姜黄油提取物注射水剂及其制备方法和用途

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技术领域：\n本发明涉及含有活性成分的姜黄油提取物的注射水剂。本发 明还涉及这些剂型的制备方法和用途。\n背景技术：\n近年来，在抗癌天然药物研究领域中的许多研究人员都致 力于研究紫杉醇、榄香烯各种异构体、姜黄油提取物、温郁金 提取物等的抗癌活性和这些药物的各种制剂形式。\n上述植物温郁金与另外两种可作为天然药物使用的植物莪 术和姜黄同属于姜科植物类群，产于中国的广东、四川、福建、 广西、浙江等省。\n有许多文献涉及直接采用天然药物制备防治癌症的草药制 剂，例如中国专利公开CN1216256A公开了治疗肝癌的草药制 剂，它包括含有白花蛇舌草、姜黄，虎杖和山豆根的提取物作 为主要天然药物的可注射组合物(A)和含有白花蛇舌草、重楼、 虎杖、山豆根、龙胆草、大黄、连翘、赤芍、姜黄和石菖蒲的 提取物作为主要天然药物的口服组合物(B)。\n在中国专利公开CN1302559中公开了姜黄素制剂，它是通 过制备在水可混合的有机溶剂中或水和水可混合的有机溶剂的 混合物中的姜黄素分子分散体，然后向该溶液添加保护胶体水 溶液，姜黄素的疏水相形成毫微分散相。最终的制剂形式主要 是水性分散体或干粉，在优选的情况下粒径小于10μm。\n在中国专利公开CN1247756A中公开了用于治疗恶性肿瘤的 姜郁注射液，其中姜黄与郁金的重量比为50-60∶50-40，该注 射液是一种简单的混合物。\n以上这些文献所公开的制剂在贮存稳定性和抗癌活性上都 存在着不足。\n另外，在一些专利文献中还公开了榄香烯的各种衍生物和 榄香烯金属络合物。例如，在CN11531158A中公开了一种榄香 烯金属络合物和它作为抗癌药物的使用。CN1153167A涉及榄香 烯含氮衍生物及其作为抗癌药物的用途。CN1153168A涉及榄香 烯羟基类衍生物及其作为抗癌药物的用途。\n发明内容：\n本发明的目的是提供姜黄油提取物均相注射剂即注射水 剂，它用含活性成分的姜黄油提取物、表面活性剂和含水介质 作为原料制备，该含活性成分的姜黄油提取物是从姜黄油分离 得到的并且包括作为活性成分的至少约25wt％的芳姜黄酮，该 表面活性剂是药用的非离子表面活性剂，注射水剂中芳姜黄酮 的浓度为0.02～4wt％。更优选地，该含水介质是水。\n本发明的另一个目的是提供这些注射水剂的制备方法。\n本发明的再一个目的是提供这些新剂型的制剂用于制备治 疗癌症或缺血性中风的药物注射剂的用途，这些注射水剂用于 缓解肿瘤疼痛的用途，以及这些制剂用于抑制和/或治疗肿瘤的 用途。本发明的注射水剂还有增加胆汁分泌的作用。\n附图说明：\n图1是在姜黄油提取物的制备之后立即测定的指纹谱。\n图2是在姜黄油提取物制备后放置3个月之后测定的指纹 谱。\n本发明的详细说明：\n现有技术领域中已经知道榄香烯某些异构体、姜黄油提取 物、温郁金提取物具备抑制肿瘤的作用，一些文献公开了这些 天然药物的各种制剂形式(或剂型)，例如脂质体、乳剂、脂肪 乳等制剂。但是，对于特定的倍半萜酮类的抑制肿瘤的作用， 人们了解得不多，文献中有关这方面的报道很少。\n本发明人对姜黄油提取物乳剂剂型的抑癌作用进行了多年 的研究，已经发现姜黄油中的倍半萜烯化合物(C15H24)姜烯、 姜黄烯、芳姜黄烯象榄香烯一样有相近的抑癌活性。我们又发 现姜黄油中属于倍半萜酮类的化合物姜黄酮、芳姜黄酮等制备 成注射乳经药理试验，证实其抑癌活性比榄香烯乳提高15％～ 25％，十分有开发价值。我们已对姜黄油提取物中姜黄酮、芳 姜黄酮，含氧抑癌活性成分开发出澄明注射液，助溶剂分别采 用吐温-80(Polyasorbate-80(聚山梨酯-80)、tween-80)、聚 氧乙烯甘油三篦麻油酸酯35(cremophorEL篦麻油聚氧乙烯 醚)、氢化蓖麻油聚氧乙烯醚和丙二醇。