 包装重组噬菌体。将噬菌体铺在大肠杆菌VCS257细胞上，用于杂交筛 选。将噬斑转移到尼龙滤膜上，并在真空中于80℃干燥。然后如上所 述与Javelin 90Sup基因探针进行杂交。选择给出阳性信号的一个噬 斑，使用巴斯德移液管得到一个栓子。将栓子在1mL SM缓冲液+10μL CHCl3中于室温浸泡过夜。从用这种噬菌体感染的大肠杆菌KW251裂解 液中得到大量噬菌体DNA的制备物(Maniatis等人)。\n通过经Southern杂交鉴定的大约5.5kbp Sac I/Xba I片段，将 KB59A4-6毒素基因亚克隆到大肠杆菌/苏云金芽孢杆菌穿梭载体 pHT370(O.Arantes和D.Lereclus，1991，Gene基因108：115-119) 中。这个质粒亚克隆命名为pMYC2473。含有这种构建物的重组大肠杆 菌XL10-Gold细胞(Stratagene)命名为MR993。使用pMYC2473质粒 和PCR扩增子作为DNA模板，通过引物前行法对杀虫毒素基因测序。 使用购自PE Applied Biosystems的Dye Terminator Cycle Sequencing Ready Reaction Kit，在ABI PRISM 377 Automated Sequencer上进行测序反应。使用PE ABI PRISM 377 Collection、 Factura、和AutoAssembler软件分析序列数据。KB59A4-6毒素的DNA 序列和推导的肽序列分别报导于新的SEQ ID NO.53和SEQ ID NO.54。\nMR993的传代培养物于1999年5月4日保存于专利培养物收藏中 心(NRRL)，Regional Research Center，1815 North University Street，Peoria，Illinois，61604美国。编号是NRRL B-30125。\n实施例10-测试针对鳞翅目昆虫和鞘翅目昆虫的活性的生物实验\n使用常规生物实验步骤，可以确认本发明的分离物和毒素的生物 学活性。一种这样的实验是烟芽夜蛾-棉铃虫(Heliothis virescens[Fabricius]和Helicoverpa zea[Boddie])实验。通过施 用到人工昆虫食物表面，或食物中掺入样品，进行鳞翅目生物实验。 测试了所有鳞翅目昆虫，从初生阶段到二龄。用烤大豆粉人工食物或 小地虎人工食物(BioServ，Frenchtown，NJ)进行所有实验。\n可以通过将样品与人工食物以6mL悬浮液+54mL食物的比例混和进行 食物掺入。漩涡混匀后，将这种混合物倒入划分成3ml孔的塑料盘 (Nutrend Container Corporation，Jacksonyille，FL)。不含B.t.的水 空白作为对照使用。将一龄幼虫(USDA-ARS，Stoneyille，MS)置于食物 混合物上。然后用Mylar薄膜(ClearLam Packaging，IL)和烙铁将孔封 闭，并在每个孔上戳几个针孔以提供气体交换。将幼虫在14∶10(白天∶ 黑夜)饲养间中于25℃放置6天。六天后记录死亡率和发育迟缓率。\n通过表面施药方法的生物实验，使用如上所列相同的样品和食物 制备物。将样品施用到昆虫食物表面。在特殊的实施方案中，表面面 积范围为0.3-大约0.8cm2(取决于盘子的大小)，除了上面列出的形 式，还使用96孔组织培养板。施药后，在昆虫食用前，将样品在空气 中干燥。不含B.t.的水空白可以作为对照使用。将虫卵置于每个经处 理的孔中，然后用Mylar薄膜(ClearLam Packaging，IL)和烙铁将 孔封闭，并在每个孔上戳几个针孔以提供气体交换。生物实验在14∶ 10(白天∶黑夜)饲养间中于25℃进行7天或于28℃进行4天。在每 个生物实验的最后记录死亡率和昆虫发育迟缓现象。\n根据本发明有用的另一个实验是玉米幼芽根叶甲(western corn rootworm)实验。通过将样品以160ml/cm2的比例施用到基于琼脂的 人工食物表面上，可以进行样品对抗初生的玉米幼芽根叶甲幼虫 (Diabrotica virgifera virgifera)的生物实验。人工食物可以分 发到48孔组织培养板或相似板的0.78cm2孔中，并使其变硬。食物固 化后，将样品用移液管分发到食物表面。然后从表面蒸发掉过量的液 体，再用骆驼毛刷向每个孔的食物表面上转移大约三个初生的幼虫。 为了防止昆虫在气体交换时逃跑，孔用2-mil打孔的聚酯薄膜和27HT 粘合剂(Oliver Product Company，Grand Rapids，Michigan)热封。 生物实验在黑暗中于25℃进行，并在四天后记录死亡率。\n可以由那些本领域的技术人员进行类似的生物实验，以评定对其 它害虫，诸如小地虎(Agrotis ipsilon)的活性。\n结果显示于表6。\n表6.筛选鳞翅类和鞘翅类活性的经浓缩的B.t.上清液的功能和遗传学   菌株   大约   339bp   PCR片段   总蛋白质   (μg/cm2)   约80-100kDa   蛋白质   (μg/cm2)   烟芽夜蛾   H.virescens   棉铃虫   H.zen   Diabrotica   ％死亡率   ％死亡率   发育迟缓   ％死亡率   发育迟缓   PS157C1(#1)   -   24   2   43   是   13   是   -   PS157C1(#2)   -   93   8   -   -   -   -   40   PS157C1(#3)   -   35   3   -   -   -   -   18   Javelin 1990   ++   43.2   3.6   100   是   96   是   NT   水   0-8   -   0-4   -   12\n实施例11-玉米幼芽根叶甲生物实验的结果和毒素的进一步分析\n测试根据本发明得到的经浓缩的液体上清液溶液对抗玉米幼芽根 叶甲(WCRW)的活性。发现来自下列分离物的上清液引起WCRW死亡： PS31F2、PS66D3、PS177I8、KB53A49-4、KB68B46-2、KB68B51-2、 KB68B55-2、和PS177C8。\n还发现来自下列分离物的上清液引起WCRW死亡：PS205A3、 PS185V2、PS234E1、PS71G4、PS248N10、PS191A21、KB63B19-13、 KB63B19-7、KB68B62-7、KB68B63-2、KB69A125-1、KB69A125-3、 KB69A125-5、KB69A127-7、KB69A132-1、KB69B2-1、KB70B5-3、 KB71A125-15、和KB71A35-6；确认了这种活性是热不稳定的。而且， 确定了下列分离物的上清液与WAR抗体(见实施例12)不发生反应(产 生阴性测试结果)，并且与MIS(SEQ ID NO.31)和WAR(SEQ ID NO.51) 探针不发生反应：PS205A3、PS185V2、PS234E1、PS71G4、PS248N10、 PS191A21、KB63B19-13、KB63B19-7、KB68B62-7、KB68B63-2、 KB69A125-1、KB69A125-5、KB69A132-1、KB69B2-1、KB70B5-3、 KB71A125-15、和KB71A35-6；分离物KB69A125-3和KB69A127-7的上 清液产生阳性测试结果。\n实施例12-31F2克隆的培养和31F2毒素对玉米幼芽根叶甲(wCRW) 的生物实验\n在装有50ml DIFCO Terrific Broth培养基的250ml底部带挡板 烧瓶中，培养大肠杆菌MR983和阴性对照菌株MR948(大肠杆菌 XL1-Blue[pSupercos]；载体对照)。培养物在New Brunswick摇床中， 以250rpm振摇，于30℃温育～23小时。温育23小时后，无菌操作吸 取样品，在显微镜下检查培养物，以检查污染物的存在。将30ml培养 物分装到50ml离心管中，并在Sorvall离心机中于15,000rpm离心 20分钟。保存1X上清液，并用于对抗wCRW的生物实验。将沉淀5× 重悬于10mM Tris缓冲液中，并在用于对抗wCRW的生物实验之前超声 波处理。\n以相同方式培养(除了从Terrific Broth培养基中省去甘油)B.t. 菌株MR558和阴性对照MR539(B.t.cryB[pHT BlueII]；载体对照)。 在超声波破碎之前，将B.t.细胞沉淀重悬于水而非缓冲液中。\n使用与实施例10中用于玉米幼芽根叶甲的相同的实验设计(除了 将上清液样品以～160μl/cm2的剂量施用到食物表面上)，进行含有 31F2毒素基因的大肠杆菌克隆MR983和苏云金芽孢杆菌克隆MR558的 实验。对于两个克隆，将5X浓度的B.t.细胞沉淀样品以～150和～ 75μl/cm2的剂量施用到食物表面上，MR558苏云金芽孢杆菌克隆以～ 35μl/cm2的剂量施用(两个克隆的有活性的毒素量未知)。将样品蒸发 之后，立即将大约6-8个幼虫转移到食物上。用Mylar薄膜和烙铁将 生物实验板封闭，并在每个孔上戳针孔以提供气体交换。与毒素阴性 克隆MR948和MR539相比，MR983和MR558克隆都证明了对抗玉米幼 芽根叶甲的生物活性程度(较大的死亡率)。\n表7列出了显示克隆的PS31F2毒素对玉米幼芽根叶甲的生物活性 的结果。\n                                       表7    wCRW死亡        百分比   上清液   沉淀5X   沉淀5X   沉淀5X   菌株   毒素   基因   比率      160ul/cm2   150ul/cm2   75ul/cm2   35ul/cm2   MR983   31F2   7％   (4/56)   19％   (5/27)   --   --   MR948   无   4％   (1/24)   26％   (6/23)   --   --   MR983   31F2   3％(5/147)   --   20％   (49/245)   --   MR948   无   27％(19/70)   --   51％   (79/154)   --   MR983   31F2   13％(32/243)   --   33％   (85/259)   --   MR948   无   9％(14/155)   --   20％   (55/273)   --   MR558   31F2   35％(41/118)   88％   (43/49)   9％(9/100)   13％(13/97)   MR539   无   10％(14/134)   14％   (3/21)   15％   (17/111)   17％(19/111)   MR558   31F2   3％(1/29)   35％(17/   48)   29％(15/52)   13％(7/55)   MR539   无   19％(5/27)   20％(9/   46)   31％(18/   57)   18％(9/49)   MR558   31F2   13％(9/69)   38％(19/   50)   18％(15/   85)   15％(10/65)   MR539   无   29％(16/55)   24％(14/   58)   14％(13/   91)   28％(18/64)   MR558   31F2   7％(5/74)   14％   (9/66)   17％(14/83)   11％(6/57)   MR539   无   11％(9/79)   32％   (19/59)   9％(7/78)   15％(10/67)\n实施例13-目的害虫\n本发明的毒素可以单独或与其它毒素组合使用来控制一种或多种 非哺乳动物害虫。这些害虫可能是例如那些列于表8中的。使用此处 提供的生物实验、这些实验的改进、和/或本领域技术人员熟知的其它 生物实验，可以容易的确定活性。\n                            表8.目的害虫种类   目/俗名(英)   拉丁名   鳞翅目(LEPIDOPTERA)   欧洲玉米螟(European Corn Borer)   对Cry1A类毒素有抗性的欧洲玉米螟   小地虎(Black Cutworm)   秋粘虫(Fall Armyworm)   巨座玉米螟(Southwestern Corn Borer)   谷实夜蛾/棉铃虫(Corn Earworm/Bollworm)   烟芽夜蛾(Tobacco Budworm)   对Cry1A类毒素有抗性的烟芽夜蛾   向日葵同斑螟(Sunflower Head Moth)   向日葵细卷叶蛾(Banded Sunflower Moth)   阿根廷尺蠖(Argentine Looper)   灯蛾(Spilosoma)   披肩粘虫(Bertha Armyworm)   小菜蛾(Diamondback Moth)   对Cry1A类毒素有抗性的小菜蛾   Ostrinia nubilalis   Ostrinia nubilalis   Agrotis ipsilon   Spodoptera   frugiperda   Diatraea   grandiosella   Helicoverpa zea   Heliothis virescens   Heliothis virescens   Homeosoma   ellectellum   Cochylis hospes   Rachiplusia nu   Spilosoma virginica   Mamestra configurata   Plutella xylostells   Plutella xylostells   鞘翅目(COLEOPTERA)   向日葵籽象甲(Red Sunflower Seed Weevil)   向日葵枝象甲(Sunflower Stem Weevil)   向日葵叶甲(Sunflowe Beetle)   芜菁菜跳甲(Canola Flea Beetle)   玉米幼芽根叶甲(Western Corn Rootworm)   Smicronyx fulvus   Cylindrocopturus   adspersus   Zygoramma   exclamationis   Phyllotreta   cruciferae   Diabrotica virgifera   virgifera   双翅目(DIPTERA)   小麦瘿蚊(Hessian Fly)   Mayetiola destructor   同翅目HOMOPTERA   麦二岔蚜(Greenbug)   Schizaphis graminum   半翅目(HEMIPTERA)   豆荚草盲蝽(Lygus Bug)   线虫(Nematoda)   Lygus lineolaris   Heterodera glycines\n实施例14-将毒素基因插入植物\n本发明的一个方面是用本发明的杀虫毒素的编码基因转化植物。 经转化的植物具有针对目的害虫攻击的抵抗力。\n使用本领域众所周知的技术，可以将杀虫毒素的编码基因，如此 处公开的，插入到植物细胞里。例如，可获得大量的包含大肠杆菌中 的复制系统和可用于进行转化细胞选择的标记的克隆载体，用于制备 插入到高等植物中的外源基因。这些载体包括，例如，pBR322、pUC 系列、M13mp系列、pACYC184等等。相应的，可以将芽孢杆菌毒素的 编码序列插入到载体的合适限制性位点。将得到的载体用于转化大肠 杆菌。将大肠杆菌细胞在合适的营养培养基中培养，然后收获并裂解。 回收质粒。通常进行序列分析、限制性分析、电泳、和其它生化-分 子生物学方法作为分析方法。每步操作后，可以将使用的DNA序列切 下并与下一个DNA序列连接。每种质粒序列可以克隆到相同或其它质 粒中。取决于将想要的基因插入到植物中的方法，其它DNA序列可能 是必需的。如果，例如，使用Ti或Ri质粒转化植物细胞，那么必需 连接至少Ti或Ri质粒T-DNA的右边界序列，但是经常同时连接右和 左边界序列，作为将要插入的基因的侧翼区域。\n使用T-DNA转化植物细胞，已经深入研究并充分描述于EP 120 516；Hoekema(1985)：The Binary Plant Vector System，Offset- durkkerij Kanters B.V.，Alblasserdam，第5章；Fraley等人，Crit. Rev.Plant Sci.4：1-46；和An等人(1985)EMBO J4：277-287。\n一旦插入的DNA已经整合到基因组中，它在那儿相对稳定，并且 原则上不再出来。它通常含有选择性标记，赋予经转化的植物细胞以 对杀生物剂(biocide)或抗生素(诸如卡那霉素、G418、博来霉素、 潮霉素、或氯霉素及其它)的抗性。单独应用的标记应当相应的允许 选择经转化的细胞，而非不含插入DNA的细胞。\n可以获得大量的技术用于将DNA插入到植物宿主细胞中。那些技 术包括使用根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)或发根土 壤杆菌(Agrobacterium rhizogenes)作为转化剂用T-DNA转化、嵌 合、注射、biolistics(微粒轰击)、或电穿孔以及其它可能的方法。 如果使用土壤杆菌转化，要插入的DNA必需克隆到特殊质粒，即中间 载体或二元载体中。由于有与T-DNA序列同源的序列，中间载体可通 过同源重组整合到Ti或Ri质粒中。Ti和Ri质粒还包含T-DNA转移 必需的vir区。中间载体自身在土壤杆菌中不能复制。通过辅助质粒 的方法(接合)，中间载体可以转移到根瘤土壤杆菌中。二元载体自身 可以在大肠杆菌中和在土壤杆菌中复制。它们包含侧翼为T-DNA右和 左边界区的选择性标记基因和接头或多克隆位点。它们可以直接转化 到土壤杆菌中(Holsters等人[1978]Mol.Gen.Genet.163：181- 187)。作为宿主细胞使用的土壤杆菌要包含携带vir区的质粒。vir 区对将T-DNA转移到植物细胞中是必需的。可以含有另外的T-DNA。 这样转化的细菌被用于转化植物细胞。植物外植体可以方便的与根瘤 土壤杆菌或发根土壤杆菌一起培养以将DNA转移到植物细胞中。然后 由经感染的植物材料(例如，叶片、茎段、根，还有原生质体或悬浮 培养的细胞)，可以在合适的培养基(可以含有抗生素或杀生物剂用于 选择)中再生成完整植株。然后可以测试这样得到的植物中插入DNA 的存在。注射和电穿孔对质粒没有特殊要求。可以使用普通质粒，诸 如pUC衍生物。在biolistic转化中，可以使用质粒DNA或线性DNA。\n以常规方式，将经转化的细胞再生成形态正常的植物。如果转化事 件涉及种系细胞，那么插入的DNA和相应的表型特征将遗传给后代植物。 这样的植物可以以常规方式培养，并可以与具有相同的转化遗传因子或 其它遗传因子的植物杂交。得到的杂合体个体具有相应的表型特征。\n在本发明优选的实施方案中，用为植物优化了密码子用法的基因转 化植物。见，例如，U.S.专利号5,380,831。还有，将方便的使用编码截 短毒素的植物。截短毒素通常将编码全长毒素的大约55％-大约80％。 产生用于植物的人工合成的芽孢杆菌基因的方法在本领域是知道的。\n应当这样理解，此处描述的实施例和实施方案只是为了举例说明的 目的，并且本领域的技术人员根据本发明可以领会各种更改和变化，这 些将被认为是包括在本申请及所附权利要求书的精神和范围之内的。\n                           序列表\n(1)一般资料\n  (i)申请人：\n           申请人：MYCOGEN CORPORATION\n         街道地址：5501 Oberlin Drive\n             城市：San Diego\n            州/省：California\n             国家：US\n     邮政编码/ZIP：92121\n         电话号码：(800)745-7475\n         传真号码：(619)453-0142\n  (ii)发明题目：新的杀虫毒素和编码这些毒素的核苷酸序列\n  (iii)序列数：54\n  (iv)通信地址：\n    (A)收件人：Saliwanchik，Lloyd和Saliwanchik(公司)\n    (B)街道：2421N.W.41st Street，Suite A-1\n    (C)城市：Gainesville\n    (D)州：FL\n    (E)国家：US\n    (F)ZIP：32606-6669\n  (v)计算机可读形式：\n    (A)介质类型：软盘\n    (B)计算机：IBM PC兼容机\n    (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS\n    (D)软件：PatentIn Release#1.0，Version#1.30\n  (vi)现在的申请资料：\n    (A)申请号：\n    (B)申请日期：\n    (C)分类：\n  (vii)在先申请资料：\n    (A)申请号：US 09/073,898\n    (B)申请日期：1998年5月5日\n  (viii)代理人资料：\n    (A)姓名：Jay M.Sanders\n    (B)注册号：39,355\n    (C)参考/文档号：MA-708C2\n  (ix)电讯资料：\n    (A)电话：352-375-8100\n    (B)电传：352-372-5800\n(2)SEQ ID NO.1的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：2375个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n(ii)分子类型：DNA(基因组)\n(vi)最初来源：\n    (C)单独的分离物：Jav90\n(xi)序列描述：SEQ ID NO.1\nATGAACAAGA ATAATACTAA ATTAAGCACA AGAGCCTTAC CAAGTTTTAT TGATTATTTT     60\nAATGGCATTT ATGGATTTGC CACTGGTATC AAAGACATTA TGAACATGAT TTTTAAAACG    120\nGATACAGGTG GTGATCTAAC CCTAGACGAA ATTTTAAAGA ATCAGCAGTT ACTAAATGAT    180\nATTTCTGGTA AATTGGATGG GGTGAATGGA AGCTTAAATG ATCTTATCGC ACAGGGAAAC    240\nTTAAATACAG AATTATCTAA GGAAATATTA AAAATTGCAA ATGAACAAAA TCAAGTTTTA    300\nAATGATGTTA ATAACAAACT CGATGCGATA AATACGATGC TTCGGGTATA TCTACCTAAA    360\nATTACCTCTA TGTTGAGTGA TGTAATGAAA CAAAATTATG CGCTAAGTCT GCAAATAGAA    420\nTACTTAAGTA AACAATTGCA AGAGATTTCT GATAAGTTGG ATATTATTAA TGTAAATGTA    480\nCTTATTAACT CTACACTTAC TGAAATTACA CCTGCGTATC AAAGGATTAA ATATGTGAAC     540\nGAAAAATTTG AGGAATTAAC TTTTGCTACA GAAACTAGTT CAAAAGTAAA AAAGGATGGC     600\nTCTCCTGCAG ATATTCTTGA TGAGTTAACT GAGTTAACTG AACTAGCGAA AAGTGTAACA     660\nAAAAATGATG TGGATGGTTT TGAATTTTAC CTTAATACAT TCCACGATGT AATGGTAGGA     720\nAATAATTTAT TCGGGCGTTC AGCTTTAAAA ACTGCATCGG AATTAATTAC TAAAGAAAAT     780\nGTGAAAACAA GTGGCAGTGA GGTCGGAAAT GTTTATAACT TCTTAATTGT ATTAACAGCT     840\nCTGCAAGCAA AAGCTTTTCT TACTTTAACA ACATGCCGAA AATTATTAGG CTTAGCAGAT     900\nATTGATTATA CTTCTATTAT GAATGAACAT TTAAATAAGG AAAAAGAGGA ATTTAGAGTA     960\nAACATCCTCC CTACACTTTC TAATACTTTT TCTAATCCTA ATTATGCAAA AGTTAAAGGA    1020\nAGTGATGAAG ATGCAAAGAT GATTGTGGAA GCTAAACCAG GACATGCATT GATTGGGTTT    1080\nGAAATTAGTA ATGATTCAAT TACAGTATTA AAAGTATATG AGGCTAAGCT AAAACAAAAT    1140\nTATCAAGTCG ATAAGGATTC CTTATCGGAA GTTATTTATG GTGATATGGA