具有祛除面部红血丝功效的护肤组合物、制剂及其制备方法

1.一种具有祛除面部红血丝功效的护肤组合物，其特征在于，所述组合物中各组分用量为：
A相：水溶性神经酰胺 0.1～1wt％
VA棕榈酸酯 0.5～1.5wt％
硬脂酸胆甾醇酯 0.1～1wt％
B相：中药提取物 1～5wt％
余量为基质；
所述中药提取物按照下述方法制成，具体步骤为：
(1)按照大黄35～55份、槐米20～25份、黄芪10～20份、母菊5～25份的配比称取各原料药；
(2)将大黄、槐米、黄芪和母菊分别粉碎至60～80目，然后按照所述的重量份配比混合均匀，得中药组合物；
(3)将上述中药组合物加丙二醇进行提取，所述中药组合物与丙二醇的质量体积比g/ml为1∶10～15；
(4)将步骤(3)制备的提取物液100～200目过滤，4000～5000r/min离心后，真空抽滤，最终制备得到中药提取物。
2.一种具有祛除面部红血丝功效的护肤组合物，其特征在于，所述组合物中各组分用量为：
A相：水溶性神经酰胺 0.1～1wt％
VA棕榈酸酯 0.5～1.5wt％
硬脂酸胆甾醇酯 0.1～1wt％
B相：中药提取物 1～5wt％
尿囊素 0.01～1.5wt％
芦荟粉 0.1～10wt％
植物促渗剂 0.2～1wt％
余量为基质；
所述中药提取物按照下述方法制成，具体步骤为：
(1)按照大黄35～55份、槐米20～25份、黄芪10～20份、母菊5～25份的配比称取各原料药；
(2)将大黄、槐米、黄芪和母菊分别粉碎至60～80目，然后按照所述的重量份配比混合均匀，得中药组合物；
(3)将上述中药组合物加丙二醇进行提取，所述中药组合物与丙二醇的质量体积比g/ml为1∶10～15；
(4)将步骤(3)制备的提取物液100～200目过滤，4000～5000r/min离心后，真空抽滤，最终制备得到中药提取物。
3.根据权利要求1或2所述的护肤组合物，其特征在于，所述步骤(3)中提取为超声提取，所述超声提取的温度为60～80℃，时间为45～60分钟，超声频率为30～50KHz。
4.根据权利要求3所述的护肤组合物，其特征在于，所述步骤(4)中真空抽滤是500～
700目过滤，真空度是0.05～0.1MPa。

具有祛除面部红血丝功效的护肤组合物、制剂及其制备方\n法\n技术领域\n[0001] 本发明涉及一种护肤组合物，具体地说是一种具有祛除面部红血丝功效的护肤组合物，以及由该组合物制备的外用制剂及其制备方法。\n背景技术\n[0002] 红血丝是面部毛细血管扩张性能差、角质层受损或一部分毛细血管位置表浅引起的面部现象，一丝丝纵横交错，如蜘蛛网般，分散性分布，严重者会连成片状，变成红脸，这种皮肤薄而敏感，过冷、过热、情绪激动、温度突然变化时脸色更红。面部红血丝患者面部看上去比一般正常肤色红，有的仅仅是两侧颧部发红，边界呈圆形。这种皮肤薄而敏感，严重者还会形成沉积性色斑。\n[0003] 经过调查发现目前祛除面部红血丝化妆品多以舒缓皮肤为主，一些化妆品以保湿功效来替代祛除面部红血丝作用，甚至有些化妆品在祛除红血丝的同时还有刺激皮肤的副作用，使得本来脆弱的红血丝肌肤更加雪上加霜。只有法国几家药用化妆品公司推出专门针对红血丝的化妆品，其功能性原料以修复毛细血管脆性为主，没有从机理源头进行研究，针对性也不强。\n发明内容\n[0004] 本发明目的是提供一种具有祛除面部红血丝功效的护肤品组合物。\n[0005] 本发明另一目的在于提出一种利用上述组合物制备的护肤制剂。\n[0006] 本发明再一目的在于提出上述护肤制剂的制备方法。\n[0007] 为实现上述目的本发明发明思路为：\n[0008] 本发明以中药提取物为主要原料，利用中医“君臣佐使”的原则使各种组分合理组合、配合共用，真正能够增加皮肤屏障、降低血管通透性、增强胶原蛋白和弹性蛋白的活性原则，长期使用具有很好的祛除红血丝效果。