制备出姜黄油提取物(倍 半萜酮类)吐温-80注射液，姜黄油提取物(吐温-80)葡萄 糖注射液和姜黄油提取物(倍半萜酮类)蓖麻油聚氧乙烯醚(聚 氧乙烯甘油三篦麻油酸酯cremophorEL)、氢化蓖麻油聚氧乙烯 醚(cremophorRH40，cremophorRH60)丙二醇注射液、姜黄油 提取物(cremophor)葡萄糖输液。这六种注射液的物理特征均 是呈澄明的均相注射液。\n本发明所使用的姜黄油提取物是从姜黄获取的精油(或称作 挥发油或姜黄油)中提取的含有芳姜黄酮、姜黄酮和芳姜黄酮衍 生物的提取物，其中芳姜黄酮的含量是在大约25wt％以上。\n本发明人利用长(25米或25米以上)的高效色谱柱，采用色 质联用仪成功地拆解了姜黄油的特定几种的倍半萜酮类，发现 它们的抑制肿瘤作用比倍半萜烯类更好，并从该姜黄油提取物 制取了注射水剂。该注射水剂在广义上应该包括较小剂量的注 射剂和较大剂量的输液。作为较小剂量的注射剂，含有较高浓 度即高达4wt％的活性成分(指所述酮类)，而作为较大剂量的输 液，含有低至0.02wt％的活性成分(指所述酮类)。在这里，注 射水剂，注射剂和注射液可以互换使用。\n本发明提供姜黄油提取物注射水剂，它用含活性成分的姜 黄油提取物、表面活性剂和含水介质作为原料制备，该含活性 成分的姜黄油提取物包括作为活性成分的至少约25wt％的芳姜 黄酮。在正常情况下，如果在色谱分离中不进行截分，该含活 性成分的姜黄油提取物还包括作为活性成分的至少约20wt％的 姜黄酮和0-20wt％的芳姜黄酮衍生物。其中芳姜黄酮衍生物含 有以下通式I的异构体：\n\n本发明还提供姜黄油提取物注射水剂的制备方法，它包括 混合含活性成分的姜黄油提取物、表面活性剂和含水介质，该 含活性成分的姜黄油提取物包括作为活性成分的至少约25wt％ 的芳姜黄酮。\n对于这些姜黄油提取物，要求它包括作为活性成分的约至 少25wt％的芳姜黄酮，其它是姜黄酮和姜黄酮衍生物，还有倍 半萜烯类和少量即低于5wt％的其它天然成分(包括单萜烯、二 萜烯、姜黄素等天然成分)。理想地，该姜黄油提取物包括作为 活性成分的至少30wt％、更优选至少45wt％、甚至更优选60wt％、 再更优选至少70wt％、进一步更优选至少80wt％、特别优选至少 85wt％、最优选至少95wt％的芳姜黄酮。其它天然成分的含量是 低于4wt％，优选低于3.5wt％，更优选低于3wt％，再更优选低 于2.5wt％，甚至更优选低于2wt％和特别优选低于1.5wt％，更 特别优选低于0.5wt％和最优选低于0.01wt％。由于采用了较长 的高效色谱柱，使得能够以高纯度分别地分离出芳姜黄酮，姜 黄酮，和芳姜黄酮衍生物，三者作为三个主峰依次在附图中给 出的指纹谱图中按照从左到右的顺序出现，这从附图中可以看 出，这三种物质的三个峰都可以分开，分别截取这三种成分是 容易实现的。当然，对所截分的各成分进一步进行色谱分离， 得到更高的纯度(浓度)也是可能的。由于姜黄酮，芳姜黄酮衍 生物也具有不错的功效，所以，将芳姜黄酮、姜黄酮和芳姜黄 酮衍生物三者进一步分离有时候显得没有必要，即不必加以拆 分。\n另外，用三氯化铁(FeCl3)进行显色分析，表明芳姜黄酮衍 生物存在酚羟基或烯醇式结构。\n需要指出的是，在本发明中作为本发明的起始原料来制备 注射水剂的姜黄油提取物可以使用商购的产品，如含所述芳姜 黄酮，姜黄酮和/或芳姜黄酮衍生物的姜黄油提取物商购产品， 以及按照现有技术中描述的方法或在这里所述的方法从姜黄植 物(优选它的根茎)的挥发油(或精油或姜黄油)中提取的姜黄油 提取物产品。如果在本申请中需要自己制备这些提取物，用于 制备这些提取物的各种挥发油(或精油)可以使用商购产品，也 可以使用通过普通的水蒸汽蒸馏法或CO2超临界提取法从植物 (例如植物的根茎)中获得的挥发油。每一种提取物能够用作本 发明的起始原料，而且温郁金的挥发油可以用作获得提取物的 原料。还需要指出的是，在本申请中活性成分特定地包括芳姜 黄酮、姜黄酮和芳姜黄酮衍生物中的一种、两种或三种酮类， 但芳姜黄酮是必须有的。