TAAATTATTG    1200\nTGCCCAGATC AATCTGAACA AATCTATTAT ACAAATAACA TAGTATTTCC AAATGAATAT    1260\nGTAATTACTA AAATTGATTT CACTAAAAAA ATGAAAACTT TAAGATATGA GGTAACAGCG    1320\nAATTTTTATG ATTCTTCTAC AGGAGAAATT GACTTAAATA AGAAAAAAGT AGAATCAAGT    1380\nGAAGCGGAGT ATAGAACGTT AAGTGCTAAT GATGATGGGG TGTATATGCC GTTAGGTGTC    1440\nATCAGTGAAA CATTTTTGAC TCCGATTAAT GGGTTTGGCC TCCAAGCTGA TGAAAATTCA    1500\nAGATTAATTA CTTTAACATG TAAATCATAT TTAAGAGAAC TACTGCTAGC AACAGACTTA    1560\nAGCAATAAAG AAACTAAATT GATYGTCCCG CCAAGTGGTT TTATTAGCAA TATTGTAGAG    1620\nAACGGGTCCA TAGAAGAGGA CAATTTAGAG CCGTGGAAAG CAAATAATAA GAATGCGTAT    1680\nGTAGATCATA CAGGCGGAGT GAATGGAACT AAAGCTTTAT ATGTTCATAA GGACGGAGGA    1740\nATTTCACAAT TTATTGGAGA TAAGTTAAAA CCGAAAACTG AGTATGTAAT CCAATATACT    1800\nGTTAAAGGAA AACCTTCTAT TCATTTAAAA GATGAAAATA CTGGATATAT TCATTATGAA    1860\nGATACAAATA ATAATTTAGA AGATTATCAA ACTATTAATA AACGTTTTAC TACAGGAACT    1920\nGATTTAAAGG GAGTGTATTT AATTTTAAAA AGTCAAAATG GAGATGAAGC TTGGGGAGAT    1980\nAACTTTATTA TTTTGGAAAT TAGTCCTTCT GAAAAGTTAT TAAGTCCAGA ATTAATTAAT    2040\nACAAATAATT GGACGAGTAC GGGATCAACT AATATTAGCG GTAATACACT CACTCTTTAT    2100\nCAGGGAGGAC GAGGGATTCT AAAACAAAAC CTTCAATTAG ATAGTTTTTC AACTTATAGA    2160\nGTGTATTTTT CTGTGTCCGG AGATGCTAAT GTAAGGATTA GAAATTCTAG GGAAGTGTTA    2220\nTTTGAAAAAA GATATATGAG CGGTGCTAAA GATGTTTCTG AAATGTTCAC TACAAAATTT    2280\nGAGAAAGATA ACTTTTATAT AGAGCTTTCT CAAGGGAATA ATTTATATGG TGGTCCTATT    2340\nGTACATTTTT ACGATGTCTC TATTAAGTAA CCCAA                               2375\n(2)SEQ ID NO.2的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：790个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：蛋白质\n  (vi)最初来源：\n    (C)单独的分离物：Jav90\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.2\nMet Asn Lys Asn Asn Thr Lys Leu Ser Thr Arg Ala Leu Pro Ser Phe\n1               5                   10                  15\nIle Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp\n            20                  25                  30\nIle Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asp Leu Thr Leu\n        35                  40                  45\nAsp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Asp Ile Ser Gly Lys\n    50                  55                  60\nLeu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn\n65                  70                  75                  80\nLeu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln\n                85                  90                  95\nAsn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr\n            100                 105                 110\nMet Leu Arg Val Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val\n        115                 120                 125\nMet Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Ile Glu Tyr Leu Ser Lys\n    130                 135                 140\nGln Leu Gln Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Ile Ile Asn Val Asn Val\n145                 150                 155                 160\nLeu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile\n                165                 170                 175\nLys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr\n            180                 185                 190\nSer Ser Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu\n        195                 200                 205\nLeu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val\n    210                 215                 220\nAsp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly\n225                 230                 235                 240\nAsn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile\n                245                 250                 255\nThr Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr\n            260                 265                 270\nAsn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr\n        275                 280                 285\nLeu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr\n    290                 295                 300\nSer Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val\n305                 310                 315                 320\nAsn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala\n                325                 330                 335\nLys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys\n            340                 345                 350\nPro Gly His Ala Leu Ile Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Ile Thr\n        355                 360                 365\nVal Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp\n    370                 375                 380\nLys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Gly Asp Met Asp Lys Leu Leu\n385                 390                 395                 400\nCys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe\n                405                 410                 415\nPro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys\n            420                 425                 430\nThr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Phe Tyr Asp Ser Ser Thr Gly\n        435                 440                 445\nGlu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr\n    450                 455                 460\nArg Thr Leu Ser Ala Asn Asp Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val\n465                 470                 475                 480\nIle Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala\n                485                 490                 495\nAsp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg\n            500                 505                 510\nGlu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile\n        515                 520                 525\nVal Pro Pro Ser Gly Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Gly Ser Ile\n    530                 535                 540\nGlu Glu Asp Asn Leu Glu Pro Trp Lys Ala Asn Asn Lys Asn Ala Tyr\n545                 550                 555                 560\nVal Asp His Thr Gly Gly Val Asn Gly Thr Lys Ala Leu Tyr Val His\n                565                 570                 575\nLys Asp Gly Gly Ile Ser Gln Phe Ile Gly Asp Lys Leu Lys Pro Lys\n            580                 585                 590\nThr Glu Tyr Val Ile Gln Tyr Thr Val Lys Gly Lys Pro Ser Ile His\n        595                 600                 605\nLeu Lys Asp Glu Asn Thr Gly Tyr Ile His Tyr Glu Asp Thr Asn Asn\n    610                 615                 620\nAsn Leu Glu Asp Tyr Gln Thr Ile Asn Lys Arg Phe Thr Thr Gly Thr\n625                 630                 635                 640\nAsp Leu Lys Gly Val Tyr Leu Ile Leu Lys Ser Gln Asn Gly Asp Glu\n                645                 650                 655\nAla Trp Gly Asp Asn Phe Ile Ile Leu Glu Ile Ser Pro Ser Glu Lys\n            660                 665                 670\nLeu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Asn Thr Asn Asn Trp Thr Ser Thr Gly\n        675                 680                 685\nSer Thr Asn Ile Ser Gly Asn Thr Leu Thr Leu Tyr Gln Gly Gly Arg\n    690                 695                 700\nGly Ile Leu Lys Gln Asn Leu Gln Leu Asp Ser Phe Ser Thr Tyr Arg\n705                 710                 715                 720\nVal Tyr Phe Ser Val Ser Gly Asp Ala Asn Val Arg Ile Arg Asn Ser\n                725                 730                 735\nArg Glu Val Leu Phe Glu Lys Arg Tyr Met Ser Gly Ala Lys Asp Val\n            740                 745                 750\nSer Glu Met Phe Thr Thr Lys Phe Glu Lys Asp Asn Phe Tyr Ile Glu\n        755                 760                 765\nLeu Ser Gln Gly Asn Asn Leu Tyr Gly Gly Pro Ile Val His Phe Tyr\n    770                 775                 780\nAsp Val Ser Ile Lys Pro\n785                 790\n(2)SEQ ID NO.3的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：20个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.3\nGGRTTAMTTG GRTAYTATTT         20\n(2)SEQ ID NO.4的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：20个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.4\nATATCKWAYA TTKGCATTTA         20\n(2)SEQ ID NO.5的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1042个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (vi)最初来源：\n    (C)单独的分离物：66D3\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.5\nTTAATTGGGT ACTATTTTAA AGGAAAAGAT TTTAATAATC TTACTATATT TGCTCCAACA     60\nCGTGAGAATA CTCTTATTTA TGATTTAGAA ACAGCGAATT CTTTATTAGA TAAGCAACAA    120\nCAAACCTATC AATCTATTCG TTGGATCGGT TTAATAAAAA GCAAAAAAGC TGGAGATTTT    180\nACCTTTCAAT TATCGGATGA TGAGCATGCT ATTATAGAAA TCGATGGGAA AGTTATTTCG    240\nCAAAAAGGCC AAAAGAAACA AGTTGTTCAT TTAGAAAAAG ATAAATTAGT TCCCATCAAA    300\nATTGAATATC AATCTGATAA AGCGTTAAAC CCAGATAGTC AAATGTTTAA AGAATTGAAA    360\nTTATTTAAAA TAAATAGTCA AAAACAATCT CAGCAAGTGC AACAAGACGA ATTGAGAAAT    420\nCCTGAATTTG GTAAAGAAAA AACTCAAACA TATTTAAAGA AAGCATCGAA AAGCAGCCTG    480\nTTTAGCAATA AAAGTAAACG AGATATAGAT GAAGATATAG ATGAGGATAC AGATACAGAT    540\nGGAGATGCCA TTCCTGATGT ATGGGAAGAA AATGGGTATA CCATCAAAGG AAGAGTAGCT    600\nGTTAAATGGG ACGAAGGATT AGCTGATAAG GGATATAAAA AGTTTGTTTC CAATCCTTTT    660\nAGACAGCACA CTGCTGGTGA CCCCTATAGT GACTATGAAA AGGCATCAAA AGATTTGGAT    720\nTTATCTAATG CAAAAGAAAC ATTTAATCCA TTGGTGGCTG CTTTTCCAAG TGTCAATGTT    780\nAGCTTGGAAA ATGTCACCAT ATCAAAAGAT GAAAATAAAA CTGCTGAAAT TGCGTCTACT    840\nTCATCGAATA ATTGGTCCTA TACAAATACA GAGGGGGCAT CTATTGAAGC TGGAATTGGA    900\nCCAGAAGGTT TGTTGTCTTT TGGAGTAAGT GCCAATTATC AACATTCTGA AACAGTGGCC    960\nAAAGAGTGGG GTACAACTAA GGGAGACGCA ACACAATATA ATACAGCTTC AGCAGGATAT   1020\nCTAAATGCCA ATGTACGATA TA                                            1042\n(2)SEQ ID NO.6的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：347个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：肽\n  (vi)最初来源：\n    (C)单独的分离物：66D3\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.6\nLeu Ile Gly Tyr Tyr Phe Lys Gly Lys Asp Phe Asn Asn Leu Thr Ile\n1               5                   10                  15\nPhe Ala Pro Thr Arg Glu Asn Thr Leu Ile Tyr Asp Leu Glu Thr Ala\n            20                  25                  30\nAsn Ser Leu Leu Asp Lys Gln Gln Gln Thr Tyr Gln Ser Ile Arg Trp\n        35                  40                  45\nIle Gly Leu Ile Lys Ser Lys Lys Ala Gly Asp Phe Thr Phe Gln Leu\n    50                  55                  60\nSer Asp Asp Glu His Ala Ile Ile Glu Ile Asp Gly Lys Val Ile Ser\n65                  70                  75                  80\nGln Lys Gly Gln Lys Lys Gln Val Val His Leu Glu Lys Asp Lys Leu\n                85                  90                  95\nVal Pro Ile Lys Ile Glu Tyr Gln Ser Asp Lys Ala Leu Asn Pro Asp\n            100                 105                 110\nSer Gln Met Phe Lys Glu Leu Lys Leu Phe Lys Ile Asn Ser Gln Lys\n        115                 120                 125\nGln Ser Gln Gln Val Gln Gln Asp Glu Leu Arg Asn Pro Glu Phe Gly\n    130                 135                 140\nLys Glu Lys Thr Gln Thr Tyr Leu