6-氨基喹唑啉类化合物及应用

1.一种式(Ⅰ-a)所示6-氨基喹唑啉类化合物，
式(Ⅰ-a)中，R1为丙基，R3与R1结构相同。
2.一种权利要求1所述式(Ⅰ-a)所示化合物在制备预防或治疗人肺癌或人乳腺癌药物中的应用。
3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述人肺癌为人肺癌细胞株A-549，所述人乳腺癌为人乳腺癌细胞株MCF-7。

6-氨基喹唑啉类化合物及应用\n(一)技术领域\n[0001] 本发明涉及一种喹唑啉类化合物及其应用，特别涉及6-氨基喹唑啉类化合物及在制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中的应用。\n(二)背景技术\n[0002] 喹唑啉类化合物具有许多较好的生物活性，在医药领域有着广泛的应用，尤其一些特殊结构的喹唑啉类衍生物具有明显的抗病毒活性、抗菌活性、抗肿瘤活性等，喹唑啉类化合物作为抗肿瘤药物已经上市了一些品种。例如上市的用于治疗肺癌的吉非替尼(Gefitinib)和厄洛替尼(Erlotinib)，以及用于治疗乳腺癌的拉帕替尼(Lapatinib)，它们都属于4-苯胺基喹唑啉类化合物。新型的喹唑啉类化合物及其生物活性也常见文献报道(参阅Y.-Y.Ke,H.-Y.Shiao,Y.C.Hsu,C.-Y.Chu,W.-C.Wang,Y.-C.Lee,W.-H.Lin,C.-H.Chen,J.T.A.Hsu,C.-W.Chang,C.-W.Lin,T.-K.Yeh,Y.-S.Chao,M.S.Coumar,H.-P.Hsieh,ChemMedChem 2013,8,136-148；A.Garofalo,A.Farce,S.Ravez,A.Lemoine,P.Six,P.Chavatte,L.Goossens,P.Depreux,J.Med.Chem.2012,55,1189-1204)。当然多数喹唑啉类化合物并不具有抗肿瘤活性。\n(三)发明内容\n[0003] 本发明的目的在于提供一种具有抗癌活性的新型喹唑啉类化合物—6-氨基喹唑啉类化合物及应用，该类化合物在一定剂量下对人肺癌细胞株A-549或人乳腺癌细胞株MCF-7具有较好的抑制率；且该类化合物制备方法简便，易于操作，原料易得，且生产成本较低，适于工业化应用。\n[0004] 为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：\n[0005] 本发明提供一种式(Ⅰ-a)所示6-氨基喹唑啉类化合物，\n[0006]\n[0007] 式(Ⅰ-a)中，R1为乙基或丙基，R3与R1结构相同。\n[0008] 本发明还提供一种用于制备式(Ⅰ-a)所示化合物的中间体，\n[0009]\n[0010] 式(Ⅰ-b)中，R1为乙基或丙基，R3与R1结构相同。\n[0011] 本发明提供一种式(Ⅰ-a)所示化合物在制备式(Ⅰ)所示化合物中的应用，[0012]\n[0013] 式(Ⅰ)中，R1为乙基或丙基，R3与R1结构相同；R2为RCONH，其中R为C1-C3烷基或苯基。\n[0014] 本发明还涉及一种式(Ⅰ-a)所示化合物在制备预防或治疗人肺癌或人乳腺癌药物中的应用，所述人肺癌为人肺癌细胞株A-549，所述人乳腺癌为人乳腺癌细胞株MCF-7。\n[0015] 进一步，式(Ⅰ)所示的4-[3-(2-二取代氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-取代基喹唑啉类化合物优选为下列之一：\n[0016]\n[0017] 更进一步，所述的4-[3-(2-二取代氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-取代基喹唑啉类化合物(Ⅰ)优选为下列之一：\n[0018]\n[0019] 本发明提供一种所述4-[3-(2-二取代氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-取代基喹唑啉类化合物的制备方法，所述的方法为：(1)将式(Ⅱ)所示化合物与式(Ⅲ)所示化合物混合，在碱性催化剂B1的作用下，于有机溶剂A1中，25～120℃进行反应(TLC跟踪监测，展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v)，优选40～100℃反应0.5～12h)，反应完全后，将反应液过滤，滤液浓缩，干燥(优选40℃真空干燥)，得到式(Ⅰ-b)所示化合物；所述的碱性催化剂B1选自下列之一：吡啶、二乙胺、三乙胺、喹啉、N,N-二甲苯胺、4-二甲氨基吡啶、4-吡咯烷基吡啶或碳酸钠(优选吡啶、二乙胺、三乙胺、N,N-二甲苯胺或4-二甲氨基吡啶)；所述有机溶剂A1选自下列之一：氯仿、甲苯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈或N,N-二甲基甲酰胺；所述式(Ⅲ)所示化合物与式(Ⅱ)所示化合物、碱性催化剂B1的投料物质的量之比为1.0﹕0.8～1.2﹕1.0～\n8.0，所述有机溶剂A1的用量以式(Ⅲ)所示化合物的质量计为10～50mL/g；\n[0020]\n[0021] 式(Ⅱ)中，R1为乙基或丙基，R3与R1结构相同；\n[0022] 