\n原则上，从植物中提取的含有≥25wt％，优选≥30wt％，更 优选≥45wt％，再更优选≥60wt％、甚至更优选≥65wt％、最优选 ≥70wt％的活性成分的所有提取物都可作为原料用于制备本发明 的注射水剂。在一些情况下，姜黄油提取物含有≥60wt％，更理 想≥65wt％，优选≥70wt％，特别优选≥75wt％，非常特别优选≥ 80wt％，进一步特别优选≥85wt％，最优选≥95wt％的活性成分， 即选自芳姜黄酮，姜黄酮和芳姜黄酮衍生物中的一种、两种或 三种酮类。姜黄油提取物中的其它成分是倍半萜烯类和少量即 低于5wt％的其它天然成分(包括单萜烯、二萜烯、姜黄素等)。 理想地，其它天然成分的含量是低于4wt％，优选低于3.5wt％， 更优选低于3wt％，再更优选低于2.5wt％，甚至更优选低于2wt％ 和特别优选低于1.5wt％，更特别优选低于0.5wt％和最优选低于 0.01wt％。在非常理想的情况下，其它天然成分含量应该低于 0.0001wt％。各种成分的含量是用25米左右长度毛细管柱气相 色谱-质谱联用仪(即大约25米长毛细管气相色谱-质谱联用 仪：Bio-Rad FTS-65A，HP5890II，色谱柱：BP-5)检测提取物 所获得的。作为注射水剂制备用的原料，含有70wt％、优选 75wt％、更优选80wt％以上的活性成分的姜黄油提取物是理想 的，含有85wt％以上活性成分的提取物是优选的，含有90wt％ 以上活性成分的提取物是更优选的，含有95wt％以上活性成分 的提取物是特别优选的。\n用于提取芳姜黄酮、姜黄酮、芳姜黄酮衍生物的姜黄属植 物包括中国南方各省出产的姜黄，尤其是广东产的姜黄，主要 从根茎中获取姜黄油，再从姜黄油制备姜黄油提取物。有关这 些植物和所含的成分倍半萜酮类的描述参见《药学学报(ACTA PHARMACEUTICA SINICA)》，“我国姜黄属植物的研究”， Vol.XVII，No.6(第17卷第6期)，1982年6月。在该文章中 详细介绍了姜黄属五种植物根茎挥发油的成分和含量，该文献 以全部内容引入本文供参考。\n术语的解释：\n在本申请中，姜黄油提取物指从姜黄植物中，尤其从姜黄 植物的根茎中获取的挥发油(或精油或姜黄油)经真空填料式精 馏装置精馏出的组分或经分子蒸馏仪精制出的组分。经GC-MS(气 相色谱-质谱联用仪)检测含量。\n在本申请中纯度是指按重量计的百分纯度，除非另有说明。\n本申请中所使用的原料即姜黄油提取物没有特别的限制， 只要该提取物是从天然植物中提取并且包括≥25wt％的芳姜黄 酮，其它是姜黄酮和芳姜黄酮衍生物，少量即低于10wt％的倍 半萜烯类和少量即低于5wt％的其它天然成分(包括单萜烯、二 萜烯、姜黄素等)，而芳姜黄酮、姜黄酮和芳姜黄酮衍生物在这 里被认为是活性成分，则该提取物就可在本发明中使用，更理 想的是，该纯度≥30wt％，更理想≥45wt％，优选≥60wt％，特别 优选≥65wt％，非常特别优选≥70wt％。当然，更高活性成分纯 度的提取物是理想的，因为纯度高，在制备注射水剂时提取物 用量相应减少。所以，在有些时候能够采用活性成分(芳姜黄酮、 姜黄酮和/或芳姜黄酮衍生物)纯度≥70wt％，更理想≥75wt％， 优选≥80wt％，特别优选≥85wt％，非常特别优选≥88wt％，更特 别优选≥95wt％的姜黄油提取物。所述活性成分指，选自芳姜黄 酮，姜黄酮和芳姜黄酮衍生物中的一种、两种或三种酮类，但 芳姜黄酮是必须有的。其中芳姜黄酮、姜黄酮还应该包括各自 全部的异构体，如果有的话。此外，姜黄油提取物可含有90wt％ 以上、或95wt％以上的芳姜黄酮，此时可以认为它是单一组分。\n除非另有说明，否则在本发明中使用的其它成分如乙醇， 丙二醇或丙三醇，非离子表面活性剂等一般要求符合国家药用 标准，这些主要出于乳化性能和健康方面的考虑。\n除非另有说明，否则在本申请中色谱分析所使用的气相色 谱-质谱联用仪是：Bio-Rad FTS-65A，HP5890II，毛细管色 谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)是：DB1(固定液是聚二甲基硅氧 烷)，BP-5或DB5(固定液是聚(5％苯基)二甲基硅氧烷。