Lys Lys Ala Ser Lys Ser Ser Leu\n145                 150                 155                 160\nPhe Ser Asn Lys Ser Lys Arg Asp Ile Asp Glu Asp Ile Asp Glu Asp\n                165                 170                 175\nThr Asp Thr Asp Gly Asp Ala Ile Pro Asp Val Trp Glu Glu Asn Gly\n            180                 185                 190\nTyr Thr Ile Lys Gly Arg Val Ala Val Lys Trp Asp Glu Gly Leu Ala\n        195                 200                 205\nAsp Lys Gly Tyr Lys Lys Phe Val Ser Asn Pro Phe Arg Gln His Thr\n    210                 215                 220\nAla Gly Asp Pro Tyr Ser Asp Tyr Glu Lys Ala Ser Lys Asp Leu Asp\n225                 230                 235                 240\nLeu Ser Asn Ala Lys Glu Thr Phe Asn Pro Leu Val Ala Ala Phe Pro\n                245                 250                 255\nSer Val Asn Val Ser Leu Glu Asn Val Thr Ile Ser Lys Asp Glu Asn\n            260                 265                 270\nLys Thr Ala Glu Ile Ala Ser Thr Ser Ser Asn Asn Trp Ser Tyr Thr\n        275                 280                 285\nAsn Thr Glu Gly Ala Ser Ile Glu Ala Gly Ile Gly Pro Glu Gly Leu\n    290                 295                 300\nLeu Ser Phe Gly Val Ser Ala Asn Tyr Gln His Ser Glu Thr Val Ala\n305                 310                 315                 320\nLys Glu Trp Gly Thr Thr Lys Gly Asp Ala Thr Gln Tyr Asn Thr Ala\n                325                 330                 335\nSer Ala Gly Tyr Leu Asn Ala Asn Val Arg Tyr\n            340                 345\n(2)SEQ ID NO.7的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：2645个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (vi)最初来源：\n    (C)单独的分离物：PS177C8a\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.7\nATGAAGAAGA AGTTAGCAAG TGTTGTAACG TGTACGTTAT TAGCTCCTAT GTTTTTGAAT     60\nGGAAATGTGA ATGCTGTTTA CGCAGACAGC AAAACAAATC AAATTTCTAC AACACAGAAA    120\nAATCAACAGA AAGAGATGGA CCGAAAAGGA TTACTTGGGT ATTATTTCAA AGGAAAAGAT    180\nTTTAGTAATC TTACTATGTT TGCACCGACA CGTGATAGTA CTCTTATTTA TGATCAACAA    240\nACAGCAAATA AACTATTAGA TAAAAAACAA CAAGAATATC AGTCTATTCG TTGGATTGGT    300\nTTGATTCAGA GTAAAGAAAC GGGAGATTTC ACATTTAACT TATCTGAGGA TGAACAGGCA    360\nATTATAGAAA TCAATGGGAA AATTATTTCT AATAAAGGGA AAGAAAAGCA AGTTGTCCAT    420\nTTAGAAAAAG GAAAATTAGT TCCAATCAAA ATAGAGTATC AATCAGATAC AAAATTTAAT     480\nATTGACAGTA AAACATTTAA AGAACTTAAA TTATTTAAAA TAGATAGTCA AAACCAACCC     540\nCAGCAAGTCC AGCAAGATGA ACTGAGAAAT CCTGAATTTA ACAAGAAAGA ATCACAGGAA     600\nTTCTTAGCGA AACCATCGAA AATAAATCTT TTCACTCAAA AAATGAAAAG GGAAATTGAT     660\nGAAGACACGG ATACGGATGG GGACTCTATT CCTGACCTTT GGGAAGAAAA TGGGTATACG     720\nATTCAAAATA GAATCGCTGT AAAGTGGGAC GATTCTYTAG CAAGTAAAGG GTATACGAAA     780\nTTTGTTTCAA ATCCGCTAGA AAGTCACACA GTTGGTGATC CTTATACAGA TTATGAAAAG     840\nGCAGCAAGAG ACCTAGATTT GTCAAATGCA AAGGAAACGT TTAACCCATT GGTAGCTGCT     900\nTTTCCAAGTG TGAATGTTAG TATGGAAAAG GTGATATTAT CACCAAATGA AAATTTATCC     960\nAATAGTGTAG AGTCTCATTC ATCCACGAAT TGGTCTTATA CAAATACAGA AGGTGCTTCT    1020\nGTTGAAGCGG GGATTGGACC AAAAGGTATT TCGTTCGGAG TTAGCGTAAA CTATCAACAC    1080\nTCTGAAACAG TTGCACAAGA ATGGGGAACA TCTACAGGAA ATACTTCGCA ATTCAATACG    1140\nGCTTCAGCGG GATATTTAAA TGCAAATGTT CGATATAACA ATGTAGGAAC TGGTGCCATC    1200\nTACGATGTAA AACCTACAAC AAGTTTTGTA TTAAATAACG ATACTATCGC AACTATTACG    1260\nGCGAAATCTA ATTCTACAGC CTTAAATATA TCTCCTGGAG AAAGTTACCC GAAAAAAGGA    1320\nCAAAATGGAA TCGCAATAAC ATCAATGGAT GATTTTAATT CCCATCCGAT TACATTAAAT    1380\nAAAAAACAAG TAGATAATCT GCTAAATAAT AAACCTATGA TGTTGGAAAC AAACCAAACA    1440\nGATGGTGTTT ATAAGATAAA AGATACACAT GGAAATATAG TAACTGGCGG AGAATGGAAT    1500\nGGTGTCATAC AACAAATCAA GGCTAAAACA GCGTCTATTA TTGTGGATGA TGGGGAACGT    1560\nGTAGCAGAAA AACGTGTAGC GGCAAAAGAT TATGAAAATC CAGAAGATAA AACACCGTCT    1620\nTTAACTTTAA AAGATGCCCT GAAGCTTTCA TATCCAGATG AAATAAAAGA AATAGAGGGA    1680\nTTATTATATT ATAAAAACAA ACCGATATAC GAATCGAGCG TTATGACTTA CTTAGATGAA    1740\nAATACAGCAA AAGAAGTGAC CAAACAATTA AATGATACCA CTGGGAAATT TAAAGATGTA    1800\nAGTCATTTAT ATGATGTAAA ACTGACTCCA AAAATGAATG TTACAATCAA ATTGTCTATA    1860\nCTTTATGATA ATGCTGAGTC TAATGATAAC TCAATTGGTA AATGGACAAA CACAAATATT    1920\nGTTTCAGGTG GAAATAACGG AAAAAAACAA TATTCTTCTA ATAATCCGGA TGCTAATTTG    1980\nACATTAAATA CAGATGCTCA AGAAAAATTA AATAAAAATC GTACTATTAT ATAAGTTTAT    2040\nATATGAAGTC AGAAAAAAAC ACACAATGTG AGATTACTAT AGATGGGGAG ATTTATCCGA    2100\nTCACTACAAA AACAGTGAAT GTGAATAAAG ACAATTACAA AAGATTAGAT ATTATAGCTC    2160\nATAATATAAA AAGTAATCCA ATTTCTTCAA TTCATATTAA AACGAATGAT GAAATAACTT    2220\nTATTTTGGGA TGATATTTCT ATAACAGATG TAGCATCAAT AAAACCGGAA AATTTAACAG    2280\nATTCAGAAAT TAAACAGATT TATAGTAGGT ATGGTATTAA GTTAGAAGAT GGAATCCTTA    2340\nTTGATAAAAA AGGTGGGATT CATTATGGTG AATTTATTAA TGAAGCTAGT TTTAATATTG    2400\nAACCATTGCA AAATTATGTG ACAAAATATA AAGTTACTTA TAGTAGTGAG TTAGGACAAA    2460\nACGTGAGTGA CACACTTGAA AGTGATAAAA TTTACAAGGA TGGGACAATT AAATTTGATT    2520\nTTACAAAATA TAGTRAAAAT GAACAAGGAT TATTTTATGA CAGTGGATTA AATTGGGACT    2580\nTTAAAATTAA TGCTATTACT TATGATGGTA AAGAGATGAA TGTTTTTCAT AGATATAATA    2640\nAATAG                                                                2645\n(2)SEQ ID NO.8的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：881个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：肽\n  (vi)最初来源：\n    (C)单独的分离物：PS177C8a\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.8\nMet Lys Lys Lys Leu Ala Ser Val Val Thr Cys Thr Leu Leu Ala Pro\n1               5                   10                  15\nMet Phe Leu Asn Gly Asn Val Asn Ala Val Tyr Ala Asp Ser Lys Thr\n            20                  25                  30\nAsn Gln Ile Ser Thr Thr Gln Lys Asn Gln Gln Lys Glu Met Asp Arg\n        35                  40                  45\nLys Gly Leu Leu Gly Tyr Tyr Phe Lys Gly Lys Asp Phe Ser Asn Leu\n    50                  55                  60\nThr Met Phe Ala Pro Thr Arg Asp Ser Thr Leu Ile Tyr Asp Gln Gln\n65                  70                  75                  80\nThr Ala Asn Lys Leu Leu Asp Lys Lys Gln Gln Glu Tyr Gln Ser Ile\n                85                  90                  95\nArg Trp Ile Gly Leu Ile Gln Ser Lys Glu Thr Gly Asp Phe Thr Phe\n            100                 105                 110\nAsn Leu Ser Glu Asp Glu Gln Ala Ile Ile Glu Ile Asn Gly Lys Ile\n        115                 120                 125\nIle Ser Asn Lys Gly Lys Glu Lys Gln Val Val His Leu Glu Lys Gly\n    130                 135                 140\nLys Leu Val Pro Ile Lys Ile Glu Tyr Gln Ser Asp Thr Lys Phe Asn\n145                 150                 155                 160\nIle Asp Ser Lys Thr Phe Lys Glu Leu Lys Leu Phe Lys Ile Asp Ser\n                165                 170                 175\nGln Asn Gln Pro Gln Gln Val Gln Gln Asp Glu Leu Arg Asn Pro Glu\n            180                 185                 190\nPhe Asn Lys Lys Glu Ser Gln Glu Phe Leu Ala Lys Pro Ser Lys Ile\n        195                 200                 205\nAsn Leu Phe Thr Gln Lys Met Lys Arg Glu Ile Asp Glu Asp Thr Asp\n    210                 215                 220\nThr Asp Gly Asp Ser Ile Pro Asp Leu Trp Glu Glu Asn Gly Tyr Thr\n225                 230                 235                 240\nIle Gln Asn Arg Ile Ala Val Lys Trp Asp Asp Ser Leu Ala Ser Lys\n                245                 250                 255\nGly Tyr Thr Lys Phe Val Ser Asn Pro Leu Glu Ser His Thr Val Gly\n            260                 265                 270\nAsp Pro Tyr Thr Asp Tyr Glu Lys Ala Ala Arg Asp Leu Asp Leu Ser\n        275                 280                 285\nAsn Ala Lys Glu Thr Phe Asn Pro Leu Val Ala Ala Phe Pro Ser Val\n    290                 295                 300\nAsn Val Ser Met Glu Lys Val Ile Leu Ser Pro Asn Glu Asn Leu Ser\n305                 310                 315                 320\nAsn Ser Val Glu Ser His Ser Ser Thr Asn Trp Ser Tyr Thr Asn Thr\n                325                 330                 335\nGlu Gly Ala Ser Val Glu Ala Gly Ile Gly Pro Lys Gly Ile Ser Phe\n            340                 345                 350\nGly Val Ser Val Asn Tyr Gln His Ser Glu Thr Val Ala Gln Glu Trp\n        355                 360                 365\nGly Thr Ser Thr Gly Asn Thr Ser Gln Phe Asn Thr Ala Ser Ala Gly\n    370                 375                 380\nIyr Leu Asn Ala Asn Val Arg Tyr Asn Asn Val Gly Thr Gly Ala Ile\n385                 390                 395                 400\nTyr Asp Val Lys Pro Thr Thr Ser Phe Val Leu Asn Asn Asp Thr Ile\n                405                 410                 415\nAla Thr Ile Thr Ala Lys Ser Asn Ser Thr Ala Leu Asn Ile Ser Pro\n            420                 425                 430\nGly Glu Ser Tyr Pro Lys Lys Gly Gln Asn Gly Ile Ala Ile Thr Ser\n        435                 440                 445\nMet Asp Asp Phe Asn Ser His Pro Ile Thr Leu Asn Lys Lys Gln Val\n    450                 455                 460\nAsp Asn Leu Leu Asn Asn Lys Pro Met Met Leu Glu Thr Asn Gln Thr\n465                 470                 475                 480\nAsp Gly Val Tyr Lys Ile Lys Asp Thr His Gly Asn Ile Val Thr Gly\n                485                 490                 495\nGly Glu Trp Asn Gly Val Ile Gln Gln Ile Lys Ala Lys Thr Ala Ser\n            500                 505                 510\nIle Ile Val Asp Asp Gly Glu Arg Val Ala Glu Lys Arg Val Ala Ala\n        515                 520                 525\nLys Asp Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Lys Thr Pro Ser Leu Thr Leu Lys\n    530                 535                 540\nAsp Ala Leu Lys Leu Ser Tyr Pro Asp Glu Ile Lys Glu Ile Glu Gly\n545                 550                 555                 560\nLeu Leu Tyr Tyr Lys Asn Lys Pro Ile Tyr Glu Ser Ser Val Met Thr\n                565                 570                 575\nTyr Leu Asp Glu Asn Thr Ala Lys Glu Val Thr Lys Gln Leu Asn Asp\n            580                 585                 590\nThr Thr Gly Lys Phe Lys Asp Val Ser His Leu Tyr Asp Val Lys Leu\n        595                 600                 605\nThr Pro Lys Met Asn Val Thr Ile Lys Leu Ser Ile Leu Tyr Asp Asn\n    610                 615                 620\nAla Glu Ser Asn Asp Asn Ser Ile Gly Lys Trp Thr Asn Thr Asn Ile\n625                 630                 635                 640\nVal Ser Gly Gly Asn Asn Gly Lys Lys Gln Tyr Ser Ser Asn Asn Pro\n                645                 650                 655\nAsp Ala Asn Leu Thr Leu Asn Thr Asp Ala Gln Glu Lys Leu Asn Lys\n            660                 665                 670\nAsn Arg Asp Tyr Tyr Ile Ser Leu Tyr Met Lys Ser Glu Lys Asn Thr\n        675                 680                 685\nGln Cys Glu Ile Thr Ile Asp Gly Glu Ile Tyr Pro Ile Thr Thr Lys\n    690                 695                 700\nThr Val Asn Val Asn Lys Asp Asn Tyr Lys Arg Leu Asp Ile Ile Ala\n705                 710                 715                 720\nHis Asn Ile Lys Ser Asn Pro Ile Ser Ser Ile His Ile Lys Thr Asn\n                725                 730                 735\nAsp Glu Ile Thr Leu Phe Trp Asp Asp Ile Ser Ile Thr Asp Val