式(Ⅰ-b)中，R1为乙基或丙基，R3与R1结构相同；式(Ⅰ-b)中R1与式(Ⅱ)中R1相同，式(Ⅰ-b)中R3与式(Ⅱ)中R3相同；\n[0023] (2)式(Ⅰ-b)所示的化合物在还原剂B2作用下，于有机溶剂A2中，在25～100℃反应完全(TLC跟踪监测，展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v)，优选40～80℃反应0.5～12h)，反应液过滤，滤液减压浓缩后的浓缩物干燥(优选25℃干燥)，制得式(Ⅰ-a)所示的化合物；\n所述还原剂B2为下列之一：铁粉/浓盐酸，铁粉/醋酸，钯碳/甲酸铵或钯碳/水合肼；所述有机溶剂A2为下列之一：氯仿、甲苯、甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈或N,N-二甲基甲酰胺；当所述的还原剂B2为铁粉/浓盐酸或者铁粉/醋酸时，式(Ⅰ-b)所示的化合物与还原剂B2中的铁粉、浓盐酸或醋酸的投料质量比为1.0﹕1.0～3.0﹕0.2～1.0；当所述的还原剂B2为钯碳/甲酸铵或钯碳/水合肼时，式(Ⅰ-b)所示的化合物与还原剂B2中的钯碳、甲酸铵或水合肼的投料质量比为1.0﹕0.1～0.5﹕1.0～3.0；所述有机溶剂A2的用量以式(Ⅰ-b)所示的化合物的质量计为10～50mL/g；所述铁粉/浓盐酸，铁粉/醋酸是指铁粉与浓盐酸或醋酸的混合，其中浓盐酸质量浓度为36％～38％；所述钯碳/甲酸铵或钯碳/水合肼是指钯碳与甲酸铵或水合肼的混合物，其中钯碳中钯的质量负载量为5％，水合肼质量浓度为80％；\n[0024]\n[0025] 式(Ⅰ-a)中，R1为乙基或丙基，R3与R1结构相同；\n[0026] (3)将式(Ⅰ-a)所示化合物与酸酐或酰氯混合，在碱性催化剂B3作用下，于有机溶剂A3中，-10～50℃反应完全(TLC跟踪监测，展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v)，优选-\n10～50℃反应3～12h)，反应液分离纯化，制得式(Ⅰ)所示的化合物；所述的碱性催化剂B3为下列之一：吡啶、二乙胺、三乙胺、喹啉、N,N-二甲苯胺、4-二甲氨基吡啶、4-吡咯烷基吡啶或碳酸钠；所述有机溶剂A3为下列之一：四氢呋喃、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、乙腈、甲苯或苯；所述酸酐或酰氯为下列之一：乙酸酐、乙酰氯、异丁酸酐、异丁酰氯、苯甲酸酐、苯甲酰氯、丙酸酐、丙酰氯、丁酸酐或正丁酰氯；所述的式(Ⅰ-a)所示化合物与酸酐或酰氯、碱性催化剂B3的投料物质的量之比为1﹕1.0～8.0﹕1.0～3.0，所述有机溶剂A3的用量以式(Ⅰ-a)所示化合物的质量计为10～95mL/g。\n[0027] 本发明具体推荐步骤(3)按照如下方法进行：将式(Ⅰ-a)所示化合物、碱性催化剂B3加入有机溶剂A3中(也可以不加入有机溶剂A3)，于-10～10℃条件下，滴加酸酐的有机溶剂A3溶液或酰氯的有机溶剂A3溶液，滴毕，-10～50℃反应3～12小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物柱层析得到式(Ⅰ)所示化合物；溶解酸酐或酰氯的有机溶剂体积用量对本发明没影响，所述有机溶剂A3的用量以式(Ⅰ-a)所示化合物的质量计为10～95mL/g，有机溶剂A3是指溶解催化剂和式(Ⅰ-a)所示化合物的有机溶剂与溶解酸酐或酰氯有机溶剂的总体积。\n[0028] 进一步，本发明步骤(3)所述反应液分离纯化的方法为：反应完全后，将反应液过滤，滤液蒸除溶剂，取浓缩物用有机溶剂D将其溶解，获得溶解液，然后向溶解液中加入浓缩物1.0～2.0倍重量的柱层析硅胶，混匀后，蒸除溶剂，干燥，获得浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为1：0.1～10的石油醚与乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，收集含目标组分的流出液(优选以乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v)为展开剂跟踪检测，收集目标组分)，减压浓缩，干燥(优选50℃干燥)，获得式(Ⅰ)所示的化合物；所述有机溶剂D为下列之一：乙醇、氯仿、四氢呋喃或乙酸乙酯。\n[0029] 本发明还涉及式(Ⅰ)所示4-[3-(2-二取代氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-取代基喹唑啉类化合物在制备预防或治疗肿瘤药物中的应用，特别适用于制备预防或治疗人肺癌或人乳腺癌药物中的应用。本发明提供的化合物对人肺癌细胞株A-549或人乳腺癌细胞株MCF-7具有较好的抑制率。4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-乙酰氨基喹唑啉(Ⅰ-1)对人乳腺癌细胞株MCF-7的IC50分别为62.71μM。4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-苯甲酰氨基喹唑啉(Ⅰ-3)对人肺癌细胞株A-549的IC50为31.69μM。4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-乙酰氨基喹唑啉(Ⅰ-6)对人肺癌细胞株A-549和人乳腺癌细胞株MCF-7的IC50分别为\n40.30μM和64.24μM。\n[0030] 本发明所述有机溶剂A1、A2、A3和D均为有机溶剂，为了便于区分不同步骤所用有机溶剂不同而命名，字母本身没有含义；所述催化剂B1、还原剂B2和催化剂B3均为催化剂，为了便于区分不同步骤所用催化剂不同而命名，字母本身没有含义。