一种具有降血脂作用的中药组合物及其制备方法和应用

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一种具有降血脂作用的中药组合物及其制备方法和应用\n技术领域\n[0001] 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种具有降血脂作用的中药组合物及其制备方法和应用。\n背景技术\n[0002] 当前应用的血脂调节药主要包括以下几类：\n[0003] 1.他汀类(statins)\n[0004] 能有效降低所有类型高脂血血症的胆固醇水平，然而，家族性高胆固醇血症缺乏LDL受体因而在药物治疗时效果大减。尽管它们具有降低胆固醇的保护作用，仍有大约四分之一使用药物的病人发生冠状动脉事件。\n[0005] 2.贝丁酸类，或称贝特类、甲氧芳酸类、纤维素类(fibrates)\n[0006] 能治疗高甘油三酯血症，引起血浆甘油三酯水平的显著降低，但不能治疗乳糜微粒升高而VLDL水平正常的Ⅰ型高脂血症。吉非贝齐对IDL颗粒聚集的Ⅲ型高脂血症的治\n疗中特别有效。最常见的不良反应是胃肠道功能紊乱。\n[0007] 3.烟酸及其衍生物类\n[0008] 具有光谱的降脂能力，最常见的不良反应是强烈的皮肤潮红和瘙痒。一些病人也有恶心和腹痛。烟酸抑制肾小管分泌尿酸因而诱发高尿酸血症和痛风。\n[0009] 4.胆汁酸结合树脂或胆酸螯合剂\n[0010] 目前用于临床的有考来烯胺和考来替泊，但是容易产生胃肠道反应，造成胃肠紊乱，如便秘、恶心和胃肠胀气。高剂量可妨碍脂溶性维生素A、D、E、K的吸收，叶酸和抗坏血酸的吸收也可减少。\n[0011] 5.普罗布考类\n[0012] 已提出了一系列的机制来解释普罗布考怎样降低血清胆固醇，但是机制仍不清\n楚。最近发现普罗布考抑制胆固醇的氧化，引起巨噬细胞摄取氧化的运载胆固醇的LDLS。\n轻度的胃肠反应最常见。它有一个更严重的问题是有延长QT间期的倾向，使用时须加以注意。\n[0013] 因此，现有的西药虽然疗效确切，但副作用大，而中药治疗高脂血症服用剂量大且无治疗肝损伤兼症的效果。\n发明内容\n[0014] 本发明的目的是提供一种具有降血脂药效、安全、起效快、治疗肝损伤兼症的中药组合物。\n[0015] 本发明的另一目的是提供该组合物的制备方法。\n[0016] 本发明还有一个目的是提供该组合物在制备降血脂、保肝的药物的应用。\n[0017] 本发明的目的是通过以下方式实现的：\n[0018] 一种具有降血脂作用的中药组合物，该组合物以荷叶、黄芩、漏芦和水飞蓟油为原料药制成，荷叶、黄芩和漏芦的重量比为1～5：1～5：1～5，水飞蓟油与三种药材之间的比例为1：2～4（ml/g），其中，水飞蓟油为水飞蓟种子中榨取的油脂。\n[0019] 该组合物优选荷叶、黄芩和漏芦的重量比为1～2：1～2：1～2，水飞蓟油与三种药材的比例为1：2.5～3（ml/g）。最优选荷叶、黄芩和漏芦的重量比为1：1：1，水飞蓟油与三种药材的比例为11：30（ml/g）。\n[0020] 所述的水飞蓟油是通过以下方法制备得到的：将水飞蓟种子脱皮，热蒸，压榨，即得水飞蓟油。\n[0021] 所述的中药组合物可与药学上可接受的载体制备成制剂。\n[0022] 上述药学上可接受的载体包括口服制剂辅料或胃肠外途径给药的辅料。给药途径可以是口服、注射、局部给药等。根据本发明的技术方案，该组合物可以是口服制剂或注射用制剂，其中口服制剂包括胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、口服液、散剂、片剂、丸剂、滴丸等。所用辅料包括：淀粉、蔗糖、乳糖、糖粉、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇、微晶纤维素钠、糊精、环糊精、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸、硫代硫酸钠、亚硫酸钠、硬脂酸盐和明胶等常规辅料，制剂的后期制备工艺及设备均属制药领域的常规技术，本发明对此不作限定，故在此不予详述。