Ala\n            740                 745                 750\nSer Ile Lys Pro Glu Asn Leu Thr Asp Ser Glu Ile Lys Gln Ile Tyr\n        755                 760                 765\nSer Arg Tyr Gly Ile Lys Leu Glu Asp Gly Ile Leu Ile Asp Lys Lys\n    770                 775                 780\nGly Gly Ile His Tyr Gly Glu Phe Ile Asn Glu Ala Ser Phe Asn Ile\n785                 790                 795                 800\nGlu Pro Leu Gln Asn Tyr Val Thr Lys Tyr Lys Val Thr Tyr Ser Ser\n                805                 810                 815\nGlu Leu Gly Gln Asn Val Ser Asp Thr Leu Glu Ser Asp Lys Ile Tyr\n            820                 825                 830\nLys Asp Gly Thr Ile Lys Phe Asp Phe Thr Lys Tyr Ser Xaa Asn Glu\n        835                 840                 845\nGln Gly Leu Phe Tyr Asp Ser Gly Leu Asn Trp Asp Phe Lys Ile Asn\n    850                 855                 860\nAla Ile Thr Tyr Asp Gly Lys Glu Met Asn Val Phe His Arg Tyr Asn\n865                 870                 875                 880\nLys\n(2)SEQ ID NO.9的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1022个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (vi)最初来源：\n    (C)单独的分离物：177I8\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.9\nTGGATTAATT GGGTATTATT TCAAAGGAAA AGATTTTAAT AATCTTACTA TGTTTGCACC     60\nGACACGTGAT AATACCCTTA TGTATGACCA ACAAACAGCG AATGCATTAT TAGATAAAAA    120\nACAACAAGAA TATCAGTCCA TTCGTTGGAT TGGTTTGATT CAGAGTAAAG AAACGGGCGA    180\nTTTCACATTT AACTTATCAA AGGATGAACA GGCAATTATA GAAATCGATG GGAAAATCAT    240\nTTCTAATAAA GGGAAAGAAA AGCAAGTTGT CCATTTAGAA AAAGAAAAAT TAGTTCCAAT    300\nCAAAATAGAG TATCAATCAG ATACGAAATT TAATATTGAT AGTAAAACAT TTAAAGAACT    360\nTAAATTATTT AAAATAGATA GTCAAAACCA ATCTCAACAA GTTCAACTGA GAAACCCTGA    420\nATTTAACAAA AAAGAATCAC AGGAATTTTT AGCAAAAGCA TCAAAAACAA ACCTTTTTAA    480\nGCAAAAAATG AAAAGAGATA TTGATGAAGA TACGGATACA GATGGAGACT CCATTCCTGA    540\nTCTTTGGGAA GAAAATGGGT ACACGATTCA AAATAAAGTT GCTGTCAAAT GGGATGATTC    600\nGCTAGCAAGT AAGGGATATA CAAAATTTGT TTCGAATCCA TTAGACAGCC ACACAGTTGG    660\nCGATCCCTAT ACTGATTATG AAAAGGCCGC AAGGGATTTA GATTTATCAA ATGCAAAGGA    720\nAACGTTCAAC CCATTGGTAG CTGCTTTYCC AAGTGTGAAT GTTAGTATGG AAAAGGTGAT    780\nATTATCACCA AATGAAAATT TATCCAATAG TGTAGAGTCT CATTCATCCA CGAATTGGTC    840\nTTATACGAAT ACAGAAGGAG CTTCCATTGA AGCTGGTGGC GGTCCATTAG GCCTTTCTTT    900\nTGGAGTGAGT GTTAATTATC AACACTCTGA AACAGTTGCA CAAGAATGGG GAACATCTAC    960\nAGGAAATACT TCACAATTCA ATACGGCTTC AGCGGGATAT TTAAATGCCA ATATACGATA   1020\nTA                                                                  1022\n(2)SEQ ID NO.10的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：340个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：肽\n  (vi)最初来源：\n    (C)单独的分离物：177I8\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.10\nGly Leu Ile Gly Tyr Tyr Phe Lys Gly Lys Asp Phe Asn Asn Leu Thr\n1               5                   10                  15\nMet Phe Ala Pro Thr Arg Asp Asn Thr Leu Met Tyr Asp Gln Gln Thr\n            20                  25                  30\nAla Asn Ala Leu Leu Asp Lys Lys Gln Gln Glu Tyr Gln Ser Ile Arg\n        35                  40                  45\nTrp Ile Gly Leu Ile Gln Ser Lys Glu Thr Gly Asp Phe Thr Phe Asn\n    50                  55                  60\nLeu Ser Lys Asp Glu Gln Ala Ile Ile Glu Ile Asp Gly Lys Ile Ile\n65                  70                  75                  80\nSer Asn Lys Gly Lys Glu Lys Gln Val Val His Leu Glu Lys Glu Lys\n                85                  90                  95\nLeu Val Pro Ile Lys Ile Glu Tyr Gln Ser Asp Thr Lys Phe Asn Ile\n            100                 105                 110\nAsp Ser Lys Thr Phe Lys Glu Leu Lys Leu Phe Lys Ile Asp Ser Gln\n        115                 120                 125\nAsn Gln Ser Gln Gln Val Gln Leu Arg Asn Pro Glu Phe Asn Lys Lys\n    130                 135                 140\nGlu Ser Gln Glu Phe Leu Ala Lys Ala Ser Lys Thr Asn Leu Phe Lys\n145                 150                 155                 160\nGln Lys Met Lys Arg Asp Ile Asp Glu Asp Thr Asp Thr Asp Gly Asp\n                165                 170                 175\nSer Ile Pro Asp Leu Trp Glu Glu Asn Gly Tyr Thr Ile Gln Asn Lys\n            180                 185                 190\nVal Ala Val Lys Trp Asp Asp Ser Leu Ala Ser Lys Gly Tyr Thr Lys\n        195                 200                 205\nPhe Val Ser Asn Pro Leu Asp Ser His Thr Val Gly Asp Pro Tyr Thr\n    210                 215                 220\nAsp Tyr Glu Lys Ala Ala Arg Asp Leu Asp Leu Ser Asn Ala Lys Glu\n225                 230                 235                 240\nThr Phe Asn Pro Leu Val Ala Ala Xaa Pro Ser Val Asn Val Ser Met\n                245                 250                 255\nGlu Lys Val Ile Leu Ser Pro Asn Glu Asn Leu Ser Asn Ser Val Glu\n            260                 265                 270\nSer His Ser Ser Thr Asn Trp Ser Tyr Thr Asn Thr Glu Gly Ala Ser\n        275                 280                 285\nIle Glu Ala Gly Gly Gly Pro Leu Gly Leu Ser Phe Gly Val Ser Val\n    290                 295                 300\nAsn Tyr Gln His Ser Glu Thr Val Ala Gln Glu Trp Gly Thr Ser Thr\n305                 310                 315                 320\nGly Asn Thr Ser Gln Phe Asn Thr Ala Ser Ala Gly Tyr Leu Asn Ala\n                325                 330                 335\nAsn Ile Arg Tyr\n            340\n(2)SEQ ID NO.11的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1341个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (vi)最初来源：\n    (C)单独的分离物：PS177C8a\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.11\nATGTTTATGG TTTCTAAAAA ATTACAAGTA GTTACTAAAA CTGTATTGCT TAGTACAGTT     60\nTTCTCTATAT CTTTATTAAA TAATGAAGTG ATAAAAGCTG AACAATTAAA TATAAATTCT    120\nCAAAGTAAAT ATACTAACTT GCAAAATCTA AAAATCACTG ACAAGGTAGA GGATTTTAAA    180\nGAAGATAAGG AAAAAGCGAA AGAATGGGGG AAAGAAAAAG AAAAAGAGTG GAAACTAACT    240\nGCTACTGAAA AAGGAAAAAT GAATAATTTT TTAGATAATA AAAATGATAT AAAGACAAAT    300\nTATAAAGAAA TTACTTTTTC TATGGCAGGC TCATTTGAAG ATGAAATAAA AGATTTAAAA    360\nGAAATTGATA AGATGTTTGA TAAAACCAAT CTATCAAATT CTATTATCAC CTATAAAAAT    420\nGTGGAACCGA CAACAATTGG ATTTAATAAA TCTTTAACAG AAGGTAATAC GATTAATTCT    480\nGATGCAATGG CACAGTTTAA AGAACAATTT TTAGATAGGG ATATTAAGTT TGATAGTTAT    540\nCTAGATACGC ATTTAACTGC TCAACAAGTT TCCAGTAAAG AAAGAGTTAT TTTGAAGGTT    600\nACGGTTCCGA GTGGGAAAGG TTCTACTACT CCAACAAAAG CAGGTGTCAT TTTAAATAAT    660\nAGTGAATACA AAATGCTCAT TGATAATGGG TATATGGTCC ATGTAGATAA GGTATCAAAA    720\nGTGGTGAAAA AAGGGGTGGA GTGCTTACAA ATTGAAGGGA CTTTAAAAAA GAGTCTTGAC    780\nTTTAAAAATG ATATAAATGC TGAAGCGCAT AGCTGGGGTA TGAAGAATTA TGAAGAGTGG    840\nGCTAAAGATT TAACCGATTC GCAAAGGGAA GCTTTAGATG GGTATGCTAG GCAAGATTAT    900\nAAAGAAATCA ATAATTATTT AAGAAATCAA GGCGGAAGTG GAAATGAAAA ACTAGATGCT    960\nCAAATAAAAA ATATTTCTGA TGCTTTAGGG AAGAAACCAA TACCGGAAAA TATTACTGTG   1020\nTATAGATGGT GTGGCATGCC GGAATTTGGT TATCAAATTA GTGATCCGTT ACCTTCTTTA   1080\nAAAGATTTTG AAGAACAATT TTTAAATACA ATCAAAGAAG ACAAAGGATA TATGAGTACA   1140\nAGCTTATCGA GTGAACGTCT TGCAGCTTTT GGATCTAGAA AAATTATATT ACGATTACAA   1200\nGTTCCGAAAG GAAGTACGGG TGCGTATTTA AGTGCCATTG GTGGATTTGC AAGTGAAAAA   1260\nGAGATCCTAC TTGATAAAGA TAGTAAATAT CATATTGATA AAGTAACAGA GGTAATTATT   1320\nAAGGTGTTAA GCGATATGTA G                                             1341\n(2)SEQ ID NO.12的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：446个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：肽\n  (vi)最初来源：\n    (C)单独的分离物：PS177C8a\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.12\nMet Phe Met Val Ser Lys Lys Leu Gln Val Val Thr Lys Thr Val Leu\n1               5                   10                  15\nLeu Ser Thr Val Phe Ser Ile Ser Leu Leu Asn Asn Glu Val Ile Lys\n            20                  25                  30\nAla Glu Gln Leu Asn Ile Asn Ser Gln Ser Lys Tyr Thr Asn Leu Gln\n        35                  40                  45\nAsn Leu Lys Ile Thr Asp Lys Val Glu Asp Phe Lys Glu Asp Lys Glu\n    50                  55                  60\nLys Ala Lys Glu Trp Gly Lys Glu Lys Glu Lys Glu Trp Lys Leu Thr\n65                  70                  75                  80\nAla Thr Glu Lys Gly Lys Met Asn Asn Phe Leu Asp Asn Lys Asn Asp\n                85                  90                  95\nIle Lys Thr Asn Tyr Lys Glu Ile Thr Phe Ser Met Ala Gly Ser Phe\n            100                 105                 110\nGlu Asp Glu Ile Lys Asp Leu Lys Glu Ile Asp Lys Met Phe Asp Lys\n        115                 120                 125\nThr Asn Leu Ser Asn Ser Ile Ile Thr Tyr Lys Asn Val Glu Pro Thr\n    130                 135                 140\nThr Ile Gly Phe Asn Lys Ser Leu Thr Glu Gly Asn Thr Ile Asn Ser\n145                 150                 155                 160\nAsp Ala Met Ala Gln Phe Lys Glu Gln Phe Leu Asp Arg Asp Ile Lys\n                165                 170                 175\nPhe Asp Ser Tyr Leu Asp Thr His Leu Thr Ala Gln Gln Val Ser Ser\n            180                 185                 190\nLys Glu Arg Val Ile Leu Lys Val Thr Val Pro Ser Gly Lys Gly Ser\n        195                 200                 205\nThr Thr Pro Thr Lys Ala Gly Val Ile Leu Asn Asn Ser Glu Tyr Lys\n    210                 215                 220\nMet Leu Ile Asp Asn Gly Tyr Met Val His Val Asp Lys Val Ser Lys\n225                 230                 235                 240\nVal Val Lys Lys Gly Val Glu Cys Leu Gln Ile Glu Gly Thr Leu Lys\n                245                 250                 255\nLys Ser Leu Asp Phe Lys Asn Asp Ile Asn Ala Glu Ala His Ser Trp\n            260                 265                 270\nGly Met Lys Asn Tyr Glu Glu Trp Ala Lys Asp Leu Thr Asp Ser Gln\n        275                 280                 285\nArg Glu Ala Leu Asp Gly Tyr Ala Arg Gln Asp Tyr Lys Glu Ile Asn\n    290                 295                 300\nAsn Tyr Leu Arg Asn Gln Gly Gly Ser Gly Asn Glu Lys Leu Asp Ala\n305                 310                 315                 320\nGln Ile Lys Asn Ile Ser Asp Ala Leu Gly Lys Lys Pro Ile Pro Glu\n                325                 330                 335\nAsn Ile Thr Val Tyr Arg Trp Cys Gly Met Pro Glu Phe Gly Tyr Gln\n            340                 345                 350\nIle Ser Asp Pro Leu Pro Ser Leu Lys Asp Phe Glu Glu Gln Phe Leu\n        355                 360                 365\nAsn Thr Ile Lys Glu Asp Lys Gly Tyr Met Ser Thr Ser Leu Ser Ser\n    370                 375                 380\nGlu Arg Leu Ala Ala Phe Gly Ser Arg Lys Ile Ile Leu Arg Leu Gln\n385                 390                 395                 400\nVal Pro Lys Gly Ser Thr Gly Ala Tyr Leu Ser Ala Ile Gly Gly Phe\n                405                 410                 415\nAla Ser Glu Lys Glu Ile Leu Leu Asp Lys Asp Ser Lys Tyr His Ile\n            420                 425                 430\nAsp Lys Val Thr Glu Val Ile Ile Lys Val Leu Ser Asp Met\n        435                 440                 445\n(2)SEQ ID NO.13的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：21个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.13\nGCTGATGAAC