\n本发明的注射水剂是澄明或半澄明的，该半澄明状态被认 为是丝光状、均质的，绝大部分的可见光能够透过。该注射水 剂能够以静脉注射、局部给药方式用于治疗目的。本发明的注 射水剂是一种均相注射剂。\n本发明的优选实施方案\n本发明的优选实施方案高度概括为如下：\n1.姜黄油提取物注射水剂，它用含活性成分的姜黄油提取 物、表面活性剂和含水介质作为原料制备，该含活性成分的姜 黄油提取物是从姜黄油分离得到的并且包括作为活性成分的至 少约25wt％的芳姜黄酮，该表面活性剂是药用的非离子表面活 性剂，注射水剂中芳姜黄酮的浓度为0.02～4wt％。\n2.根据1项的注射水剂，其中该含活性成分的姜黄油提取 物包括作为活性成分的至少约30wt％的芳姜黄酮。\n3.根据1项的注射水剂，其中该含活性成分的姜黄油提取 物包括作为活性成分的至少约45wt％的芳姜黄酮，或优选至少 60wt％，更优选至少约70wt％，再更优选至少80wt％，甚至更优 选至少85wt％，最优选至少约95wt％-99wt％的芳姜黄酮。当姜 黄油提取物包括至少约95wt％的芳姜黄酮时，可以认为该制剂 是西药制剂。\n4.根据1或3项的注射水剂，其中该含活性成分的姜黄油 提取物包括作为活性成分的至少约95wt％的芳姜黄酮。\n5.根据1-4中任一项的注射水剂，其中注射水剂中所述 芳姜黄酮的浓度为0.03～4wt％。\n6.根据1-4中任一项的注射水剂，其中注射水剂中所述 芳姜黄酮的浓度为0.03～3wt％。\n7.根据1项的注射水剂，其中该含活性成分的姜黄油提取 物还进一步包括作为活性成分的至少约20wt％的姜黄酮和至少 约18wt％的芳姜黄酮衍生物，而且注射水剂中芳姜黄酮、姜黄 酮和芳姜黄酮衍生物三者的总浓度为0.03～4wt％，优选0.04～ 4wt％，更优选0.04-3.5wt％，再更优选0.04-3wt％。此时它是一 种中药制剂。\n8.根据1项的注射水剂，其中含水介质是水。\n9.根据1项的注射水剂，它是澄明或半澄明的。\n10.根据1项的注射水剂，其中非离子表面活性剂的含量 是约10％-40wt％。\n11.根据1项的注射水剂，其中表面活性剂是聚山梨酯型(例 如吐温-80)和/或聚氧乙烯型的非离子表面活性剂。\n12.根据1或11项的注射水剂，其中表面活性剂是蓖麻油 聚氧乙烯醚和/或氢化蓖麻油聚氧乙烯醚，例如Cremophor EL 和Cremphor RH。\n13.根据1或11项的注射水剂，它还含有5-28wt％的选自 乙醇，1，2-丙二醇，1，3-丙二醇和丙三醇中的一种或多种醇类。\n14.姜黄油提取物注射水剂的制备方法，它包括混合作为 原料的含活性成分的姜黄油提取物、表面活性剂和含水介质， 该含活性成分的姜黄油提取物是从姜黄油分离得到的并且包括 作为活性成分的至少约25wt％的芳姜黄酮，该表面活性剂是药 用的非离子表面活性剂，非离子表面活性剂的用量以最终注射 水剂重量为基础计是约10％-40wt％，该含活性成分的姜黄油提 取物是以使得该注射水剂中芳姜黄酮的浓度为0.02～4wt％，优 选为0.03～4wt％，更优选为0.03～3wt％的那一用量使用。\n15.根据14项的制备方法，其中含水介质是水。\n16.根据14项的制备方法，其中该含活性成分的姜黄油提 取物包括作为活性成分的至少约45wt％的芳姜黄酮，或优选至 少60wt％，更优选至少约70wt％，再更优选至少80wt％，甚至更 优选至少85wt％，最优选至少约95wt％的芳姜黄酮。\n17.根据14项的制备方法，其中该含活性成分的姜黄油提 取物还包括作为活性成分的至少约20wt％的姜黄酮和至少约 18wt％的芳姜黄酮衍生物，使得该注射水剂中芳姜黄酮、姜黄酮 和芳姜黄酮衍生物三者的总浓度为0.04～4wt％。\n18.