\n[0023] 本发明所述的具有降血脂作用的中药组合物的制备方法包括以下步骤：\n[0024] 称取荷叶、黄芩、漏芦药材加水煎煮1～3次，每次8～12倍量水，每次煎煮1～\n2h，水煎液合并、过滤、浓缩，得到A液，再将水飞蓟油、助溶剂在干燥的容器中研磨均匀，加入A液体积的10-30%，继续研磨均匀，再缓慢加入剩余的A液并研磨均匀得到乳液。优选制得浓度为0.4g生药/mL的乳液。该方法所述的助溶剂可以为吐温-80或乙醇。助溶剂与\n水飞蓟油体积比为0.5-1：1。\n[0025] 本发明所述的具有降血脂作用的中药组合物可在制备降血脂、保肝的药物中应\n用。\n[0026] 与现有技术比较本发明的有益效果：荷叶为睡莲科植物Nelumbo nucifera \nGaertn.的干燥叶，具有发汗解肌，温通经脉，助阳化气，平冲降气的功效，用于风寒感冒，脘腹冷痛，血寒经闭，关节痹痛，水肿，心悸等症。黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎的作用，用于湿温、暑温胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴等症。漏芦，为菊科植物祁州漏芦Rhaponticum unifiorum(L.)DC.的干燥根，具有清热解毒，消痈，下乳，舒筋通脉的作用，用于乳痈肿痛，痈疽发背，乳汁不通，湿痹拘挛。发明人综合上述原料药材的优势，结合现代新药研究手段，研制出具有降血脂药效、兼治肝损伤症的药物组合物，该药物组合物具有安全、起效快的特点。\n[0027] 以下通过具体试验例证明本发明的效果：\n[0028] 一、降脂本发明药物在降血脂方面与辛伐他汀和血脂康药效比较实验\n[0029] 1.材料和动物\n[0030] 氯化钠（批号：110615；西陇化工股份有限公司）；黄芩饮片（产地：内蒙，购自南京同仁堂药店，并经本人鉴定为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥\n根饮片）；漏芦饮片（产地：江苏，购自南京同仁堂药店，并经本人鉴定为菊科植物祁州漏芦Rhaponticum uniflorum(L.)的干燥根饮片）；荷叶饮片（产地：安徽，购自南京益丰大药房，经本人鉴定为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶的饮片）；水飞蓟种子（购自于西安）；辛伐他汀（批号111206；北京北大维信生物科技有限公司）；血脂康胶囊（批号\n20110308；北京北大维信生物科技有限公司）；总胆固醇(CHO)测定试剂盒（批号20120105；\n北京北化康临床试剂有限公司）；总甘油三酯(TG)测定试剂盒（批号20111103；北京北化康临床试剂有限公司）；低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒（批号20111207；北京北化康临床试剂有限公司）；高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒（批号20120105；北京北化康临床试剂有限公司）。\n[0031] 2.实验方法\n[0032] （1）试剂的配制\n[0033] 本发明药物1组：荷叶10g，黄芩10g，漏芦10g，水飞蓟油11ml。\n[0034] 本发明药物2组：荷叶10g，黄芩20g，漏芦20g，水飞蓟油20ml。\n[0035] 本发明药物3组：荷叶10g，黄芩50g，漏芦10g，水飞蓟油33ml。\n[0036] 本发明药物4组：荷叶10g，黄芩10g，漏芦50g，水飞蓟油22ml。\n[0037] 本发明药物5组：荷叶50g，黄芩50g，漏芦10g，水飞蓟油30ml。\n[0038] 本发明药物样品液的配制：称取荷叶、黄芩、漏芦，放置一个1000ml烧杯中，称重好的组方药材加水煎煮3次，每次为药材10倍重量水，每次煎煮1h（第一次煎煮前药材浸泡2小时），三次提取液合并，过滤，浓缩后备用，称为A液。