CATTTAATGC C    21\n(2)SEQ ID NO.14的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：22个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.14\nCTCTTTAAAG TAGATACTAA GC    22\n(2)SEQ ID NO.15的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：24个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.15\nGATGAGAACT TATCAAATAG TATC    24\n(2)SEQ ID NO.16的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：33个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.16\nCGAATTCTTT ATTAGATAAG CAACAACAAA  CCT    33\n(2)SEQ ID NO.17的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：24个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.17\nGTTATTTCGC AAAAAGGCCA AAAG    24\n(2)SEQ ID NO.18的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：31个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n    (xi)序列描述：SEQ ID NO.18\nGAATATCAAT CTGATAAAGC GTTAAACCCA G    31\n(2)SEQ ID NO.19的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：23个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.19\nGCAGCYTGTT TAGCAATAAA AGT    23\n(2)SEQ ID NO.20的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：20个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.20\nCAAAGGAAGA GTAGCTGTTA    20\n(2)SEQ ID NO.21的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：25个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.21\nCAATGTTAGC TTGGAAAATG TCACC    25\n(2)SEQ ID NO.22的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：22个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.22\nGCTTAGTATC  TACTTTAAAG AG    22\n(2)SEQ ID NO.23的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：24个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.23\nGATACTATTT GATAAGTTCT CATC    24\n(2)SEQ ID NO.24的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：24个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.24\nCTTTTGGCCT TTTTGCGAAA TAAC    24\n(2)SEQ ID NO.25的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：31个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.25\nCTGGGTTTAA CGCTTTATCA GATTGATATT C    31\n(2)SEQ ID NO.26的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：23个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.26\nACTTTTATTG CTAAACARGC TGC    23\n(2)SEQ ID NO.27的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：20个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.27\nTAACAGCTAC TCTTCCTTTG    20\n(2)SEQ ID NO.28的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：25个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.28\nGGTGACATTT TCCAAGCTAA CATTG    25\n(2)SEQ ID NO.29的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：21个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.29\nCCAGTCCAAT GAACCTCTTA C    21\n(2)SEQ ID NO.30的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：21个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.30\nAGGGAACAAA CCTTCCCAAC C    21\n(2)SEQ ID NO.31的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：20个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.31\nCARMTAKTAA MTAGGGATAG    20\n(2)SEQ ID NO.32的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：22个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.32\nAGYTTCTATC GAAGCTGGGR ST    22\n(2)SEQ ID NO.33的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1035个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.33\nGGGTTAATTG GGTATTATTT TAAAGGGAAA GATTTTAATA ATCTGACTAT GTTTGCACCA     60\nACCATAAATA ATACGCTTAT TTATGATCGG CAAACAGCAG ATACACTATT AAATAAGCAG    120\nCAACAAGAGT TCAATTCTAT TCGATGGATT GGTTTAATAC AAAGTAAAGA AACAGGTGAC    180\nTTTACATTCC AATTATCAGA TGATAAAAAT GCCATCATTG AAATAGATGG AAAAGTTGTT    240\nTCTCGTAGAG GAGAAGATAA ACAAACTATC CATTTAGAAA AAGGAAAGAT GGTTCCAATC    300\nAAAATTGAGT ACCAGTCCAA TGAACCTCTT ACTGTAGATA GTAAAGTATT TAACGATCTT    360\nAAACTATTTA AAATAGATGG TCATAATCAA TCGCATCAAA TACAGCAAGA TGATTTGAAA    420\nATCCTGAATT TAATAAAAAG GAAACGAAAG AGCTTTTATC AAAAACAGCA AAAAGAACCT    480\nTTTCTCTTCA AAACGGGGTT GAGAAGCGAT GAGGATGATG ATCTAGGATA CAGATGGTGA    540\nTAGCATTCCT GGATAATTGG GAAATGAATG GATATACCAT TCAAACGAAA AATGGCAGTC    600\nAAATGGGATG ATTCATTTGC AGAAAAAGGA TATACAAAAT TTGTTTCGAA TCCATATGAA    660\nGCCCATACAG CAGGAGATCC TTATACCGAT TATGAAAAAG CAGCAAAAGA TATTCCTTTA    720\nTCGAACGCAA AAGAAGCCTT TAATCCTCTT GTAGCTGCTT TTCCATCTGT CAATGTAGGA    780\nTTAGAAAAAG TAGTAATTTC TAAAAATGAG GATATGAGTC AGGGTGTATC ATCCAGCACT    840\nTCGAATAGTG CCTCTAATAC AAATTCAATT GGTGTTACCG TAGATGCTGG TTGGGAAGGT    900\nTTGTTCCCTA AATTTGGTAT TTCAACTAAT TATCAAAACA CATGGACCAC TGCACAAGAA    960\nTGGGGCTCTT CTAAAGAAGA TTCTACCCAT ATAAATGGAG CACAATCAGC CTTTTTAAAT   1020\nGCAAATGTAC GATAT                                                    1035\n(2)SEQ ID NO.34的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：345个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：蛋白质\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.34\nGly Leu Ile Gly Tyr Tyr Phe Lys Gly Lys Asp Phe Asn Asn Leu Thr\n1               5                   10                  15\nMet Phe Ala Pro Thr Ile Asn Asn Thr Leu Ile Tyr Asp Arg Gln Thr\n            20                  25                  30\nAla Asp Thr Leu Leu Asn Lys Gln Gln Gln Glu Phe Asn Ser Ile Arg\n        35                  40                  45\nTrp Ile Gly Leu Ile Gln Ser Lys Glu Thr Gly Asp Phe Thr Phe Gln\n    50                  55                  60\nLeu Ser Asp Asp Lys Asn Ala Ile Ile Glu Ile Asp Gly Lys Val Val\n65                  70                  75                  80\nSer Arg Arg Gly Glu Asp Lys Gln Thr Ile His Leu Glu Lys Gly Lys\n                85                  90                  95\nMet Val Pro Ile Lys Ile Glu Tyr Gln Ser Asn Glu Pro Leu Thr Val\n            100                 105                 110\nAsp Ser Lys Val Phe Asn Asp Leu Lys Leu Phe Lys Ile Asp Gly His\n        115                 120                 125\nAsn Gln Ser His Gln Ile Gln Gln Asp Asp Leu Lys Ile Leu Asn Leu\n    130                 135                 140\nIle Lys Arg Lys Arg Lys Ser Phe Tyr Gln Lys Gln Gln Lys Glu Pro\n145                 150                 155                 160\nPhe Leu Phe Lys Thr Gly Leu Arg Ser Asp Glu Asp Asp Asp Leu Gly\n                165                 170                 175\nTyr Arg Trp Xaa Xaa His Ser Trp Ile Ile Gly Lys Xaa Met Asp Ile\n            180                 185                 190\nPro Phe Lys Arg Lys Met Ala Val Lys Trp Asp Asp Ser Phe Ala Glu\n        195                 200                 205\nLys Gly Tyr Thr Lys Phe Val Ser Asn Pro Tyr Glu Ala His Thr Ala\n    210                 215                 220\nGly Asp Pro Tyr Thr Asp Tyr Glu Lys Ala Ala Lys Asp Ile Pro Leu\n225                 230                 235                 240\nSer Asn Ala Lys Glu Ala Phe Asn Pro Leu Val Ala Ala Phe Pro Ser\n                245                 250                 255\nVal Asn Val Gly Leu Glu Lys Val Val Ile Ser Lys Asn Glu Asp Met\n            260                 265                 270\nSer Gln Gly Val Ser Ser Ser Thr Ser Asn Ser Ala Ser Asn Thr Asn\n        275                 280                 285\nSer Ile Gly Val Thr Val Asp Ala Gly Trp Glu Gly Leu Phe Pro Lys\n    290                 295                 300\nPhe Gly Ile Ser Thr Asn Tyr Gln Asn Thr Trp Thr Thr Ala Gln Glu\n305                 310                 315                 320\nTrp Gly Ser Ser Lys Glu Asp Ser Thr His Ile Asn Gly Ala Gln Ser\n                325                 330                 335\nAla Phe Leu Asn Ala Asn Val Arg Tyr\n            340                 345\n(2)SEQ ID NO.35的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1037个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.35\nGGGTTAATTG GGTATTATTT TAAAGGGAAA GATTTTAATA ATCTGACTAT GTTTGCACCA     60\nACCATAAATA ATACGCTTAT TTATGATCGG CAAACAGCAG ATACACTATT AAATAAGCAG    120\nCAACAAGAGT TCAATTCTAT TCGATGGATT GGTTTAATAC AAAGTAAAGA AACAGGTGAC    180\nTTTACATTCC AATTATCAGA TGATAAAAAT GCCATCATTG AAATAGATGG AAAAGTTGTT    240\nTCTCGTAGAG GAGAAGATAA ACAAACTATC CATTTAGAAA AAGGAAAGAT GGTTCCAATC    300\nAAAATTGAGT ACCAGTCCAA TGAACCTCTT ACTGTAGATA GTAAAGTATT TAACGATCTT    360\nAAACTATTTA AAATAGATGG TCATAATCAA TCGCATCAAA TACAGCAAGA TGATTTGAAA    420\nAATCCTGAAT TTAATAAAAA AGAAACGAAA GAGCTTTTAT CAAAAACAGC AAAAAGRAAC    480\nCTTTTCTCTT CAAACGRRGT KGAGAAGCGA TGAGGATGAT RATCYTAGAT ACAGGTGGKG    540\nATAGCATTCC YKGATAATTG GGGAAATGAA WGGRTATACC ATTCAACSGA AAAATGGSAG    600\nTCAAATGGGA TGATTCATTT GCGGAAAAAG GATATACAAA ATTTGTTTCG AATCCATATG    660\nAAGCCCATAC AGCAGGAGAT CCTTATACCG ATTATGAAAA AGCAGCAAAA GATATTCCTT    720\nTATCGAACGC AAAAGAAGCC TTTAATCCTC TTGTAGCTGC TTTTCCATCT GTCAATGTAG    780\nGATTAGAAAA AGTAGTAATT TCTAAAAATG AGGATATGAG TCAGGGTGTA TCATCCAGCA    840\nCTTCGAATAG TGCCTCTAAT ACAAATTCAA TTGGTGTTAC CGTAGATGCT GGTTGGGAAG    900\nGTTTGTTCCC TAAATTTGGT ATTTCAACTA ATTATCAAAA CACATGGACC ACTGCACAAG    960\nAATGGGGCTC TTCTAAAGAA GATTCTACCC ATATAAATGG AGCACAATCA GCCTTTTTAA   1020\nATGCAAATGT ACGATAT                                                  1037\n(2)SEQ ID NO.36的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1048个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.36\nTGGGTTAATT GGGTATTATT TTAAAGGGCA AGAGTTTAAT CATCTTACTT TGTTCGCACC     60\nAACACGTGAT AATACCCTTA TTTATGATCA ACAAACAGCG AATTCCTTAT TAGATACCAA    120\nGCAACAAGAA TATCAATCTA TTCGCTGGAT TGGTTTAATT CAAAGTAAAG AAACGGGTGA    180\nTTTCACATTT AACTTATCAG ATGATCAACA TGCAATTATA GAAATCGATG GCAAAATCAT    240\nTTCGCATAAA GGACAGAATA AACAAGTTGT TCACTTAGAA AAAGGAAAGT TAGTCCCGAT    300\nAAAAATTGAG TATCAATCAG ATCAACTATT AAATAGGGAT AGTAACATCT TTAAAGAGTT    360\nTAAATTATTC AAAGTAGATA GTCAGCAACA CGCTCACCAA GTTCAACTAG ACGAATTAAG    420\nAAACCCTGCG TTTAATAAAA AGGAAACACA ACAATCTTAA GAAAAAGCAT CCAAAAACAA    480\nTCTTTTTACA CCAGGGACAT TAAAAGGAAG ATACTGATGA TGATGATAAG GATAACAGGA    540\nTGGGAGATTC TATTCCTGGA CCTTTTGGGG GAAGAAAATG GGTATACCAA TCCCAAAATA    600\nAAATAGCTGG TCCAAGTGGG ATGTTCATTC GCCGCGAAAG GGTATACAAA TTTGTTTCTT    660\nAATCCACTTG ATAGTCATAC AGTTGGAGAT CCCTATACGG ATTATGAAAA AGCAGCAAGA    720\nGATTTAGACT TGGCCCAATG CAAAAGAAAC ATTTAACCCA TTAGTAGCTG CTTTTCCAAG    780\nTGTGAATGTG AATTTGGAAA AAGTCATTTT ATCTAAAGAT GAAAATCTAT CCAATAGTGT    840\nAGAGTCACAT TCCTCCACCA ACTGGTCTTA TACGAATACA GAAGGAGCTT CTATCGAAGC    900\nTGGGGCTAAA CCAGAGGGTC CTACTTTTGG AGTGAGTGCT ACTTATCAAC ACTCTGAAAC    960\nAGTTGCAAAA GAATGGGGAA CATCTACAGG AAATACCTCG CAATTTAATA CAGCTTCAGC   1020\nAGGATATTTA AATGCAAATG TACGATAT                                      1048\n(2)SEQ ID NO.37的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1175个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.37\nACCTCTAGAT GCANGCTCGA GCGGCCGCCA GTGTGATGGA TATCTGCAGA ATTCGGATTA     60\nCTTGGGTATT ATTTTAAAGG GAAAGAGTTT AATCATCTTA CTTTGTTCGC ACCAACACGT    120\nGATAATACCC TTATTTATGA TCAACAAACA GCGAATTCCT TATTAGATAC CAAACAACAA    180\nGAATATCAAT CTATTCGCTG GATTGGTTTG ATTCAAAGTA AAGAAACAGG TGATTTCACG    240\nTTTAACTTAT CTGATGATCA AAATGCAATT ATAGAAATAG ATGGCAAAAT CATTTCGCAT    300\nAAAGGACAGA ATAAACAAGT TGTTCACTTA GAAAAAGGAA AGTTAGTCCC GATAAAAATT    360\nGAGTATCAAT