\n[0009] 本发明所述的中药提取物是从大黄、槐米、黄芪、母菊几味中药中提取分离得到，从而有效起到祛除面部红血丝的功效，且对皮肤无刺激。四味药物功效简介如下：\n[0010] 大黄：归胃经；大肠经；肝经；脾经。功效：攻积滞；清湿热；泻火；凉血；祛瘀；解毒。主治：实热便秘；热结胸痞；湿热泻痢；黄疸；淋病；水肿腹满；小便不利；目赤；咽喉肿痛；口舌生疮；胃热呕吐；吐血；咯血；衄血；便血；尿血；蓄血；经闭；产后瘀滞腹痛；症瘕积聚；跌打损伤；热毒痈疡；丹毒；烫伤。\n[0011] 槐米：别名白槐、槐花、槐花米(中医将槐的花与蕾做相同使用)。干槐花蕾中含芸香甙——芦丁、三萜皂甙、白桦脂醇、槐花二醇、葡萄糖、葡萄糖酸醛。槐花蕾中还含有槐花米甲素槐花米乙素和槐花米丙素。甲素是和芸香苷。不同的黄酮类化合物，乙素和丙素为甾醇类化合物。具有凉血止血，清肝泻火的功效。用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕等。\n[0012] 黄芪：含有蔗糖、葡萄糖醛酸、黄芪多糖A、B、C、D，黏液质，多种氨基酸、苦味素、黄芪皂苷、胆碱、叶酸、黄烷化合物及含有硒、硅、锌、钴、铜、钼等多种微量元素。性味：甘，微温。归肺、脾、肝、肾经。黄芪有益气固表、敛汗固脱、托疮生肌、利水消肿的功效。用于治疗气虚乏力，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，痈疽难渍，久渍不敛，血虚萎黄，内热消渴，慢性肾炎，蛋白尿，糖尿病等。\n[0013] 母菊：又称洋甘菊，其含有的兰香油薁及其合成衍生物愈创薁均有消炎作用，愈创薁对大鼠的右旋糖酐性浮肿有显著抑制作用；对透明质酸酶、甲醛、组织胺性浮肿有中等度的抑制。\n[0014] 本发明的发明人将上述药物组合后外用，并提出该组合物外用的最佳用量配比，使各药物能够产生协同功效，其中大黄可降低毛细血管通透性，增强血管壁弹性；槐米可凉血逐淤，恢复正常微循环；黄芪可增强胶原蛋白、弹性蛋白活力；母菊可增强皮肤屏障。\n[0015] 另外，在上述药物提取物基础上添加水溶性神经酰胺、VA棕榈酸酯、硬脂酸胆甾醇酯，具有增强皮肤新陈代谢的功效。大黄主要通过抑制酪氨酸激酶Flt1降低血管通透性的，Flt1促使受体从休眠态转到活化态，发生自磷酸化，激活磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(pl3k/Akt)的活性使得信号通路打开，进而发生一系列级联反应，因其内皮细胞分裂增生，血管内皮通透性增加，因此抑制Flt1活性可以降低毛细血管的通透性。\n[0016] 本发明的具体技术方案如下：\n[0017] 一种具有祛除面部红血丝功效的护肤组合物，所述组合物包括A相、B相和基质，所述A相包括水溶性神经酰胺、VA棕榈酸酯和硬脂酸胆甾醇酯；所述B相包括中药提取物。\n[0018] 所述各组分用量为：\n[0019] A相：水溶性神经酰胺 0.1～1wt％\n[0020] VA棕榈酸酯 0.5～1.5wt％\n[0021] 硬脂酸胆甾醇酯0.1～1wt％\n[0022] B相：中药提取物1～5wt％\n[0023] 余量为基质。\n[0024] 所述B相中还包括尿囊素、芦荟粉和植物促渗剂中的一种或多种。\n[0025] 所述各组分用量为：\n[0026] A相：水溶性神经酰胺0.1～1wt％\n[0027] VA棕榈酸酯0.5～1.5wt％\n[0028] 硬脂酸胆甾醇酯0.1～1wt％\n[0029] B相：中药提取物1～5wt％\n[0030] 尿囊素0.01～1.5wt％\n[0031] 芦荟粉0.1～10wt％\n[0032] 植物促渗剂0.2～1wt％\n[0033] 余量为基质。