一种保加利亚乳杆菌增菌培养基及其制备方法

1.一种保加利亚乳杆菌增菌培养基，其特征在于，在每100ml的水中包括乳糖0.4g，新生牛血清0.4ml，酪蛋白水解物0.8g，质量浓度1%的羟脯氨酸溶液0.090ml，质量浓度1%的谷氨酸溶液0.050ml和K2HPO40.59g，pH值6.5。
2.一种保加利亚乳杆菌增菌培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将羟脯氨酸和谷氨酸配制成质量浓度为1%的溶液，过滤除菌；
2）将新生牛血清过滤除菌；
3）将0.3～0.5份的乳糖、酪蛋白水解物0.8～1份、K2HPO40.5～0.8份混合溶解于
100份的水中，调pH至6.5～6.8，灭菌；加入经膜过滤的新生牛血清、质量浓度1%的羟脯氨酸溶液和质量浓度1%的谷氨酸溶液，其中新生牛血清为水的体积的0.3～0.4%，羟脯氨酸溶液为水的体积的0.08～0.12%，谷氨酸溶液为水的体积的0.04～0.05%；混匀后得到保加利亚乳杆菌增菌培养基。
3.如权利要求2所述的保加利亚乳杆菌增菌培养基的制备方法，其特征在于，所述步骤1）、2）的过滤除菌为用灭菌后的0.2微米的膜过滤除菌。
4.如权利要求2所述的保加利亚乳杆菌增菌培养基的制备方法，其特征在于，所述的膜是在121℃下灭菌20min。
5.如权利要求2所述的保加利亚乳杆菌增菌培养基的制备方法，其特征在于，所述的pH是用1mol/L HCl溶液调节。

一种保加利亚乳杆菌增菌培养基及其制备方法\n技术领域\n[0001] 本发明属于益生菌制品制备技术领域，涉及一种益生菌培养基，特别涉及一种保加利亚乳杆菌增菌培养基及其制备方法。\n背景技术\n[0002] 近年来，随着酸奶制作技术的发展，乳酸菌发酵剂的制备方法也得到了相应的提高。决定酸奶品质的一个关键因素是发酵剂，国内的酸奶生产企业大多采用传统的液体发\n7 8\n酵剂。而传统的液体发酵剂存在周期长、接种量大、操作繁琐、活菌数低(10-10cfu/mL)；\n菌种易污染、退化、变异等众多弊端，因此直投式的冻干发酵剂成为酸奶发酵剂发展的主要方向。\n[0003] 保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌是酸奶生产中常用的菌种。要得到高活菌数且高活力的酸奶直投式发酵剂，首先必须筛选适合乳酸菌大量生长的增菌培养基。目前，大都采用MRS作为基础培养基，然后配合其他的生长因子来培养保加利亚乳杆菌。但此培养基价格昂贵，成分复杂，制作繁琐，不利于工业化生产。因此，选择价格低廉且活菌数高的适合保加利亚乳杆菌生长的增殖培养基是非常必要的。\n[0004] 吕加平等研究了保加利亚乳杆菌的增菌培养基。结果表明，1g鱼肉蛋白胨、2g乳\n8\n糖、1g酵母浸膏、各0.5g K2HPO4-KH2PO4，在37℃下培养24h后，菌落总数可达4.69×10cfu/mL。万红兵等研究了在番茄汁基础培养基中添加不同营养物质对保加利亚乳杆菌生长的影响，最后确定了增殖培养基的最佳配比：以番茄汁为基础培养基，添加1.0%胰蛋白胨、0.5%酵母膏、0.3%碳酸钙。专利CN200610012692.7公布了一种保加利亚乳杆菌复合增菌培养基，它是以菊芋汁为主要原料并添加其他成分。\n发明内容\n[0005] 本发明解决的问题在于提供一种保加利亚乳杆菌增菌培养基及其制备方法，培养基廉价而且能使保加利亚乳杆菌大量生长，以实现高效浓缩型直投式发酵剂的工业化大规模生产。