CAGATCAGAT ATTAACTAGG GATAGTAACA TCTTTAAAGA GTTCAATTAT    420\nTCAAAGTAGA TAGTCAAGCA ACACTCTCAC CAAAGTTCAA CTTAGGNCNG AATTAAGNAA    480\nCCCTNGGATT TTAANTTNAA AAAAAGGAAC CCNCANCATT CTTTAGGAAA AAGCAGCAAN    540\nAACCAAATCC TTTTTTACCA CAGGATATTG AAAAGGAGAT ACGGGNTNGA TGATGGATTG    600\nATACCGGGAT ACCAGTTGGG GNTTCTANTC CCTGACCTTT GGGGAAAGAA AATNGGTATA    660\nCCNATCCCAA AANTTAAGCC AGCTGTCCAG GTGGGATGAT TCAATTCGCC CGCGAAAGGG    720\nTATACCAAAA TTTGTTTCTT AATCCACTTG AGAGTCATAC AGTTGGAGAT CCCTATACGG    780\nATTATGAAAA AGCAGCAAGA GATTTAGACT TGGCCAATGC AAAAGAAACA TTTAACCCAT    840\nTAGTAGCTGC TTTTCCAAGT GTGAATGTGA ATTTGGAAAA AGTAATATTA TCCCCAGATG    900\nAGAATTTATC TAACAGTGTA GAATCTCATT CGTCTACAAA TTGGTCTTAT ACGAATACTG    960\nAAGGAGCTTC TATCGAAGCT GGGGGTGGTC CATTAGGTAT TTCATTTGGA GTGAGTGCTA   1020\nATTATCAACA CTCTGAAACA GTTGCAAAAG AATGGGGAAC ATCTACAGGA AATACCTCGC   1080\nAATTTAATAC AGCTTCAGCA GGATATTTAA ATGCCAATGG TCGATNTAAG CCGAATMCCA   1140\nNCACACTGNC GGCCGTTAGT AGTGGCACCG AGCCC                              1175\n(2)SEQ ID NO.38的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1030个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.38\nGGRTTAMTTG GGTATTATTT TAAAGGGAAA GATTTTAATG ATCTTACTGT ATTTGCACCA     60\nACGCGTGGGA ATACTCTTGT ATATGATCAA CAAACAGCAA ATACATTACT AAATCAAAAA    120\nCAACAAGACT TTCAGTCTAT TCGTTGGGTT GGTTTAATTC AAAGTAAAGA AGCAGGCGAT    180\nTTTACATTTA ACTTATCAGA TGATGAACAT ACGATGATAG AAATCGATGG GAAAGTTATT    240\nTCTAATAAAG GGAAAGAAAA ACAAGTTGTC CATTTAGAAA AAGGACAGTT CGTTTCTATC    300\nAAAATAGAAT ATCAAGCTGA TGAACCATTT AATGCGGATA GTCAAACCTT TAAAAATTTG    360\nAAACTCYTTA AAGTAGATAC TAAGCAACAG TCCCAGCAAA TTCAACTAGA TGAATTAAGA    420\nAACCCTGRAA TTTAATAAAA AAGAAACACA AGAATTTCTA ACAAAAGCAA CAAAAACAAA    480\nCCTTATTACT CAAAAAGTGA AGAGTACTAG GGATGAAGAC ACGGATACAG ATGGAGATTC    540\nTATTCCAGAC ATTTGGGAAG AAAATGGGTA TACCATCCAA AATAAGATTG CCGTCAAATG    600\nGGATGATTCA TTAGCAAGTA AAGGATATAC GAAATTTGTT TCAAACCCAC TAGATACTCA    660\nCACGGTTGGA GATCCTTATA CAGATTATGA AAAAGCAGCA AGGGATTTAG ATTTGTCAAA    720\nTGCAAAAGAA ACATTTAACC CATTAGTTGC GGCTTTTCCA AGTGTGAATG TGAGTATGGA    780\nAAAAGTGATA TTGTCTCCAG ATGAGAACTT ATCAAATAGT ATCGAGTCTC ATTCATCTAC    840\nGAATTGGTCG TATACGAATA CAGAAGGGGC TTCTATTGAA GCTGGTGGGG GAGCATTAGG    900\nCCTATCTTTT GGTGTAAGTG CAAACTATCA ACATTCTGAA ACAGTTGGGT ATGAATGGGG    960\nAACATCTACG GGAAATACTT CGCAATTTAA TACAGCTTCA GCGGGGTATT TAAATGCCAA   1020\nTRTAMGATAT                                                          1030\n(2)SEQ ID NO.39的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：23个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.39\nCACTCAAAAA ATGAAAAGGG AAA    23\n(2)SEQ ID NO.40的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：19个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.40\nCCGGTTTTAT TGATGCTAC         19\n(2)SEQ ID NO.41的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：20个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.41\nAGAACAATTT TTAGATAGGG        20\n(2)SEQ ID NO.42的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：20个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.42\nTCCCTAAAGC ATCAGAAATA    20\n(2)SEQ ID NO.43的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1170个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n(ii)分子类型：DNA(基因组)\n(xi)序列描述：SEQ ID NO.43\nATGAAGAAAC AAATAGCAAG CGTTGTAACT TGTACGCTAT TAGCCCCTAT GCTTTTTAAT     60\nGGAGATATGA ACGCTGCTTA CGCAGCTAGT CAAACAAAAC AAACACCTGC AGCTCAGGTA    120\nAACCAAGAGA AAGAAGTAGA TCGAAAAGGA TTACTTGGCT ATTACTTTAA AGGGAAAGAT    180\nTTTAATGATC TTACTGTATT TGCACCAACG CGTGGGAATA CTCTTGTATA TGATCAACAA    240\nACAGCAAATA CATTACTAAA TCAAAAACAA CAAGACTTTC AGTCTATTCG TTGGGTTGGT    300\nTTAATTCAAA GTAAAGAAGC AGGCGATTTT ACATTTAACT TATCAGATGA TGAACATACG    360\nATGATAGAAA TCGATGGGAA AGTTATTTCT AATAAAGGGA AAGAAAAACA AGTTGTCCAT    420\nTTAGAAAAAG GACAGTTCGT TTCTATAAAA TGATTCAGCT GATGAACCAT TTAATGCGGT    480\nAGTAAACCTT TAAAAATTTG AAACTCTTTA AAGTAGATAC TAAGCAACAG TCCCAGCAAA    540\nTTCAACTAGA TGAATTAAGA AACCCTGAAT TTAATAAAAA AGAAACACAA GAATTTCTAA    600\nCAAAAGCAAC AAAAACAAAC CTTATTACTC AAAAAGTGAA GAGTACTAGG GATGAAGACA    660\nCGGATACAGA TGGAGATTCT ATTCCAGACA TTTGGGAAGA AAATGGGTAT ACCATCCAAA    720\nATAAATTGCC GTCAAATGGG ATGATTCATT AGCAAGTAAA GGATATACGA AATTTGTTTC    780\nAAACCCACTA GATACTCACA CGGTTGGAGA TCCTTATACA GATTATGAAA AAGCAGCAAG    840\nGGATTTAGAT TTGTCAAATG CAAAAGAAAC ATTTAACCCA TTAGTTGCGG CTTTTCCAAG    900\nTGTAATTGAG TATGGAAAAA GGATTTGTTC CAGATGAGAA CTTATCAAAT AGTATCGAGT    960\nTCATTCATTC CTACAATTGG TCGATACGAA TACAGAAGGG GCTTCTATTG AAGCTGGTGG   1020\nGGGAGCATTA GGCCTATCTT TTGGTGTAAG TGCAAACTAT CAACATTCTG AAACAGTTGG   1080\nGTATGAATGG GGAACATCTA CGGGAAATAC TTCGCAATTT AATACAGCTT CAGCGGGGTA   1140\nTTTAAATGCG AATGTTGCTA CAATAACGTG                                    1170\n(2)SEQ ID NO.44的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：348个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：蛋白质\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.44\nMet Lys Lys Gln Ile Ala Ser Val Val Thr Cys Thr Leu Leu Ala Pro\n1               5                   10                  15\nMet Leu Phe Asn Gly Asp Met Asn Ala Ala Tyr Ala Ala Ser Gln Thr\n            20                  25                  30\nLys Gln Thr Pro Ala Ala Gln Val Asn Gln Glu Lys Glu Val Asp Arg\n        35                  40                  45\nLys Gly Leu Leu Gly Tyr Tyr Phe Lys Gly Lys Asp Phe Asn Asp Leu\n    50                  55                  60\nThr Val Phe Ala Pro Thr Arg Gly Asn Thr Leu Val Tyr Asp Gln Gln\n65                  70                  75                  80\nThr Ala Asn Thr Leu Leu Asn Gln Lys Gln Gln Asp Phe Gln Ser Ile\n                85                  90                  95\nArg Trp Val Gly Leu Ile Gln Ser Lys Glu Ala Gly Asp Phe Thr Phe\n            100                 105                 110\nAsn Leu Ser Asp Asp Glu His Thr Met Ile Glu Ile Asp Gly Lys Val\n        115                 120                 125\nIle Ser Asn Lys Gly Lys Glu Lys Gln Val Val His Leu Glu Lys Gly\n    130                 135                 140\nGln Phe Val Ser Xaa Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Ala Asp Glu Pro Phe Asn\n145                 150                 155                 160\nAla Xaa Ser Xaa Thr Phe Lys Asn Leu Lys Leu Phe Lys Val Asp Thr\n                165                 170                 175\nLys Gln Gln Ser Gln Gln Ile Gln Leu Asp Glu Leu Arg Asn Pro Glu\n            180                 185                 190\nPhe Asn Lys Lys Glu Thr Gln Glu Phe Leu Thr Lys Ala Thr Lys Thr\n        195                 200                 205\nAsn Leu Ile Thr Gln Lys Val Lys Ser Thr Arg Asp Glu Asp Thr Asp\n    210                 215                 220\nThr Asp Gly Asp Ser Ile Pro Asp Ile Trp Glu Glu Asn Gly Tyr Thr\n225                 230                 235                 240\nIle Gln Asn Xaa Ile Ala Val Lys Trp Asp Asp Ser Leu Ala Ser Lys\n                245                 250                 255\nGly Tyr Thr Lys Phe Val Ser Asn Pro Leu Asp Thr His Thr Val Gly\n            260                 265                 270\nAsp Pro Tyr Thr Asp Tyr Glu Lys Ala Ala Arg Asp Leu Asp Leu Set\n        275                 280                 285\nAsn Ala Lys Glu Thr Phe Asn Pro Leu Val Ala Ala Phe Pro Set Val\n    290                 295                 300\nAsn Xaa Ser Met Glu Lys Xaa Ile Leu Xaa Pro Asp Glu Asn Leu Ser\n305                 310                 315                 320\nAsn Ser Ile Glu Xaa His Ser Phe Leu Xaa Ile Gly Arg Ile Arg Ile\n                325                 330                 335\nGln Lys Gly Leu Leu Leu Lys Leu Val Gly Glu His\n            340                 345\n(2)SEQ ID NO.45的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：3个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.45\nATG            3\n(2)SEQ ID NO.46的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：蛋白质\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.46\nMet\n1\n(2)SEQ ID NO.47的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：2583个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.47\nATGACATATA TGAAAAAAAA GTTAGTTAGT GTTGTAACTT GCACGTTATT GGCTCCGATA     60\nTTTTTGACTG GAAATGTACA TCCTGTTAAT GCAGACAGTA AAAAAAGTCA GCCTTCTACA    120\nGCGCAGGAAA AACAAGAAAA GCCGGTTGAT CGAAAAGGGT TACTCGGCTA TTTTTTTAAA    180\nGGGAAAGAGT TTAATCATCT TACTTTGTTC GCACCAACAC GTGATAATAC CCTTATTTAT    240\nGATCAACAAA CAGCGAATTC CTTATTAGAT ACCAAACAAC AAGAATATCA ATCTATTCGC    300\nTGGATTGGTT TGATTCAAAG TAAAGAAACA GGTGATTTCA CGTTTAACTT ATCTGATGAT    360\nCAAAATGCAA TTATAGAAAT AGATGGCAAA ATCATTTCGC ATAAAGGACA GAATAAACAA    420\nGTTGTTCACT TAGAAAAAGG AAAGTTAGTC CCGATAAAAA TTGAGTATCA ATCAGATCAG     480\nATATTAACTA GGGATAGTAA CATCTTTAAA GAGTTTCAAT TATTCAAAGT AGATAGTCAG     540\nCAACACTCTC ACCAAGTTCA ACTAGACGAA TTAAGAAACC CTGATTTTAA TAAAAAAGAA     600\nACACAACAAT TCTTAGAAAA AGCAGCAAAA ACAAATCTTT TTACACAGAA TATGAAAAGA     660\nGATACGGATG ATGATGATGA TACGGATACA GATGGAGATT CTATTCCTGA CCTTTGGGAA     720\nGAAAATGGGT ATACCATCCA AAATAAAGTA GCTGTCAAGT GGGATGATTC ATTCGCCGCG     780\nAAAGGGTATA CAAAATTTGT TTCTAATCCA CTTGAGAGTC ATACAGTTGG AGATCCCTAT     840\nACGGATTATG AAAAAGCAGC AAGAGATTTA GACTTGGCCA ATGCAAAAGA AACATTTAAC     900\nCCATTAGTAG CTGCTTTTCC AAGTGTGAAT GTGAATTTGG AAAAAGTAAT ATTATCCCCA     960\nGATGAGAATT TATCTAACAG TGTAGAATCT CATTCGTCTA CAAATTGGTC TTATACGAAT    1020\nACTGAAGGAG CTTCTATCGA AGCTGGGGGT GGTCCATTAG GTATTTCATT TGGAGTGAGT    1080\nGCTAATTATC AACACTCTGA AACAGTTGCA AAAGAATGGG GAACATCTAC AGGAAATACC    1140\nTCGCAATTTA ATACAGCTTC AGCAGGATAT TTGAATGCGA ATGTTCGATA CAATAATGTG    1200\nGGAACAGGTG CGATTTATGA GGTGAAACCT ACAACAAGTT TTGTATTAGA TAAAGATACT    1260\nGTAGCAACAA TTACCGCAAA ATCGAATTCG ACAGCTTTAA GTATATCTCC AGGAGAAAGT    1320\nTATCCCAAAA AAGGACAAAA TGGAATTGCA ATTAATACAA TGGATGATTT TAATTCCCAT    1380\nCCGATTACAT TAAATAAACA ACAATTAGAT CAACTATTAA ATAATAAACC TCTTATGTTA    1440\nGAAACAAATC AGGCAGATGG TGTTTATAAA ATAAAGGATA CAAGCGGTAA TATTGTGACT    1500\nGGTGGAGAAT GGAACGGTGT TATCCAACAA ATTCAAGCAA AAACAGCCTC TATTATCGTT    1560\nGATACGGGAG AAAGTGTTTC AGAAAAGCGT GTCGCAGCAA AAGATTATGA TAATCCTGAG    1620\nGATAAAACAC CTTCTTTATC TTTAAAAGAG GCACTTAAAC TTGGATATCC AGAAGAAATT    1680\nAAAGAAAAAG ATGGATTGTT GTACTATAAG GACAAGCCAA TTTACGAATC TAGTGTTATG    1740\nACTTATCTAG ATGAGAATAC AGCCAAGGAA GTGGAAAAAC AATTACAGGA TACAACCGGA    1800\nATATATAAAG ATATCAATCA TTTATATGAT GTGAAATTAA CACCTACAAT GAATTTTACG    1860\nATTAAATTAG CTTCCTTATA TGATGGAGCT GAAAATAATG ATGTGAAGAA TGGTCCTATA    1920\nGGACATTGGT ATTATACCTA TAATACAGGG GGAGGAAATA CTGGAAAACA CCAATATAGG    1980\nTCTGCTAATC CCAGTGCAAA TGTAGTTTTA TCTTCTGAAG CGAAAAGTAA GTTAGATAAA    2040\nAATACAAATT ACTACCTTAG TATGTATATG AAAGCTGAGT CTGATACAGA GCCTACAATA    2100\nGAAGTAAGTG GTGAGAATTC TACGATAACG AGTAAAAAGG TAAAACTAAA CAGTGAGGGC    2160\nTATCAAAGAG TAGATATTTT AGTGCCGAAT TCTGAAAGAA ATCCAATAAA TCAAATATAT    2220\nGTAAGAGGAA ATAATACAAC AAATGTATAC TGGGATGATG TTTCAATTAC AAATATTTCA    2280\nGCTATAAACC CAAAAACTTT AACAGATGAA GAAATTAAAG AAATATATAA AGATTTTAGT    2340\nGAGTCTAAAG ACTGGCCTTG GTTCAATGAT GTTACGTTTA