\n[0034] 所述中药提取物由下述重量份配比的原料药制成：\n[0035] 大黄35～55份、槐米20～25份、黄芪10～20份、母菊5～25份。\n[0036] 所述中药提取物按照下述方法制成，具体步骤为：\n[0037] (1)按照上述重量份配比称取各原料药；\n[0038] (2)将大黄、槐米、黄芪和母菊分别粉碎至60～80目，然后按照权利要求5所述的重量份配比混合均匀，得中药组合物；\n[0039] (3)将上述中药组合物加丙二醇进行提取，所述中药组合物与丙二醇的质量体积比g/ml为1∶10～15；\n[0040] (4)将步骤(3)制备的提取物液100～200目过滤，4000～5000r/min离心后，真空抽滤，最终制备得到中药提取物。\n[0041] 所述步骤(3)中提取为超声提取，所述超声提取的温度为60～80℃，时间为45～\n60分钟，超声频率为30～50KHz。\n[0042] 所述步骤(4)中真空抽滤是500～700目过滤(可以使用精滤板或硅藻土抽滤)，真空度是0.05～0.1MPa。\n[0043] 一种制备上述护肤组合物的方法，其特征在于，所述方法具体步骤如下：\n[0044] (1)按上述组合物准备各原料；\n[0045] (2)将A相、B相和基质分别加热至80～85℃搅拌，使原料溶解完全；所述基质不包括增稠剂、植物透明质酸和防腐剂；\n[0046] (3)将A相、B相加入到乳化锅中，抽真空(真空度为-0.1个大气压)，40～80转/分钟搅拌，均质1～3分钟后，加入增稠剂，均质15～60秒，加热至75～85℃保温搅拌\n20～30分钟，调节pH值在5.0～6.5之间，加入植物透明质酸和防腐剂，均质3分钟后真空消泡降温，降温速率为1～4℃/min；\n[0047] (4)当温度降至30～40℃时，搅拌均匀出料即可。\n[0048] 本发明制剂，其用法与用量如下：\n[0049] 方法：每日洁面后，在肌肤上涂抹本发明制剂，早晚各一次。\n[0050] 用量：根据个人需要确定，适量涂抹本发明制剂即可。对于面部局部红血丝，可以涂抹多次，以全部覆盖为准。\n[0051] 本发明的优点与效益：\n[0052] 本发明原材料选用均为天然舒缓成分，原料温和，对皮肤无刺激性，通过多种途径祛除针对化学换肤刺激以及一些皮肤过敏所致的面部红血丝，不同于一般祛红血丝添加剂只从单方面作用。本发明具有降低血管通透性、恢复微循环，促进皮肤新陈代谢、修护皮肤屏障，增加胶原蛋白弹性蛋白等功效，此外还具有保湿、润肤等功效。实验证明本发明制剂使用3个月后，面部红色素平均含量下降25.5％，总有效率高达92％以上。本发明原料获取简单、制备方法便捷，易于被广大消费者接受，具有很好的应用前景和市场前景。\n[0053] 本发明上述发明内容部分已经对本发明的技术方案做了详细的描述，本领域技术人员根据上述内容即可重复本发明并获得本发明所述的技术效果。下面通过具体实施方式对本发明技术内容做进一步的解释，以使本领域技术人员更清楚的理解本，并非对本发明的限制，任何等同替换或公知改变均属于本发明保护范围。\n附图说明\n[0054] 图1为不同浓度中药提取物对Flt1的抑制率比较；\n[0055] 图2为中药提取物减少水分流失TEWL值的测定曲线；\n[0056] 图3为中药提取物增加皮肤水分含量MMV值的测定曲线；\n[0057] 图4为中药提取物与成纤维细胞培养不同时间对成纤维细胞凋亡率的影响。\n具体实施方式\n[0058] 本实施例所用药材均可以从中国药材集团公司够买得到，符合中华人民共和国药典2005版标准。\n[0059] 其他原料购买厂家如表1所示：\n[0060] 表1原料购买厂家及规格型号\n[0061] \n[0062] \n[0063] 本发明较佳实施例所用的基质成分如上表所述，本实施例所用基质成分可以将本发明活性组分的功效发挥到最佳。