根据14项的制备方法，还混合了作为原料的选自乙醇， 1，2-丙二醇，1，3-丙二醇和丙三醇中的一种或多种醇类，其用 量使得注射水剂含有5-28wt％的该一种或多种醇类。\n19.以上1-13项中任何一项的注射水剂用于抑制和/或治 疗肿瘤，用于抑制癌细胞转移，用于缓解肿瘤疼痛，用于预防 或治疗缺血性中风，或用于增加胆汁分泌的用途。\n20.以上1-13项中任何一项的注射水剂用于制备抑制或 治疗癌症的药物或用于制备增加胆汁分泌的药物的用途。\n21.由以上14-18项中任何一项的方法制备的注射水剂。\n当含水介质是水时，该注射水剂含有5-28wt％的选自乙醇， 1，2-丙二醇，1，3-丙二醇和丙三醇中的一种或多种醇类(低级醇 类)，该醇是在注射水剂的制备中作为原料加入的。当含水介质 是例如含有10-40wt％的选自乙醇，1，2-丙二醇，1，3-丙二醇和 丙三醇中的一种或多种醇类的水溶液时，则不再添加作为原料 的该醇类。当然，使用某些表面活性剂例如氢化蓖麻油聚氧乙 烯醚(Cremophor RH40或Cremophor RH60)时，可以不使用该低 级醇类或使用较少量的该低级醇类，因为这些表面活性剂对活 性成分的乳化能力很强。\n下面的制备例和实施例用于举例说明本发明，但不应认为 限制本发明的范围。本发明的保护范围由权利要求来定义。\n按普通的水蒸汽蒸馏或CO2超临界方法从姜黄的根茎获取 挥发油。下面的制备例采用这些挥发油。\n制备例1：\n姜黄油提取物(倍半萜酮类)的制备方法\n以1000ml姜黄挥发油(芳姜黄酮、姜黄酮和芳姜黄酮衍生 物三者的含量≥15wt％)为原料，经广州汉维机电公司MD-S80 型分子蒸馏仪精制，其工艺条件：蒸馏温度35～45℃，蒸馏压 力70～90Pa，刮膜速度300-320转/分，冷凝面温度20～25℃， 系统保温20～25℃，物料流速15～30毫升/小时，得到馏出物， 仅收集馏余物，积累到足够量(约450ml)，继续进行分子蒸馏。 蒸馏温度45～60℃，蒸馏压力30～70Pa，刮膜速度300-320 转/分，冷凝面温度20～25℃，系统保温20～25℃，该馏分流 速15～30毫升/小时，分别收集150ml馏出物与约300ml馏余 物，将得到的二次馏余物积累到足够量(750ml)，继续进行分子 蒸馏。蒸馏温度30～70℃，蒸馏压力10～50Pa，刮膜速度300 -320转/分，冷凝面温度20～25℃，系统保温20～25℃，该 馏分流速15～30毫升/小时，收集馏出物(320ml)，放掉馏余物， 将溜出物再添加到分子蒸馏仪中继续重复蒸馏一直到用气相色 谱仪(即大约25米长毛细管气相色谱-质谱联用仪：Bio-Rad FTS-65A，HP5890II，色谱柱：BP-5)检测时总活性成分含量≥ 75wt％为止，获得150ml姜黄油提取物。该提取物经上述气相 色谱仪检测，含有75.5wt％的活性成分，即芳姜黄酮，姜黄酮 和芳姜黄酮衍生物。用气相色谱法制定供检测用指纹图谱。DB1， BP5或DB5毛细管色谱柱检测是含羰基为主的馏份，固定液为 聚(5％苯基)二甲基硅氧烷时毛细管柱色谱有有三个主要峰，从 左到右分别对应于芳姜黄酮，姜黄酮和芳姜黄酮衍生物。该提 取物用于下面的实施例中。\n制备例2：使用与制备例中相同的原料即姜黄挥发油，按照 制备例1中的相同方法，只是仅仅针对芳姜黄酮的峰进行截分， 得到了含有约95.5wt％芳姜黄酮的姜黄油提取物。为了制备西 药注射剂，可以使用制备例2的姜黄油提取物，注射剂的制备 方法与下列的实施例中完全相同。\n在附图1中给出了制备例1的姜黄油提取物的指纹谱。在 附图2中给出了制备例1的姜黄油提取物在有空气存在下存放 3个月后的指纹谱。其中毛细管色谱固定液名称：聚二甲基硅 氧烷或聚(5％苯基)二甲基硅氧烷，商品柱名称DB1，DB-5或BP5 等。两指纹谱中的峰高度的变化反映了姜黄酮部分地转化成更 稳定的芳姜黄酮。而且，调节PH值至酸性或碱性，会加速这一 转化。\n在本申请中色谱分析所使用的气相色谱-质谱联用仪是： Bio-Rad FTS-65A，HP5890II，毛细管色谱柱(30×0.25mm× 0.25μm)是：DB1(固定液是聚二甲基硅氧烷)，BP-5或DB5(固 定液是聚(5％苯基)二甲基硅氧烷。