AAAATATTAA ACCATTAGAG    2400\nAATTATGTAA AACAATATAG AGTTGATTTC TGGAATACTA ATAGTGATAG ATCATTTAAT    2460\nAGGATTAAGG ACAGTTACCC AGTTAATGAA GATGGAAGTG TTAAAGTCAA CATGACAGAA    2520\nTATAATGAAG GATATCCACT TAGAATTGAA TCCGCCTACC ATTTAAATAT TTCAGATCTA    2580\nTAA                                                                  2583\n(2)SEQ ID NO.48的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：860个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：蛋白质\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.48\nMet Thr Tyr Met Lys Lys Lys Leu Val Ser Val Val Thr Cys Thr Leu\n1               5                   10                  15\nLeu Ala Pro Ile Phe Leu Thr Gly Asn Val His Pro Val Asn Ala Asp\n            20                  25                  30\nSer Lys Lys Ser Gln Pro Ser Thr Ala Gln Glu Lys Gln Glu Lys Pro\n        35                  40                  45\nVal Asp Arg Lys Gly Leu Leu Gly Tyr Phe Phe Lys Gly Lys Glu Phe\n    50                  55                  60\nAsn His Leu Thr Leu Phe Ala Pro Thr Arg Asp Asn Thr Leu Ile Tyr\n65                  70                  75                  80\nAsp Gln Gln Thr Ala Asn Ser Leu Leu Asp Thr Lys Gln Gln Glu Tyr\n                85                  90                  95\nGln Ser Ile Arg Trp Ile Gly Leu Ile Gln Ser Lys Glu Thr Gly Asp\n            100                 105                 110\nPhe Thr Phe Asn Leu Ser Asp Asp Gln Asn Ala Ile Ile Glu Ile Asp\n        115                 120                 125\nGly Lys Ile Ile Ser His Lys Gly Gln Asn Lys Gln Val Val His Leu\n    130                 135                 140\nGlu Lys Gly Lys Leu Val Pro Ile Lys Ile Glu Tyr Gln Ser Asp Gln\n145                 150                 155                 160\nIle Leu Thr Arg Asp Ser Asn Ile Phe Lys Glu Phe Gln Leu Phe Lys\n                165                 170                 175\nVal Asp Ser Gln Gln His Ser His Gln Val Gln Leu Asp Glu Leu Arg\n            180                 185                 190\nAsn Pro Asp Phe Asn Lys Lys Glu Thr Gln Gln Phe Leu Glu Lys Ala\n        195                 200                 205\nAla Lys Thr Asn Leu Phe Thr Gln Asn Met Lys Arg Asp Thr Asp Asp\n    210                 215                 220\nAsp Asp Asp Thr Asp Thr Asp Gly Asp Ser Ile Pro Asp Leu Trp Glu\n225                 230                 235                 240\nGlu Asn Gly Tyr Thr Ile Gln Asn Lys Val Ala Val Lys Trp Asp Asp\n                245                 250                 255\nSer Phe Ala Ala Lys Gly Tyr Thr Lys Phe Val Ser Asn Pro Leu Glu\n            260                 265                 270\nSer His Thr Val Gly Asp Pro Tyr Thr Asp Tyr Glu Lys Ala Ala Arg\n        275                 280                 285\nAsp Leu Asp Leu Ala Asn Ala Lys Glu Thr Phe Asn Pro Leu Val Ala\n    290                 295                 300\nAla Phe Pro Ser Val Asn Val Asn Leu Glu Lys Val Ile Leu Ser Pro\n305                 310                 315                 320\nAsp Glu Asn Leu Ser Asn Ser Val Glu Ser His Ser Ser Thr Asn Trp\n                325                 330                 335\nSer Tyr Thr Asn Thr Glu Gly Ala Ser Ile Glu Ala Gly Gly Gly Pro\nLeu Gly Ile Ser Phe Gly Val Ser Ala Asn Tyr Gln His Ser Glu Thr\n        355                 360                 365\nVal Ala Lys Glu Trp Gly Thr Ser Thr Gly Asn Thr Ser Gln Phe Asn\n    370                 375                 380\nThr Ala Ser Ala Gly Tyr Leu Asn Ala Asn Val Arg Tyr Asn Asn Val\n385                 390                 395                 400\nGly Thr Gly Ala Ile Tyr Glu Val Lys Pro Thr Thr Ser Phe Val Leu\n                405                 410                 415\nAsp Lys Asp Thr Val Ala Thr Ile Thr Ala Lys Ser Asn Ser Thr Ala\n            420                 425                 430\nLeu Ser Ile Ser Pro Gly Glu Ser Tyr Pro Lys Lys Gly Gln Asn Gly\n        435                 440                 445\nIle Ala Ile Asn Thr Met Asp Asp Phe Asn Ser His Pro Ile Thr Leu\n    450                 455                 460\nAsn Lys Gln Gln Leu Asp Gln Leu Leu Asn Asn Lys Pro Leu Met Leu\n465                 470                 475                 480\nGlu Thr Asn Gln Ala Asp Gly Val Tyr Lys Ile Lys Asp Thr Ser Gly\n                485                 490                 495\nAsn Ile Val Thr Gly Gly Glu Trp Asn Gly Val Ile Gln Gln Ile Gln\n            500                 505                 510\nAla Lys Thr Ala Ser Ile Ile Val Asp Thr Gly Glu Ser Val Ser Glu\n        515                 520                 525\nLys Arg Val Ala Ala Lys Asp Tyr Asp Asn Pro Glu Asp Lys Thr Pro\n    530                 535                 540\nSer Leu Ser Leu Lys Glu Ala Leu Lys Leu Gly Tyr Pro Glu Glu Ile\n545                 550                 555                 560\nLys Glu Lys Asp Gly Leu Leu Tyr Tyr Lys Asp Lys Pro Ile Tyr Glu\n                565                 570                 575\nSer Ser Val Met Thr Tyr Leu Asp Glu Asn Thr Ala Lys Glu Val Glu\n            580                 585                 590\nLys Gln Leu Gln Asp Thr Thr Gly Ile Tyr Lys Asp Ile Asn His Leu\n        595                 600                 605\nTyr Asp Val Lys Leu Thr Pro Thr Met Asn Phe Thr Ile Lys Leu Ala\n    610                 615                 620\nSer Leu Tyr Asp Gly Ala Glu Asn Asn Asp Val Lys Asn Gly Pro Ile\n625                 630                 635                 640\nGly His Trp Tyr Tyr Thr Tyr Asn Thr Gly Gly Gly Asn Thr Gly Lys\n                645                 650                 655\nHis Gln Tyr Arg Ser Ala Asn Pro Ser Ala Asn Val Val Leu Ser Ser\n            660                 665                 670\nGlu Ala Lys Ser Lys Leu Asp Lys Asn Thr Asn Tyr Tyr Leu Ser Met\n        675                 680                 685\nTyr Met Lys Ala Glu Ser Asp Thr Glu Pro Thr Ile Glu Val Ser Gly\n    690                 695                 700\nGlu Asn Ser Thr Ile Thr Ser Lys Lys Val Lys Leu Asn Ser Glu Gly\n705                 710                 715                 720\nTyr Gln Arg Val Asp Ile Leu Val Pro Asn Ser Glu Arg Asn Pro Ile\n                725                 730                 735\nAsn Gln Ile Tyr Val Arg Gly Asn Asn Thr Thr Asn Val Tyr Trp Asp\n            740                 745                 750\nAsp Val Ser Ile Thr Asn Ile Ser Ala Ile Asn Pro Lys Thr Leu Thr\n        755                 760                 765\nAsp Glu Glu Ile Lys Glu Ile Tyr Lys Asp Phe Ser Glu Ser Lys Asp\n    770                 775                 780\nTrp Pro Trp Phe Asn Asp Val Thr Phe Lys Asn Ile Lys Pro Leu Glu\n785                 790                 795                 800\nAsn Tyr Val Lys Gln Tyr Arg Val Asp Phe Trp Asn Thr Asn Ser Asp\n                805                 810                 815\nArg Ser Phe Asn Arg Ile Lys Asp Ser Tyr Pro Val Asn Glu Asp Gly\n            820                 825                 830\nSer Val Lys Val Asn Met Thr Glu Tyr Asn Glu Gly Tyr Pro Leu Arg\n        835                 840                 845\nIle Glu Ser Ala Tyr His Leu Asn Ile Ser Asp Leu\n    850                 855                 860\n(2)SEQ ID NO.49的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：1356个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.49\nATGGTATCCA AAAAGTTACA ATTAGTCACA AAAACTTTAG TGTTTAGTAC AGTTTTGTCA     60\nATACCGTTAT TAAATAATAG TGAGATAAAA GCGGAACAAT TAAATATGAA TTCTCAAATT    120\nAAATATCCTA ACTTCCAAAA TATAAATATC GCTGATAAGC CAGTAGATTT TAAAGAGGAT    180\nAAAGAAAAAG CACGAGAATG GGGAAAAGAA AAAGAAAAAG AGTGGAAACT AACTGCTACT    240\nGAAAAAGGGA AAATTAATGA TTTTTTAGAT GATAAAGATG GATTAAAAAC AAAATACAAA    300\nGAAATTAATT TTTCTAAGAA TTTTGAATAT GAAACAGAGT TAAAACAGCT TGAAAAATT     360\nAATAGCATGC TAGATAAAGC AAATCTAACA AATTCAATTG TCACGTATAA AAACGTTGAG    420\nCCTACAACAA TAGGATTCAA TCACTCTTTG ACTGATGGGA ATCAAATTAA TTCCGAAGCT    480\nCAACAGAAGT TCAAGGAACA GTTTTTAGGA AATGATATTA AATTTGATAG TTATTTGGAT    540\nATGCACTTAA CTGAACAAAA TGTTTCCGGT AAAGAAAGGG TTATTTTAAA AGTTACAGTA    600\nCTTAGTGGGA AAGGTTCTAC TCCAACAAAA GCAGGTGTTG TTTTAAATAA TAAAGAATAC    660\nAAAATGTTGA TTGATAATGG ATATATACTA CATGTAGAAA ACATAACGAA AGTTGTAAAA    720\nAAAGGACAGG AATGTTTACA AGTTGAAGGA ACGTTAAAAA AGAGCTTGGA CTTTAAAAAT    780\nGATAGTGACG GTAAGGGAGA TTCCTGGGGA AAGAAAAATT ACAAGGAATG GTCTGATTCT    840\nTTAACAAATG ATCAGAGAAA AGACTTAAAT GATTATGGTG CGCGAGGTTA TACCGAAATA    900\nAATAAATATT TACGTGAAGG GGGTACCGGA AATACAGAGT TGGAGGAAAA AATTAAAAAT    960\nATTTCTGACG CACTAGAAAA GAATCCTATC CCTGAAAACA TTACTGTTTA TAGATATTGC   1020\nGGAATGGCGG AATTTGGTTA TCCAATTCAA CCCGAGGCTC CCTCCGTACA AGATTTTGAA   1080\nGAGAAATTTT TGGATAAAAT TAAGGAAGAA AAAGGATATA TGAGTACGAG CTTATCAAGT   1140\nGATGCGACTT CTTTTGGCGC AAGAAAAATT ATCTTAAGAT TGCAGATACC AAAAGGAAGT   1200\nTCAGGAGCAT ATGTAGCTGG TTTAGATGGA TTTAAACCAG CAGAGAAGGA GATTCTTATT   1260\nGATAAGGGAA GCAAGTATCA TATTGATAAA GTAACAGAAG TAGTTGTGAA AGGTATTAGA   1320\nAAACTCGTAG TAGATGCGAC ATTATTATTA AAATAA                             1356\n(2)SEQ ID NO.50的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：451个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.50\nMet Val Ser Lys Lys Leu Gln Leu Val Thr Lys Thr Leu Val Phe Ser\n1               5                   10                  15\nThr Val Leu Ser Ile Pro Leu Leu Asn Asn Ser Glu Ile Lys Ala Glu\n            20                  25                  30\nGln Leu Asn Met Asn Ser Gln Ile Lys Tyr Pro Asn Phe Gln Asn Ile\n        35                  40                  45\nAsn Ile Ala Asp Lys Pro Val Asp Phe Lys Glu Asp Lys Glu Lys Ala\n    50                  55                  60\nArg Glu Trp Gly Lys Glu Lys Glu Lys Glu Trp Lys Leu Thr Ala Thr\n65                  70                  75                  80\nGlu Lys Gly Lys Ile Asn Asp Phe Leu Asp Asp Lys Asp Gly Leu Lys\n                85                  90                  95\nThr Lys Tyr Lys Glu Ile Asn Phe Ser Lys Asn Phe Glu Tyr Glu Thr\n            100                 105                 110\nGlu Leu Lys Gln Leu Glu Lys Ile Asn Ser Met Leu Asp Lys Ala Asn\n        115                 120                 125\nLeu Thr Asn Ser Ile Val Thr Tyr Lys Asn Val Glu Pro Thr Thr Ile\n    130                 135                 140\nGly Phe Asn His Ser Leu Thr Asp Gly Asn Gln Ile Asn Ser Glu Ala\n145                 150                 155                 160\nGln Gln Lys Phe Lys Glu Gln Phe Leu Gly Asn Asp Ile Lys Phe Asp\n                165                 170                 175\nSer Tyr Leu Asp Met His Leu Thr Glu Gln Asn Val Ser Gly Lys Glu\n            180                 185                 190\nArg Val Ile Leu Lys Val Thr Val Leu Ser Gly Lys Gly Ser Thr Pro\n        195                 200                 205\nThr Lys Ala Gly Val Val Leu Asn Asn Lys Glu Tyr Lys Met Leu Ile\n    210                 215                 220\nAsp Asn Gly Tyr Ile Leu His Val Glu Asn Ile Thr Lys Val Val Lys\n225                 230                 235                 240\nLys Gly Gln Glu Cys Leu Gln Val Glu Gly Thr Leu Lys Lys Ser Leu\n                245                 250                 255\nAsp Phe Lys Asn Asp Ser Asp Gly Lys Gly Asp Ser Trp Gly Lys Lys\n            260                 265                 270\nAsn Tyr Lys Glu Trp Ser Asp Ser Leu Thr Asn Asp Gln Arg Lys Asp\n        275                 280                 285\nLeu Asn Asp Tyr Gly Ala Arg Gly Tyr Thr Glu Ile Asn Lys Tyr Leu\n    290                 295                 300\nArg Glu Gly Gly Thr Gly Asn Thr Glu Leu Glu Glu Lys Ile Lys Asn\n305                 310                 315                 320\nIle Ser Asp Ala Leu Glu Lys Asn Pro Ile Pro Glu Asn Ile Thr Val\n                325                 330                 335\nIyr Arg Tyr Cys Gly Met Ala Glu Phe Gly Tyr Pro Ile Gln Pro Glu\n            340                 345                 350\nAla Pro Ser Val Gln Asp Phe Glu Glu Lys Phe Leu Asp Lys Ile Lys\n        355                 360                 365\nGlu Glu Lys Gly Tyr Met Ser Thr Ser Leu Ser Ser Asp Ala Thr Ser\n    370                 375                 380\nPhe Gly Ala Arg Lys Ile Ile Leu Arg Leu Gln Ile Pro Lys Gly Ser\n385                 390                 395                 400\nSer Gly Ala Tyr Val Ala Gly Leu Asp Gly Phe Lys Pro Ala Glu Lys\n                405                 410                 415\nGlu Ile Leu Ile Asp Lys Gly Ser Lys Tyr His Ile Asp Lys Val Thr\n            420                 425                 430\nGlu Val Val Val Lys Gly Ile Arg Lys Leu Val Val Asp Ala Thr Leu\n        435                 440                 445\nLeu Leu Lys\n    450\n(2)SEQ ID NO.