但其他厂家生产的可应用于化妆品的常用基质也可用于本发明，用量只要符合国家化妆品添加剂用量标准即可，不会影响本发明效果，因此不一一列举。\n[0064] 本发明所用的均质乳化设备为北京华远航贸易有限公司生产的，其有均质、搅拌和温控等功能。其他厂家生产的用于化妆品制备的均质乳化设备也可用于本发明，只要严格按照本发明所述的工艺参数进行操作，均可达到本发明所述效果。\n[0065] 实施例1本发明中药提取物的制备\n[0066] 首先将大黄、槐米、黄芪及母菊分别粉碎至60目混合均匀，取料液比1∶10，即\n100g大黄、槐米、黄芪、母菊的混合物，其中，大黄55克，槐米20克，黄芪20克，母菊5克，之后加入1000mL丙二醇；超声提取45min(加盖保鲜膜，减少蒸发)，温度为75℃；停止加热，水循环冷却到40℃，200目粗滤；4000r/min的转速下离心10分钟，取上清液；真空硅藻土滤饼抽滤上清液，真空度是0.05～0.1MPa(真空度随液体体积的变化略有变化，只要在此范围内即可)，收集抽滤液，即为中药提取物溶液。之后根据需要，可进行后续操作，如洗桶，消毒，灌装，装箱，打码，入库。\n[0067] 实施例2本发明中药提取物的制备\n[0068] 首先将大黄、槐米、黄芪及母菊分别粉碎至70目混合均匀，取料液比1∶15，即\n100g大黄、槐米、黄芪、母菊的混合物，其中，大黄40克，槐米25克，黄芪10克，母菊25克，之后加入1500mL丙二醇；超声提取55min(加盖保鲜膜，减少蒸发)，温度为60℃；停止加热，水循环冷却到40℃，200目纱布粗滤；4000r/min的转速下离心10分钟，取上清液；真空\n500目精滤板抽滤上清液，真空度是0.05～0.1MPa(真空度随液体体积的变化略有变化，只要在此范围内即可)，收集抽滤液，即为中药提取物溶液。之后根据需要，可进行后续操作，如洗桶，消毒，灌装，装箱，打码，入库。\n[0069] 实施例3本发明中药提取物的制备\n[0070] 首先将大黄、槐米、黄芪及母菊分别粉碎至80目混合均匀，取料液比1∶10，即\n100g大黄、槐米、黄芪、母菊的混合物，其中，大黄35克，槐米25克，黄芪20克，母菊20克，之后加入1000mL丙二醇；超声提取60min(加盖保鲜膜，减少蒸发)，温度为80℃；停止加热，水循环冷却到40℃，100目粗滤；5000r/min的转速下离心10分钟，取上清液；真空700目精滤板抽滤上清液，真空度是0.05～0.1MPa(真空度随液体体积的变化略有变化，只要在此范围内即可)，收集抽滤液，即为中药提取物溶液。\n[0071] 实施例4本发明喷雾剂的制备\n[0072] (1)将实施例1制备的中药提取物在真空度1.33Kpa(即10mmHg)，40～50℃环境下，浓缩成相对密度为1.2～1.3的浸膏；\n[0073] (2)将70％乙醇缓慢加入上述浸膏中，静置18小时后取上清液，过滤后滤液置室温冷却，第二次醇沉冷却后，加适量蒸馏水，移至冰库冷却，滤过后，制备成清膏液备用；\n[0074] (3)将适量月桂氮卓酮溶液(透皮促进剂)加入清膏液中，搅拌至分散均匀，分装入喷雾瓶中。\n[0075] 实施例5本发明祛红血丝面霜的制备\n[0076] 1、原料及用量，见表2：\n[0077] 表2\n[0078] \n[0079] \n[0080] 2、制备方法：\n[0081] (1)按上述组分及用量准备各原料；\n[0082] (2)将A相和B相分别加热至80℃搅拌，使原料溶解完全；\n[0083] (3)将A相、B相抽入乳化锅中，抽真空(真空度为-0.1个大气压)，搅拌，搅拌速率为40转/分钟，均质1分钟后，加入增稠剂，均质30秒，加热至75℃保温搅拌20分钟，调节pH值在5.0，加入植物透明质酸和防腐剂，均质3分钟后真空消泡降温；降温速率为1℃/min；搅拌分散均质；\n[0084] (4)当温度降至40℃时，搅拌均匀出料。