用移液管分别移取水飞蓟油、与水飞蓟油体积比为0.7的吐温-80至干燥的研钵中，一个方向快速、不停歇的研磨数分钟至均匀，加入A液体积的20%，继续同方向研磨数分钟至均匀，再缓慢加入剩余的A液并研磨，研磨好的乳液转移至干净的小瓶中，分别得浓度为0.4g生药/mL的乳液待用。\n[0039] 含8%吐温-80的生理盐水的配制：精密称取精密称取NaCl 0.9397g，用92ml水\n和8ml吐温-80溶解，得到含8%吐温-80的生理盐水。\n[0040] 生理盐水的配制：精密称取精密称取NaCl 0.9053g，并用100ml水溶解，配成9%生理盐水。\n[0041] 辛伐他汀悬浮液的配制：精密称取辛伐他汀7片，共1.6787g，研磨辛伐他汀至细小的粉末，并用92ml水和8ml吐温-80溶解转移入小瓶中，配成70mg/100ml辛伐他汀悬浮\n液。\n[0042] 血脂康悬浮液的配制：5.0093g，研磨血脂康至细小的粉末，并用92ml水和8ml吐温-80溶解转移入小瓶中，配成0.5g/ml血脂康悬浮液。\n[0043] 75%蛋黄乳的配制：鸡蛋黄45ml，加入生理盐水15mL，搅拌均匀后过滤，得到75%蛋黄乳。\n[0044] 水飞蓟油的制备：将水飞蓟种子脱皮，热蒸，压榨，即得水飞蓟油。\n[0045] （2）小鼠分组和给药\n[0046] 昆明种小鼠90只，体重18~22g，雌雄各半。按体重随机分为9组，每组10只，分别为空白组、模型组、辛伐他汀组、血脂康组、本发明药物1组、本发明药物2组、本发明药物3组、本发明药物4组、本发明药物5组。各组小鼠灌胃给药，每日灌胃1次，空白组、模型组、辛伐他汀组、血脂康组和本发明药物组分别灌胃给予等体积（20ml/kg/d）含8%吐温-80的生理盐水、含8%吐温-80的生理盐水、血脂康悬浮液和本发明药物样品液；辛伐他汀的剂量为0.0014g/kg/d；血脂康的剂量为1g/kg/d；本发明药物的给药剂量为8g/kg/d；给药周期为14天。\n[0047] （3）急性高血脂模型造模方法\n[0048] 最后一次给药后开始禁食。2h后，各组均腹腔注射生理盐水配置的75%蛋黄乳（空白组除外），继续禁食22h。\n[0049] （4）血清CHO、TG、LDL-C和HDL-C的测定方法：按试剂盒说明书操作。\n[0050] 3．实验数据统计与结果\n[0051] 表1TC、TG、LDL-C和HDL-C统计结果（n=10，d=14）\n[0052] \n 组别 剂量(g/kg) TC TG LDL HDL\n 空白 - 3.93±0.47 1.71±0.61 0.22±0.12 3.66±0.54\n 模型 - 13.75±1.14** 19.52±2.17** 5.23±0.87** 3.07±0.67\n 辛伐他汀 0.0014g/kg 10.85±1.90△△ 15.14±3.19△△ 3.78±0.71△△ 3.08±0.68\n 血脂康 1g制剂/kg 11.31±1.54△△ 16.87±2.37△ 4.23±0.99△ 3.03±0.59\n 本发明药物1组 8g生药/kg 10.14±2.32△△ 14.35±2.57△△■ 3.71±0.79△△ 4.41±0.55△△■■\n 本发明药物2组 8g生药/kg 10.02±1.54△△ 14.11±2.10△△■ 3.54±1.59△△ 4.51±1.50△△■■\n 本发明药物3组 8g生药/kg 9.89±2.16△△ 13.28±1.68△△■ 3.49±1.28△△ 4.48±1.22△△■■\n 本发明药物4组 8g生药/kg 11.01±1.57△△ 13.77±2.32△△■ 3.59±0.93△△ 4.58±0.89△△■■\n 本发明药物5组 8g生药/kg 9.87±2.04△△ 13.39±2.18△△■ 3.39±1.36△△ 4.60±1.16△△■■[0053] 注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；\n与血脂康组比较，■P＜0.05，■■P＜0.01。