\n[0006] 本发明是通过以下技术方案来实现：\n[0007] 一种保加利亚乳杆菌增菌培养基，以质量份数计，包括以下组分：乳糖0.3～0.5份，酪蛋白水解物0.8～1份，K2HPO40.5～0.8份，羟脯氨酸0.08～0.12份，谷氨酸0.04～\n0.05份，水100份，以及水体积0.3～0.4%的新生牛血清，pH值6.5～6.8。\n[0008] 具体的，保加利亚乳杆菌增菌培养基为：在每100ml的水中包括乳糖0.4g，新生牛血清0.4mL，酪蛋白水解物0.8g，质量浓度1%的羟脯氨酸溶液0.090mL，质量浓度1%的谷氨酸溶液0.050mL和K2HPO40.59g，pH值6.5。\n[0009] 一种保加利亚乳杆菌增菌培养基的制备方法，包括以下步骤：\n[0010] 1）将羟脯氨酸和谷氨酸配制成质量浓度为1%的溶液，过滤除菌；\n[0011] 2）将新生牛血清过滤除菌；\n[0012] 3）将0.3～0.5份的乳糖、酪蛋白水解物0.8～1份、K2HPO40.5～0.8份混合溶解于100份的水中，调pH至6.5～6.8，灭菌；加入经膜过滤的新生牛血清、质量浓度1%的羟脯氨酸溶液和质量浓度1%的谷氨酸溶液，其中新生牛血清为水的体积的0.3～0.4%，羟脯氨酸溶液为水的体积的0.08～0.12%，谷氨酸溶液为水的体积的0.04～0.05%；混匀后得到保加利亚乳杆菌增菌培养基。\n[0013] 所述步骤1）、2）的过滤除菌为用灭菌后的0.2微米的膜过滤除菌。\n[0014] 所述的膜是在121℃下灭菌20min。\n[0015] 所述的pH是用1moL/L HCl溶液调节。\n[0016] 与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：\n[0017] 本发明提供的保加利亚乳杆菌增菌培养基，是一种廉价而且能使保加利亚乳杆菌大量生长的培养基，所涉及的培养基成分简单而且便宜，都是比较常见的碳氮源，而且容易制取，因此是一种工业生产乳酸菌的好方法。\n[0018] 高效的浓缩型直投式发酵剂生产，首先必须获得适合乳酸菌大量生长的增菌培养基。但保加利亚乳杆菌对营养的要求较为复杂，除基本的碳氮源外，一般还需要B族维生素、氨基酸类化合物以及其他生长因子。同时，实验室使用的一般是MRS培养基，但其价格昂贵。\n[0019] 本发明提供的保加利亚乳杆菌增菌培养基，保加利亚乳杆菌经活化后，以3%接入\n8\n该增菌培养基中，35℃培养20h，活菌数高达(5.97-7.25)×10cfu/mL以上，与实验室常用\n8\n的MRS培养基的活菌数（4.8-5.3）×10cfu/mL相比得到了提高。\n[0020] 本发明提供的保加利亚乳杆菌增菌培养基，其增菌的效果显著。而且该增菌培养基容易分离菌体细胞，因此很适合大规模的工业化生产。\n具体实施方式\n[0021] 本发明提供一种保加利亚乳杆菌增菌培养基及其制备方法，培养基廉价而且能使保加利亚乳杆菌大量生长，以实现高效浓缩型直投式发酵剂的工业化大规模生产。下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。\n[0022] 实施例1\n[0023] 保加利亚乳杆菌增菌培养基组成：乳糖0.4g，新生牛血清0.4mL，酪蛋白水解物\n0.8g；质量浓度1%的羟脯氨酸0.09mL；质量浓度1%的谷氨酸0.05mL；K2HPO40.59g，水\n100mL，pH值6.5。\n[0024] 其中，酪蛋白水解物于罗森博科技有限公司商购可得，为黄色粉末，易溶于水。\n[0025] 其制备方法为：\n[0026] 1）羟脯氨酸和谷氨酸浓溶液的制备：\n[0027] 将羟脯氨酸和谷氨酸配制成1%的浓溶液，然后经121℃，20min高温灭菌的0.2微米的膜过滤。