\nGC/MC参数：\n(GC)\nCol.：DB-1MS(30m×0.25mm×0.25μm)；Col.Temp.：100 ℃(2min)--8℃/min--200℃(2min)\nInj.Temp.：230℃；Inj.Mode：split(10∶1)；Inj.Volume： 10μl；Carrier gas：He；Column flow：1ml/min\n(EIMS)70eV\nMass Range：33-500        Scan Rate：1000amu/s\nInterface Temp.：230℃    Solvent：CHCl3\nSolvent Cut Time：4.0min  Start time：4.2min\nDetector：1.00Kv\n对其指纹谱构成中的色谱峰经气质联用解析，发现有芳姜 黄酮：\n\n姜黄酮：\n\n和含有烯醇或酚羟基结构的芳姜黄酮衍生物。\n值得指出的是，从附图中可以看出，三个峰已明显分开， 基本上可以分别截取每一种主要成分，或截取其中的两种主要 成分。\n由于在本发明中发现它们三者都具有很好的抑制肿瘤的作 用，故没有将三者拆分，操作显得更简单、容易一些。\n实施例1.姜黄油提取物(吐温-80)注射液的制备方法\n称取姜黄油提取物200g溶于2000g吐温-80(聚山梨酯-80) 中，搅拌至均匀。然后加入30℃～60℃制药用蒸馏水至 20,000ml，边加边搅拌，直到姜黄油提取物、吐温-80混合物 完全溶于蒸馏水中。用微孔滤膜过滤，用灌注器分装入20ml充 氮的安瓶中，在112℃～115℃条件下蒸汽灭菌30分钟，冷却 后经振摇使之澄明。然而，任选地，经热原检验、灯检，姜黄 油提取物含量(每瓶约0.2g姜黄油提取物，按姜黄提取物计， 下同)检验均合格后，入库。\n实施例2.姜黄油提取物(吐温-80)葡萄糖输液的制备方 法\n取200g姜黄油提取物与2000g吐温80(聚山梨酯-80)混 合，使之混匀，然后将之加入30℃～60℃供制药用蒸馏水中， 边加边搅拌使最终体积为125,000ml。\n同时配制10％的葡萄糖溶液125,000ml，将两溶液搅拌混 合，经微孔滤膜过滤，装入经充氮的250ml输液瓶中，经110 ℃～115℃灭菌40分钟，灭菌后振摇，放置到澄明。然后，任 选地，经热原，含量(每瓶0.2g姜黄油提取物，葡萄糖12.5g)， 澄明度，颗粒物检测合格，入库。\n实施例3.姜黄油提取物(吐温-80)葡萄糖输液的制备方 法\n取200g姜黄油提取物与2000g吐温-80(聚山梨酯-80)混 合，使之混匀，然后将之加入30℃～60℃供制药用蒸馏水中， 边加边搅拌使最终体积为250,000ml。\n同时配制10％的葡萄糖溶液250,000ml，将两溶液搅拌混 合，经微孔滤膜过滤，装入经充氮的250ml输液瓶中，经110 ℃～115℃灭菌40分钟，灭菌后振摇，放置到澄明，经热原， 含量(每瓶0.1g姜黄油提取物，葡萄糖12.5g)，澄明度，颗 粒物检测合格，入库。\n实施例4.姜黄油提取物(cremophor EL丙二醇)注射液 的制备方法。\n取200g姜黄油提取物与1800g加热至50-60℃的cremophor EL混合，充分搅拌，然后加入1600g丙二醇(比重为1)搅拌至 完全澄明，再加入预热至50～60℃注射用水至10,000ml，用高 速搅拌机搅拌至澄明，微孔滤膜过滤。然而，任选地，灌封于 充氮10ml安瓶中，100℃旋转蒸汽灭菌30分钟，经热原，含量 (大约2wt％姜黄油提取物)，澄明度检验合格，入库。\n实施例5.姜黄油提取物(cremophor EL、cremophor RH40 丙二醇)注射剂的制备方法：\n取200g姜黄油提取物与加热至60℃的cremophor EL(1600g) 和cremophor RH40(1600g)混合，充分搅拌，添加600ml丙二 醇(比重1)，搅拌至完全澄明。