\n[0054] 4．结果：\n[0055] 与空白组相比，高血脂症模型组的TC、TG、LDL水平有极显著地升高（P＜0.01）和HDL水平有显著降低（P＜0.05），表明造模成功。\n[0056] 与模型组相比，血脂康有极显著（P＜0.01）降低TC和显著性（P＜0.05）降低TG、LDL的作用，对HDL水平未见影响；本发明药物1组、本发明药物2组、本发明药物3组、本发明药物4组、本发明药物5组与模型组相比，有极显著降低TC、TG、LDL-C水平（P＜0.01）和极显著升高HDL-C水平的作用（P＜0.01）。\n[0057] 与血脂康组相比，本发明药物组在影响TG和HDL-C水平上有显著差异（P\n＜0.05）。\n[0058] 结论：降脂本发明药物具有治疗实验动物高血脂症的显著性作用。在提高HDL-C水平方面，比辛伐他汀和血脂康具有优势；在整体药效强度方面与血脂康比较，具有优效性。\n[0059] 二.降脂本发明药物与血脂康起效时间的比较\n[0060] 1、实验材料和方法：实验仪器、实验材料、各试验样品液配制方法同上。试验方法和给药剂量同上，给药周期为7天。\n[0061] TC、TG、LDL-C和HDL-C统计结果见表2：\n[0062] 表2TC、TG、LDL-C和HDL-C统计结果（n=10，d=7）\n[0063] \n[0064] 注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。\n[0065] 2、结果：\n[0066] 与空白组相比，高血脂症模型组的CHO、TG、LDL水平有极显著的升高（P＜0.01）和HDL水平有极显著升高（P＜0.01），表明造模成功。\n[0067] 与模型组相比，血脂康对各项指标没有显著性影响，显示出血脂康有降低TC、TG和LDL的趋势；降脂本发明药物对TG水平有显著性降低的作用（P＜0.05），并对TC、TG和LDL有降低的趋势。\n[0068] 结论：综合各项指标，本发明降脂药物灌胃7天，有显著性的降脂作用，起效时间与血脂康相比具有显著效果。\n[0069] 三.本发明降脂药物与辛伐他汀在保肝作用方面的作用比较\n[0070] 实验仪器、材料和动物同上。\n[0071] 1.实验方法\n[0072] （1）药物的配制\n[0073] 0.1%CCl4花生油溶液的配制：用量筒量取花生油50ml至干燥的小烧杯中，50微升的移液器移取CCl450微升至装有花生油的小烧杯，将其完全混匀，得0.1%的CCl4花生油溶液。\n[0074] 本发明药物样品液、含8%吐温-80的生理盐水、辛伐他汀悬浮液的配制同上\n[0075] （2）小鼠分组和给药与造模\n[0076] 昆明种小鼠80只，随机分成8组，分别为空白组、模型组、辛伐他汀组、本发明药物\n1组、本发明药物2组、本发明药物3组、本发明药物4组、本发明药物5组。每日灌胃给药，共给药6天，空白组每日灌胃生理盐水+吐温-80。给药体积和给药剂量同上。\n[0077] （3）0.1%CCl4花生油致急性肝损伤造模方法\n[0078] 肝脏保护试验小鼠胃给药6天，最后一次给药之后开始禁食。禁食2小时后，除空白之外，其余3组均按0.2ml/20g的给药体积进行腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液，继续禁\n食。小鼠造模22个小时后，采用摘眼球采血法，离心分离得到血清。均按ALT，AST试剂盒说明书测定血清当中的ALT和AST的单位活力。\n[0079] 2.数据统计与结果\n[0080] 表3小鼠血清ALT和AST的测定结果\n[0081] \n[0082] 注：与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。\n[0083] 3.