\n[0028] 2）新生牛血清的制备：\n[0029] 将新生牛血清经121℃，20min高温灭菌的0.2微米的膜进行过滤。\n[0030] 3）保加利亚乳杆菌增菌培养基的制备：\n[0031] 将乳糖0.4g、酪蛋白水解物0.8g、K2HPO40.59g，混合溶于100mL水中，用1moL/L HCl溶液调pH至6.5。然后经118℃，15min灭菌，最后再加入经膜过滤的新生牛血清0.4mL、质量浓度1%的羟脯氨酸0.09mL和质量浓度1%的谷氨酸0.05mL。\n[0032] 将保加利亚乳杆菌经过液体MRS培养基活化后，以3%的接种量接入本实施例所得\n8\n的增菌培养基中，35℃培养20h，活菌数可达6.2×10cfu/mL，较之对照MRS培养基的活菌\n8\n数4.92×10cfu/mL相比得到了提高。\n[0033] 实施例2\n[0034] 保加利亚乳杆菌增菌培养基组成：乳糖0.4g，新生牛血清0.4mL，酪蛋白水解物\n1g；质量浓度1%的羟脯氨酸0.10mL；质量浓度1%的谷氨酸0.04mL；K2HPO40.59g，水100mL，pH值6.6。\n[0035] 其制备方法为：\n[0036] 1）羟脯氨酸和谷氨酸浓溶液的制备：\n[0037] 将羟脯氨酸和谷氨酸配制成1%的浓溶液，然后经121℃，20min高温灭菌的0.2微米的膜过滤。\n[0038] 2）新生牛血清的制备：\n[0039] 将新生牛血清经121℃，20min高温灭菌的0.2微米的膜进行过滤。\n[0040] 3）保加利亚乳杆菌增菌培养基的制备：\n[0041] 将乳糖0.4g、酪蛋白水解物1g、K2HPO40.59g，混合溶于水中，用1moL/LHCl溶液调pH至6.6，然后经118℃，15min灭菌，最后再加入经膜过滤的新生牛血清0.4mL、质量浓度\n1%的羟脯氨酸0.10mL和质量浓度1%的谷氨酸0.04mL。\n[0042] 将保加利亚乳杆菌经过液体MRS培养基活化后，以3%的接种量接入本实施例所得\n8\n的增菌培养基中，35℃培养20h，活菌数可达6.38×10cfu/mL，较之对照MRS培养基的活菌\n8\n数4.98×10cfu/mL相比得到了提高。\n[0043] 实施例3\n[0044] 保加利亚乳杆菌增菌培养基组成：乳糖0.4g，新生牛血清0.3mL，酪蛋白水解物\n0.8g；质量浓度1%的羟脯氨酸0.12mL；质量浓度1%的谷氨酸0.05mL；K2HPO40.59g，水\n100mL，pH值6.8。\n[0045] 其制备方法为：\n[0046] 1）羟脯氨酸和谷氨酸浓溶液的制备：\n[0047] 将羟脯氨酸和谷氨酸配制成1%的浓溶液，然后经121℃，20min高温灭菌的0.2微米的膜过滤。\n[0048] 2）新生牛血清的制备：\n[0049] 将新生牛血清经121℃，20min高温灭菌的0.2微米的膜进行过滤。\n[0050] 3）保加利亚乳杆菌增菌培养基的制备：\n[0051] 将乳糖0.4g、酪蛋白水解物0.8g、K2HPO40.59g，混合溶于水中，用1moL/LHCl溶液调pH至6.8，然后经118℃，15min灭菌，最后再加入经膜过滤的新生牛血清0.3mL、质量浓度1%的羟脯氨酸0.12mL和质量浓度1%的谷氨酸0.05mL。\n[0052] 将保加利亚乳杆菌经过液体MRS培养基活化后，以3%的接种量接入本实施例所得\n8\n的增菌培养基中，35℃培养20h，活菌数可达6.92×10cfu/mL，较之对照MRS培养基的活菌\n8\n数5.13×10cfu/mL相比得到了提高。