再加入预热至50～60℃注射用 水至10,000ml，用高速搅拌机搅拌至半澄明，微孔滤膜过滤。 然后，灌封于充氮10ml安瓶中，100℃旋转蒸汽灭菌30分钟， 经热原，含量(约2wt％姜黄油提取物)，澄明度检验合格，入库。\n实施例6.姜黄油提取物(cremophor RH40，cremophor RH60)注射剂的制备方法：\n取200g姜黄油提取物(倍半萜酮类化合物)与都已加热至 60℃的1700g cremophor RH40和1700g cremophor RH60中混 合，充分搅拌至半澄明。再加入预热至50～60℃注射用水至 10,000ml，用高速搅拌机搅拌至澄明或半澄明，微孔滤膜过滤。 灌封于充氮10ml安瓶中，100℃旋转蒸汽灭菌30分钟，经热原， 含量，澄明度检验合格，入库。\n实施例7.姜黄油提取物(cremophor EL)葡萄糖输液的制 备方法：\n取200g姜黄油提取物(倍半萜酮类化合物)与都已加热至 60℃的1800g cremophor EL混合，充分搅拌，然后加入1600g 丙二醇，充分搅拌至半澄明。再加入预热至50～60℃注射用水 至50,000ml，用高速搅拌机搅拌至澄明或半澄明，与含10％葡 萄糖的50000ml葡萄糖水溶液混合，微孔滤膜过滤。灌封于充 氮250ml输液瓶中，112-115℃旋转蒸汽灭菌40分钟，经热原， 含量(0.2％姜黄油提取物，12.5g葡萄糖，即5％)，澄明度检验 合格，入库。\n实施例8.姜黄油提取物(cremophor EL)-乙醇注射液的 制备方法：\n按照实施例4，只是用等量的乙醇代替丙二醇。可以制备姜 黄油提取物(cremophorEL)-乙醇注射液。\n为了避免个别过敏体质患者使用该药时出现过敏反应，使 用本药前，应做皮试或适量激素以减轻过敏反应。\n药效试验：-姜黄油提取物注射液抗肿瘤疗效试验\n姜黄油提取物(吐温-80)注射液和姜黄油提取物葡萄糖输 液的抑癌效果：\n姜黄油提取物注射液以静脉途径以40、20及10mg/kg(高、 中、低剂量)给药，每天一次，连续10天的给药方案，体内对 人体肿瘤异种移植模型抗肿瘤疗效试验：对人体脑神经胶质瘤 SHG-44(腋皮下接种)的疗效，结果显示，高剂量组的抑制率 为41.30-45.60％，中剂量组的抑制率为35.87-39.78％，低剂 量组的抑制率也可达到28.26～33.33％。参照比较组榄香烯乳 40mg/kg以相同方案治疗，其抑制率为36.41～41.33％。体内 对人体肺腺癌LAX(静脉接种)的疗效，高剂量组的抑制率为 40.00～44.94％，中剂量组为29.92～32.40％，低剂量组 22.63～24.75％。参照比较组的榄香烯乳40mg/kg以相同方案 治疗，其抑制率比试验组低10％。\n试验表明姜黄油提取物注射液体内对人体肿瘤异种移植模 型SHG-44、LAX均有一定的抗肿瘤疗效，对前者更敏感些，且 具有一定的量效关系，为临床提供了实验数据。\n表1：姜黄油提取物(吐温-80)注射液(实施例1的注射剂 产品)对SHG-44人体脑神经胶质瘤(皮下接种)的疗效试验之   样品   剂量   mg/kg   给药方案   动物数   始/终(只)   抑制率％   姜黄油提取物注射液   40   iv×10   6/6   45.42   姜黄油提取物注射液   20   iv×10   6/6   39.23   姜黄油提取物注射液   10   iv×10   6/6   32.12   对照组   相应溶剂   iv×10   12/12\n表2：姜黄油提取物(cremophor EL丙二醇)注射液(实施 例4的产品)对SHG-44人体脑神经胶质瘤(皮下接种)的疗效 试验之二：   样品   剂量   mg/kg   给药方案   动物数   始/终(只)   抑制率％   姜黄油提取物注射液   40   iv×10   6/6   45.58   姜黄油提取物注射液   