\n[0085] 实施例6本发明祛红血丝面霜的制备\n[0086] 1、原料及用量，见表3：\n[0087] 表3\n[0088] \n[0089] \n[0090] 2、制备方法：\n[0091] (1)按上述组分及用量准备各原料；\n[0092] (2)将A相和B相分别加热至85℃搅拌，使原料溶解完全；\n[0093] (3)将A相、B相抽入乳化锅中，抽真空(真空度为-0.1个大气压)，搅拌，搅拌速率为60转/分钟，均质3分钟后，加入增稠剂，均质60秒，加热至85℃保温搅拌30分钟，调节pH值在6.5，加入植物透明质酸和防腐剂，均质3分钟后真空消泡降温；降温速率为4℃/min；搅拌分散均质；\n[0094] (4)当温度降至40℃时，搅拌均匀出料。\n[0095] 实施例7本发明祛红血丝乳液的制备\n[0096] 1、原料及用量，见表4：\n[0097] 表4\n[0098] \n[0099] \n[0100] 2、制备方法：\n[0101] (1)按上述组分及用量准备各原料；\n[0102] (2)将A相和B相分别加热至80℃搅拌，使原料溶解完全；\n[0103] (3)将A相、B相抽入乳化锅中，抽真空(真空度为-0.1个大气压)，搅拌，搅拌速率为80转/分钟，均质2分钟后，加入增稠剂，均质15秒，加热至80℃保温搅拌20分钟，调节pH值在6.0，加入植物透明质酸和防腐剂，均质3分钟后真空消泡降温；降温速率为2℃/min；搅拌分散均质；\n[0104] (4)当温度降至40℃时，搅拌均匀出料。\n[0105] 实施例8本发明祛红血丝面霜的制备\n[0106] 1、原料及用量，见表5：\n[0107] 表5\n[0108] \n[0109] \n[0110] 2、制备方法：\n[0111] (1)按上述组分及用量准备各原料；\n[0112] (2)将A相和B相分别加热至80℃搅拌，使原料溶解完全；\n[0113] (3)将A相、B相抽入乳化锅中，抽真空(真空度为-0.1个大气压)，搅拌，搅拌速率为40转/分钟，均质1分钟后，加入增稠剂，均质30秒，加热至75℃保温搅拌20分钟，调节pH值在5.0，加入植物透明质酸和防腐剂，均质3分钟后真空消泡降温；降温速率为3℃/min；搅拌分散均质；\n[0114] (4)当温度降至30℃时，搅拌均匀出料。\n[0115] 本发明中药提取物试验及结果\n[0116] 下述试验中所用的中药提取物溶液，是将实施例1制备得到的中药提取物溶液记为浓度为100％的提取物溶液，其它浓度的提取物溶液是将该溶液进行相应稀释得到的。\n[0117] 1、降低毛细血管通透性能力测定\n[0118] 该测定方法按照如下文献中的方法进行：庄书斐，周彩红，钱静，钱幕，SHIBUYAMasabumi，叶其壮，新方法随机筛选血管内皮生长因子受体I激酶的抑制剂，中国药理学报，2002年第23期：117-123。\n[0119] VEGF作为生长因子结合到它的受体Flt1的细胞表面部分，促使受体从休眠态转到活化态，发生自磷酸化，激活磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(p13k/Akt)的活性使得信号通路打开，进而发生一系列级联反应，因其内皮细胞分裂增生，血管内皮通透性增加，因此抑制Flt1活性可以降低毛细血管的通透性。PolyE4Y是一个谷氨酸和酪氨酸多肽聚合物，与Flt1结合发生磷酸化，PolyE4Y中被磷酸化的酪氨酸基团可以通过抗磷酸化单克隆抗体PY20来识别，然后辣根过氧化物酶HRP抗体作为第二抗体结合PY20，在辣根过氧化物酶作用下产生一种物质在450nm进行紫外吸收，加入Flt1抑制剂能够与Flt1竞争和底物结合，使得紫外吸收降低，抑制Flt1活性。