的资料：51\n  (i)序列特征\n    (A)长度：47个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.51\nGCTCTAGAAG GAGGTAACTT ATGAACAAGA ATAATACTAA ATTAAGC    47\n(2)SEQ ID NO.52的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：27个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.52\nGGGGTACCTT ACTTAATAGA GACATCG    27\n(2)SEQ ID NO.53的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：2364个碱基对\n    (B)类型：核酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：DNA(基因组)\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.53\nATGAATATGA ATAATACTAA ATTAAACGCA AGGGCCCTAC CGAGTTTTAT TGATTATTTT     60\nAATGGCATTT ATGGATTTGC CACTGGTATC AAAGACATTA TGAATATGAT TTTTAAAACG    120\nGATACAGGTG GTAATCTAAC CTTAGACGAA ATCCTAAAGA ATCAGCAGTT ACTAAATGAG    180\nATTTCTGGTA AATTGGATGG GGTAAATGGG AGCTTAAATG ATCTTATCGC ACAGGGAAAC    240\nTTAAATACAG AATTATCTAA GGAAATCTTA AAAATTGCAA ATGAACAGAA TCAAGTCTTA    300\nAATGATGTTA ATAACAAACT CGATGCGATA AATACGATGC TTCATATATA TCTACCTAAA    360\nATCACATCTA TGTTAAGTGA TGTAATGAAG CAAAATTATG CGCTAAGTCT GCAAGTAGAA    420\nTACTTAAGTA AACAATTGAA AGAAATTTCT GATAAATTAG ATGTTATTAA CGTAAATGTT    480\nCTTATTAACT CTACACTTAC TGAAATTACA CCTGCATATC AACGGATTAA ATATGTAAAT    540\nGAAAAATTTG AAGAATTAAC TTTTGCTACA GAAACCACTT TAAAAGTAAA AAAGGATAGC    600\nTCGCCTGCTG ATATTCTTGA CGAGTTAACT GAATTAACTG AACTAGCGAA AAGTGTTACA    660\nAAAAATGACG TGGATGGTTT TGAATTTTAC CTTAATACAT TCCACGATGT AATGGTAGGA    720\nAATAATTTAT TCGGGCGTTC AGCTTTAAAA ACTGCTTCAG AATTAATTGC TAAAGAAAAT     780\nGTGAAAACAA GTGGCAGTGA AGTAGGAAAT GTTTATAATT TCTTAATTGT ATTAACAGCT     840\nCTACAAGCAA AAGCTTTTCT TACTTTAACA ACATGCCGAA AATTATTAGG CTTAGCAGAT     900\nATTGATTATA CATCTATTAT GAATGAACAT TTAAATAAGG AAAAAGAGGA ATTTAGAGTA     960\nAACATCCTTC CTACACTTTC TAATACTTTT TCTAATCCTA ATTATGCAAA AGTTAAAGGA    1020\nAGTGATGAAG ATGCAAAGAT GATTGTGGAA GCTAAACCAG GACATGCATT GGTTGGGTTT    1080\nGAAATTAGTA ATGATTCAAT GACAGTATTA AAAGTATATG AAGCTAAGCT AAAACAAAAT    1140\nTACCAAGTTG ATAAGGATTC CTTATCGGAA GTCATTTATA GTGATATGGA TAAATTATTG    1200\nTGCCCAGATC AATCTGAACA AATTTATTAT ACAAATAATA TAGTATTTCC AAATGAATAT    1260\nGTAATTACTA AAATTGATTT TACTAAGAAA ATGAAAACTT TAAGATATGA GGTAACAGCT    1320\nAATTCTTACG ATTCTTCTAC AGGAGAAATT GACTTAAATA AGAAGAAAGT AGAATCAAGT    1380\nGAAGCGGAGT ATAGGACGTT AAGTGCTAAT AATGATGGAG TATATATGCC GTTAGGTGTC    1440\nATCAGTGAAA CATTTTTGAC TCCAATTAAT GGATTTGGCC TCCAAGCTGA TGAAAATTCA    1500\nAGATTAATTA CTTTAACATG TAAATCATAT TTAAGGGAAC TACTACTAGC GACAGACTTA    1560\nAGCAATAAAG AAACTAAATT GATTGTCCCG CCTATTAGTT TTATTAGTAA TATTGTAGAA    1620\nAATGGGAACT TAGAGGGAGA AAACTTAGAG CCGTGGATAG CAAATAACAA AAATGCGTAT    1680\nGTAGATCATA CAGGTGGTAT AAATGGAACT AAAGTTTTAT ATGTTCATAA GGATGGTGAG    1740\nTTTTCACAAT TTGTTGGAGG TAAGTTAAAA TCGAAAACAG AATATGTAAT TCAATATATT    1800\nGTAAAGGGAA AAGCTTCTAT TTATTTAAAA GATAAAAAAA ATGAGAATTC CATTTATGAA    1860\nGAAATAAATA ATGATTTAGA AGGTTTTCAA ACTGTTACTA AACGTTTTAT TACAGGAACG    1920\nGATTCTTCAG GGATTCATTT AATTTTTACC AGTCAAAATG GCGAGGGAGC ATTTGGAGGA    1980\nAACTTTATTA TCTCAGAAAT TAGGACATCC GAAGAGTTAT TAAGTCCAGA ATTGATTATG    2040\nTCGGATGCTT GGGTTGGATC CCAGGGAACT TGGATCTCAG GAAATTCTCT CACTATTAAT    2100\nAGTAATGTAA ATGGAACCTT TCGACAAAAT CTTCCGTTAG AAAGTTATTC AACCTATAGT    2160\nATGAACTTTA CTGTGAATGG ATTTGGCAAG GTGACAGTAA GAAATTCTCG TGAAGTATTA    2220\nTTTGAAAAAA GTTATCCGCA GCTTTCACCT AAAGATATTT CTGAAAAATT TACAACTGCA    2280\nGCCAATAATA CCGGATTATA TGTAGAGCTT TCTCGCTCAA CGTCGGGTGG TGCAATAAAT    2340\nTTCCGAGATT TTTCAATTAA GTAA                                           2364\n(2)SEQ ID NO.54的资料：\n  (i)序列特征\n    (A)长度：787个氨基酸\n    (B)类型：氨基酸\n    (C)链型：单链\n    (D)拓扑结构：线性\n  (ii)分子类型：蛋白质\n  (xi)序列描述：SEQ ID NO.54\nMet Asn Met Asn Asn Thr Lys Leu Asn Ala Arg Ala Leu Pro Ser Phe\n1               5                   10                  15\nIle Asp Tyr Phe Asn Gly Ile Tyr Gly Phe Ala Thr Gly Ile Lys Asp\n            20                  25                  30\nIle Met Asn Met Ile Phe Lys Thr Asp Thr Gly Gly Asn Leu Thr Leu\n        35                  40                  45\nAsp Glu Ile Leu Lys Asn Gln Gln Leu Leu Asn Glu Ile Ser Gly Lys\n    50                  55                  60\nLeu Asp Gly Val Asn Gly Ser Leu Asn Asp Leu Ile Ala Gln Gly Asn\n65                  70                  75                  80\nLeu Asn Thr Glu Leu Ser Lys Glu Ile Leu Lys Ile Ala Asn Glu Gln\n                85                  90                  95\nAsn Gln Val Leu Asn Asp Val Asn Asn Lys Leu Asp Ala Ile Asn Thr\n            100                 105                 110\nMet Leu His Ile Tyr Leu Pro Lys Ile Thr Ser Met Leu Ser Asp Val\n        115                 120                 125\nMet Lys Gln Asn Tyr Ala Leu Ser Leu Gln Val Glu Tyr Leu Ser Lys\n    130                 135                 140\nGln Leu Lys Glu Ile Ser Asp Lys Leu Asp Val Ile Asn Val Asn Val\n145                 150                 155                 160\nLeu Ile Asn Ser Thr Leu Thr Glu Ile Thr Pro Ala Tyr Gln Arg Ile\n                165                 170                 175\nLys Tyr Val Asn Glu Lys Phe Glu Glu Leu Thr Phe Ala Thr Glu Thr\n            180                 185                 190\nThr Leu Lys Val Lys Lys Asp Ser Ser Pro Ala Asp Ile Leu Asp Glu\n        195                 200                 205\nLeu Thr Glu Leu Thr Glu Leu Ala Lys Ser Val Thr Lys Asn Asp Val\n    210                 215                 220\nAsp Gly Phe Glu Phe Tyr Leu Asn Thr Phe His Asp Val Met Val Gly\n225                 230                 235                 240\nAsn Asn Leu Phe Gly Arg Ser Ala Leu Lys Thr Ala Ser Glu Leu Ile\n                245                 250                 255\nAla Lys Glu Asn Val Lys Thr Ser Gly Ser Glu Val Gly Asn Val Tyr\n            260                 265                 270\nAsn Phe Leu Ile Val Leu Thr Ala Leu Gln Ala Lys Ala Phe Leu Thr\n        275                 280                 285\nLeu Thr Thr Cys Arg Lys Leu Leu Gly Leu Ala Asp Ile Asp Tyr Thr\n    290                 295                 300\nSer Ile Met Asn Glu His Leu Asn Lys Glu Lys Glu Glu Phe Arg Val\n305                 310                 315                 320\nAsn Ile Leu Pro Thr Leu Ser Asn Thr Phe Ser Asn Pro Asn Tyr Ala\n                325                 330                 335\nLys Val Lys Gly Ser Asp Glu Asp Ala Lys Met Ile Val Glu Ala Lys\n            340                 345                 350\nPro Gly His Ala Leu Val Gly Phe Glu Ile Ser Asn Asp Ser Met Thr\n        355                 360                 365\nVal Leu Lys Val Tyr Glu Ala Lys Leu Lys Gln Asn Tyr Gln Val Asp\n    370                 375                 380\nLys Asp Ser Leu Ser Glu Val Ile Tyr Ser Asp Met Asp Lys Leu Leu\n385                 390                 395                 400\nCys Pro Asp Gln Ser Glu Gln Ile Tyr Tyr Thr Asn Asn Ile Val Phe\n                405                 410                 415\nPro Asn Glu Tyr Val Ile Thr Lys Ile Asp Phe Thr Lys Lys Met Lys\n            420                 425                 430\nThr Leu Arg Tyr Glu Val Thr Ala Asn Ser Tyr Asp Ser Ser Thr Gly\n        435                 440                 445\nGlu Ile Asp Leu Asn Lys Lys Lys Val Glu Ser Ser Glu Ala Glu Tyr\n    450                 455                 460\nArg Thr Leu Ser Ala Asn Asn Asp Gly Val Tyr Met Pro Leu Gly Val\n465                 470                 475                 480\nIle Ser Glu Thr Phe Leu Thr Pro Ile Asn Gly Phe Gly Leu Gln Ala\n                485                 490                 495\nAsp Glu Asn Ser Arg Leu Ile Thr Leu Thr Cys Lys Ser Tyr Leu Arg\n            500                 505                 510\nGlu Leu Leu Leu Ala Thr Asp Leu Ser Asn Lys Glu Thr Lys Leu Ile\n        515                 520                 525\nVal Pro Pro Ile Ser Phe Ile Ser Asn Ile Val Glu Asn Gly Asn Leu\n    530                 535                 540\nGlu Gly Glu Asn Leu Glu Pro Trp Ile Ala Asn Asn Lys Asn Ala Tyr\n545                 550                 555                 560\nVal Asp His Thr Gly Gly Ile Asn Gly Thr Lys Val Leu Tyr Val His\n                565                 570                 575\nLys Asp Gly Glu Phe Ser Gln Phe Val Gly Gly Lys Leu Lys Ser Lys\n            580                 585                 590\nThr Glu Tyr Val Ile Gln Tyr Ile Val Lys Gly Lys Ala Ser Ile Tyr\n        595                 600                 605\nLeu Lys Asp Lys Lys Asn Glu Asn Ser Ile Tyr Glu Glu Ile Asn Asn\n    610                 615                 620\nAsp Leu Glu Gly Phe Gln Thr Val Thr Lys Arg Phe Ile Thr Gly Thr\n625                 630                 635                 640\nAsp Ser Ser Gly Ile His Leu Ile Phe Thr Ser Gln Asn Gly Glu Gly\n                645                 650                 655\nAla Phe Gly Gly Asn Phe Ile Ile Ser Glu Ile Arg Thr Ser Glu Glu\n            660                 665                 670\nLeu Leu Ser Pro Glu Leu Ile Met Ser Asp Ala Trp Val Gly Ser Gln\n        675                 680                 685\nGly Thr Trp Ile Ser Gly Asn Ser Leu Thr Ile Asn Ser Asn Val Asn\n    690                 695                 700\nGly Thr Phe Arg Gln Asn Leu Pro Leu Glu Ser Tyr Ser Thr Tyr Ser\n705                 710                 715                 720\nMet Asn Phe Thr Val Asn Gly Phe Gly Lys Val Thr Val Arg Asn Ser\n                725                 730                 735\nArg Glu Val Leu Phe Glu Lys Ser Tyr Pro Gln Leu Ser Pro Lys Asp\n            740                 745                 750\nIle Ser Glu Lys Phe Thr Thr Ala Ala Asn Asn Thr Gly Leu Tyr Val\n        755                 760                 765\nGlu Leu Ser Arg Ser Thr Ser Gly Gly Ala Ile Asn Phe Arg Asp Phe\n    770                 775                 780\nSer Ile Lys\n785