结果\n[0084] 与空白组相比，模型组的小鼠血清ALT和AST均有极显著性升高（P＜0.01），表明CCl4诱导的肝损伤模型造模成功。与模型组相比，辛伐他汀组的小鼠的血清ALT和AST均\n有升高；降脂本发明药物组，对抗肝损伤有极显著性的治疗作用（P＜0.01）。\n[0085] 结论：降脂本发明药物具有治疗实验动物肝损伤的显著性作用。\n[0086] 四、本发明降脂药物急性毒性试验\n[0087] 按新药审批办法要求对降脂药物进行急性毒性试验，观察供试品一次给予小鼠\n后所产生的急性毒性反应和死亡情况。试验结果表明，降脂药物小鼠口服给药LD50为＞\n10000mg/kg。小鼠腹腔注射给药LD50为5294.46mg/kg，95％可信限为4901.59-5718.82mg/kg。\n[0088] 材料与方法\n[0089] 1.供试品与溶媒\n[0090] （1）供试品：本发明药物1组\n[0091] 配制方法：精确称取降脂药物，用0.5％CMC溶液或0.9％氯化钠注射液配成适宜浓度。\n[0092] （2）溶媒\n[0093] 口服用溶媒：0.5％CMC溶液。\n[0094] 腹腔注射用溶媒：0.9％氯化钠注射液。\n[0095] （3）实验动物\n[0096] KM小鼠，SPF级，70只，雌雄各半，体重范围18-22g。小鼠饲养于塑料盒内，雌雄分开，每笼5只。动物室温度：20-26℃；相对湿度：40-70％；照明：150-300Lux（明暗各12h）；\n噪音：60dB以下；换气次数：10-18次/小时。\n[0097] 2.试验设计\n[0098] 供试品给药方法与途径：采用口服灌胃给药，一天内分两次给药。\n[0099] 供试品给药剂量：口服预试剂量为5000、2500、1250mg/kg,上午灌胃给药一次，均未出现异常和死亡，5000mg/kg剂量组4h后重复给药一次,仍未出现异常和死亡。7d处死\n小鼠经解剖亦未见各主要脏器明显异常。根据预试验结果，降脂药物小鼠口服毒性试验采用最大耐受量试验，剂量为10000mg/kg，分上、下午两次给药，每次给药体积为0.8ml/20g。\n[0100] 3.动物分组与识别\n[0101] 动物先按体重分群，再随机分组。按编号程序进行编号，千位为动物性别号，雌性为偶数，雄性为奇数；百位为组别；十位、个位为动物编号。小鼠涂抹标记时，黄色为个位号，其中左肩为1号，左腰部为2号，左后肢为3号，头部为4号，背部为5号，尾部为6号，右肩为7号，右腰部为8号，右后肢为9号，空白为10号；紫色为十位号，棕色为百位号。\n[0102] 4.观察方法及频率\n[0103] 给药同时观察动物反应情况。给药后连续观察14天，记录动物中毒症状及死亡情况。死亡动物及试验结束时所有动物均进行大体解剖，并记录大体解剖情况。\n[0104] 5.影响研究可靠性和造成研究工作偏离实验方案的异常情况\n[0105] 本实验未发现影响研究可靠性和造成研究工作偏离实验方案的异常情况。\n[0106] 6.数据统计处理方法\n[0107] 采用Bliss法于计算机上用POMS软件计算LD50和95％可信限。\n[0108] 7.小鼠口服急性毒性试验结果\n[0109] 小鼠口服(po)给药后无明显异常，试验结束时所有动物解剖，肉眼观察未见各主要脏器明显异常变化。口服给药LD50为＞10000mg/kg。结果见表4.。\n[0110] 表4.降脂药物小鼠口服急性毒性试验结果\n[0111] \n[0112] 8、结论\n[0113] 小鼠口服给药LD50为＞10000mg/kg，说明本发明药物口服使用安全。\n具体实施方式\n[0114] 以下通过具体实施例进一步说明本发明。但实施例的具体细节仅用于解释本发\n明，不应理解为对本发明总的技术方案的限定。\n[0115] 实施例1：\n[0116] 配方：荷叶10g，黄芩10g，漏芦10g，水飞蓟油11ml。\n[0117] 制备方法：\n[0118] 称取荷叶、黄芩、漏芦药材加水煎煮3次，每次10倍量水，每次煎煮1h（第一次煎煮前药材浸泡2小时）。三次提取液均过滤合并，浓缩至81ml备用，称为A液。用移液管分别