\n[0120] 实验方法：100μL polyE4Y溶液(1mg/L，在20mmol/L，pH7.5Tris·HCl，140mmol/LNaCl溶液中稀释)添加到未经处理的96孔板中每一个孔中。4℃下溶液在孔板上放置一夜，弃去上清液。该板在4℃下进行储存并在7d内使用和被覆盖。添加Flt1酪氨酸激酶(GST-F，100nmol/L)和抑制剂(中药提取物)(5g/L)到板上，并且在30℃下培养1h。用Tris/NaCl缓冲液清洗板后，室温下用5％BSA封闭30min。用含有0.1％Tween的Tris/NaCl缓冲液冲洗孔板，PY20(每个孔100μL，20μg/L)添加到每个板孔中，在室温下培养\n2h。冲洗该板三次后，添加HRP-IgG(每板孔100μL，40μg/L)，然后在室温下培养1h。最后该板用TBST缓冲液冲洗四次。显像缓冲液(100μL，柠檬酸缓冲液0.1mol/L，pH5.5，H2O21.3mmol/L，O-邻苯二胺10mmol/L)添加到每个板孔中。颜色变化后用100μL，1mol/L H2SO4终止反应。在492nm下酶标仪进行检测。\n[0121] 实验结果用Curve Expert1.3软件做双Log二次拟合曲线。阳性对照组为酪氨酸激酶。实验结果见图1。由图可知，提取物在1％的浓度抑制率最高达到91％以上，而随着浓度的增加抑制率略有降低。说明本发明提供的中药提取物具有非常强的抑制Flt1酪氨酸激酶受体的功效。\n[0122] 2、修复皮肤屏障保湿测定\n[0123] 该方法按照如下文献提供进行：温竹，黄正梅，高艳玲，化妆品保湿功效评价，日用化学品科学，2009年第12期：26-28。\n[0124] 皮肤水分流失TEWL对评估皮肤水分保护层的功能是非常重要的参数，在国际上已经得到了广泛的认可。皮肤水分保护层越完好，皮肤角质层屏障功能越强，水分的含量就会越高，皮肤水分流失TEWL的数值也就越低。MMV(moisture measurement value)测定皮肤的水分含量，MMV值越大皮肤角质层水分含量越高。\n[0125] 实验方法：\n[0126] (1)测试环境\n[0127] 温度：21±1℃，湿度：50±5％，并且进行实时动态监测。\n[0128] (2)测前准备\n[0129] 用水清洗双手手臂内侧，擦干后标记受测部位，同一手臂可同时标记多个区域，区域间隔1cm，测试产品和空白对照均随机分布在左右手臂上，从左臂至右臂依次编号1-10号，11号不涂抹样品为空白参照。\n[0130] (3)测试\n[0131] 所采用的中药提取物溶液的质量浓度为5％。\n[0132] 对三十名志愿者进行人体贴敷实验。清洗二十分钟后测试敷面膜前水分含量值，依次贴敷分别载有0.2ml 1～10号样品(中药提取物质量浓度5％)液面膜，十五分钟后揭去面膜，用湿纸巾擦拭残留在皮肤表面的样品液，再用干纸巾擦干皮肤表面水分，待皮肤吸收二十分钟后，再次检测测试者贴敷处水分含量值(MMV值)和TEWL值。\n[0133] 对皮肤水分含量的测量结果进行统计学分析比较，采用t检验方法进行显著性分析检验，其中p＜0.05表示有显著性差异。估计均数的抽样误差可计算该组数据的标准差或标准误。当个别数据偏差较大时，可根据t检验剔除标准进行筛选，如符合标准则可剔除；当剔除后的受试者人数少于30人时，应增加受试者人数直至符合要求。\n[0134] 该实验结果如图2、3所示，由图可知，5％的中药提取物具有明显降低水分含量散失的功效。5％浓度的中药提取物具有增强皮肤水分含量的功效，恢复受损角质层，修复调整皮肤的正常厚度，使其最大程度的发挥生理功能，可以促进皮肤保持健康的、自然的状态。\n[0135] 3、MTT法检测成纤维细胞检测\n[0136] 该方法按照如下文献中的方法进行：王曦.