20   iv×10   6/6   38.46   姜黄油提取物注射液   10   iv×10   6/6   32.10   对照组   相应溶剂   iv×10   12/12\n表3：姜黄油提取物(cremophor EL丙二醇)注射液(实施 例4的产品)对LAX人体肺腺癌(静脉接种)的疗效试验之一：\n  样品   剂量   mg/kg   给药方   案   动物数   始/终(只)   抑制率％   姜黄油提取物注射液   40   iv×10   6/6   41.36   姜黄油提取物注射液   20   iv×10   6/6   32.46   姜黄油提取物注射液   10   iv×10   6/6   24.64   对照组   相应溶剂   iv×10   12/12\n表4：姜黄油提取物(吐温-80)葡萄糖注射液(实施例2的 产品)对小鼠黑色素瘤B16实验肺转移疗效试验结果：   样品   剂量   mg/kg   给药方案   动物数   始/终(只)   抑制率％   姜黄油提取物注射液   40   iv×10   10/10   57.22   姜黄油提取物注射液   20   iv×10   10/10   44.84   姜黄油提取物注射液   10   iv×10   10/10   40.32\n表5：姜黄提取物(Cremophor EL丙二醇)注射液(实施例4 的产品)对试验大鼠胆汁分泌的影响(静脉给药)：   样品   剂量   mg/kg   给药方案   动物数   始/终(只)   分泌增   加率％   姜黄油提取物注射液   35   iv×10   6/6   30.46   姜黄油提取物注射液   25   iv×10   6/6   25.33   姜黄油提取物注射液   15   iv×10   6/6   5.54   对照组(去氢胆酸钠)   iv×10   12/12   30.81\n表6：姜黄提取物(Cremophor EL丙二醇)注射液(实施例4 的产品)对试验大鼠胆汁分泌的影响(十二指肠给药)：\n  样品   剂量   mg/kg   给药方   案   动物数   始/终(只)   分泌增加率％   姜黄油提取物注射液   35   10天   6/6   40.68   姜黄油提取物注射液   25   10天   6/6   31.16   姜黄油提取物注射液   15   10天   6/6   17.23   对照组(去氢胆酸钠)   10天   12/12   33.36\n注释：\n在本发明中，注射剂对B16小鼠黑色素瘤实验肺转移等肿 瘤模型的抗肿瘤疗效采用上海医药工业研究院药理室(本申请的 大部分的实验结果委托他们完成)的抗肿瘤实验方法来评价，该 方法是目前在中国国内抗肿瘤药物领域中公认的方法(国家药品 监督管理局规定的方法)，方法具体如下进行：\n无菌条件下取体外培养对数生长期的B16小鼠黑色素瘤培 养细胞，制备成2.5×105/ml细胞悬液，从C57BL/6小鼠尾静 脉接种0.2ml/每鼠(5×104个细胞)，24小时后按实验方案给药； 试验三周后处死各组动物，剖取各组动物肺脏，计测每鼠肺脏 所转移的集落数，以各组肿瘤平均集落数，按下列公式计算肿 瘤抑制率：\n肿瘤抑制率％＝[(对照组平均集落数-给药组平均集落数)/ 对照组平均集落数]×100\n瘤源：小鼠B16黑色素瘤细胞均由上海医药工业研究院药 理室传代维持。\n实验动物：C57BL/6及昆明种小鼠由上海中科院实验动物中 心提供，合格证号：沪动合格证第107号。体重：18-20克。 雌雄均可，每批实验使用同一性别。每组10只。\n给药方案：静脉给药，每天1次，连续10天。对照组给予 空白乳剂，它是对应于各注射剂的不含活性成分的注射剂。\n所以，注射剂能够用于抑制和/或治疗肿瘤。另外，经过试 验，该制剂还能够用于抑制癌细胞转移，用于缓解肿瘤疼痛， 用于预防或治疗缺血性中风，以及促进胆汁分泌。