黄芪甲苷对人皱纹与非皱纹皮肤成纤维细胞生物学特性的影响[D].四川：四川大学，2005.4。\n[0137] 成纤维细胞是皮肤真皮中的主体细胞成分，它与自身分泌的胶原纤维，弹性纤维及基质成分一同构成了真皮的主体。通过体外培养人皮肤成纤维细胞，采用MTT(四甲基偶氮哇盐)法检测中药提取物对体外培养的成纤维细胞生物学特性的影响，中药提取物中所含有的黄芪多糖，具有促进细胞生长的功效。\n[0138] 实验方法：\n[0139] (1)成纤维细胞培养：采用组织块法(explant culture)。用D-Hanks液将新鲜皮\n3\n肤标本漂洗，剪去表皮和皮下组织。将真皮组织剪切成0.5～1mm 组织块放于培养瓶，倒置。加入适量培养液(DMEM培养液)，在37℃、5％CO2的饱和湿度条件下孵育2～3小时，翻转培养瓶，上述条件下，每周更换培养液两次。待原代培养液中长出的成纤维细胞融合，用0.25％胰蛋白酶液消化细胞，进行传代培养。\n[0140] (2)MTT法测成纤维细胞增殖：取处于对数生长期的皮肤成纤维细胞，用含EDAT的胰蛋白酶消化，再用含10％新生小牛血清的DMEM培养液吹打培养瓶底部，制成单细胞悬液。苔盼兰染色计数，接种于96孔培养板中。次日取出细胞板，试验组：向细胞板中加入\n20μl质量浓度为1％的中药提取液；对照组：向细胞板中加入20μl培养液。\n[0141] 分别于培养时间结束前4～6h取出培养板，依次在每孔中加入MTT溶液，继续孵育至培养结束。弃去孔中培养上清液，再于每孔加入DMSO(二甲基亚砜)。在酶联免疫检测仪上选择570nm波长，测定各孔光吸收值(OD值)。\n[0142] 细胞凋亡率＝(处理组OD值-对照组OD值)/对照组OD值×100％\n[0143] 该实验结果如图4所示，由图可知，加入1％的中药提取物，分别在24h、72h、120h对细胞凋亡率进行测定，在120h后凋亡率由67.3％降低到28.8％。\n[0144] 本发明临床实验及结果\n[0145] 采用实施例5制备的祛红血丝面霜进行临床试用观察100例，随即分为两组，一组使用本发明产品，另外一组使用市售祛红血丝产品。主要祛除针对化学换肤刺激以及一些皮肤过敏所致的面部红血丝患者，临床表现为面部持续或阶歇泛红，颧骨两侧出现团状或丝状的肉眼可见的红血丝。\n[0146] 1.测试方法\n[0147] 每日洁面后，涂复本发明实施例5制剂(祛红血丝面霜)适量，早晚各一次，试用期间不能与其它护肤品合用；市售祛红血丝产品早晚各一次进行涂抹，试用期间不能与其它护肤品合用。1个月、3个月各统计一次。\n[0148] 2.测试标准\n[0149] 测试仪器：\n[0150] 皮肤黑色素和红黑色素测试仪(德国CK电子公司，Mexamaeter)。\n[0151] 测试原理：\n[0152] 仪器是基于光谱吸收的原理，通过测定特定波长的光照在人体皮肤上后的反射量来确定皮肤中黑色素和血红素的含量。仪器探头的发射器发出波长分别为568nm、660nm、和880nm三种波长的光照射在皮肤表面，接受器测得皮肤反射的光。发射器和接收器的位置保证了只有漫射光和散射光可以被测到，由于发射光的量是一定的，因此就可以测出被皮肤吸收的光的量。\n[0153] 通过检测皮肤红色素含量来确定祛红血丝效果，评判标准如下：\n[0154] 有效率＝〔试用前红色素值-试用后红色素值〕/试用前红色素值×100％[0155] \n 评判标准 有效率\n 效果显著 ≥20％\n 有效 5％～20％\n 无效 ≤5％\n[0156] 3.测试结果：\n[0157] 涂抹3个月后，本发明产品组效果显著38例，有效8例，总有效率92％(50例)，无效4例；红色素含量平均下降25.5％。市售祛红血丝产品，效果显著10例，有效18例，总有效率58％(50例)，无效22例；红色素含量平均下降10.3％。