\n[0031] 本发明的有益效果主要体现在：(1)本发明所述式(Ⅰ-a)所示6-氨基喹唑啉类化合物具有好的抗癌活性，有望应用于制备预防或治疗肿瘤疾病的药物中；4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)对人肺癌细胞株A-549和人乳腺癌细胞株MCF-7的IC50分别为30.10μM和17.11μM；(2)本发明提供的式(Ⅰ-a)所示6-氨基喹唑啉类化合物用于制备4-[3-(2-二取代氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-取代基喹唑啉类化合物(Ⅰ)的方法简单易于操作，原料易得，且生产成本较低，适于实用。\n(四)具体实施方式\n[0032] 本发明结合具体实施例作进一步的说明，以下的实施例是说明本发明的，而不是以任何方式限制本发明。\n[0033] 2-二取代氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ)的制备参照文献(Lombardo,C.M.；\nWelsh,S.J.；Strauss,S.J.；Dale,A.G.；Todd,A.K.；Nanjunda,R.；Wilson,W.D.；Neidle,S.,Bioorg.Med.Chem.Lett.2012,22(18),5984-5988；Fosdick,L.S.；Rapp,\nG.W.J.Am.Chem.Soc.1943,65,2307-2308)的方法制备得到。4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)的制备参照文献(Fernandes,C.；Oliveira,C.；Gano,L.；Bourkoula,A.；Pirmettis,I.；Santos,I.Bioorg.Med.Chem.2007,15,3974-3980)的方法制备得到。\n[0034] 实施例1：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)的制备[0035] 依次将1.20克(5.73mmol)4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)和1.52克(6.87mmol)2-二乙氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ-1)，3.62克(45.76mmol)吡啶，12毫升氯仿加入50毫升的反应瓶中，加热至40℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应10小时，关闭反应，过滤，滤液浓缩，40℃真空干燥，得到黄色油状产物4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)，收率87.3％。\n[0036]\n[0037] 实施例2：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)的制备[0038] 依次将1.20克(5.73mmol)4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)和1.01克(4.56mmol)2-二乙氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ-1)，1.67克(22.83mmol)二乙胺，60毫升甲苯加入100毫升的三口烧瓶中，加热至100℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应2小时，关闭反应，过滤，滤液浓缩，40℃真空干燥得到黄色油状产物4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)，收率62.4％。\n[0039] 实施例3：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)的制备[0040] 依次将1.20克(5.73mmol)4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)和1.27克(5.74mmol)2-二乙氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ-1)，0.58克(5.73mmol)三乙胺，60毫升甲醇加入100毫升的三口烧瓶中，加热至60℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应\n8小时，关闭反应，过滤，滤液浓缩，40℃真空干燥得到黄色油状产物4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)，收率72.5％。\n[0041] 实施例4：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)的制备[0042] 依次将1.20克(5.73mmol)4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)和1.40克(6.33mmol)2-二乙氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ-1)，1.40克(11.46mmol)4-二甲氨基吡啶，60毫升异丙醇加入100毫升的三口烧瓶中，室温25℃搅拌，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，反应12小时，关闭反应，过滤，滤液浓缩，40℃真空干燥得到黄色油状产物4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)，收率76.8％。\n[0043] 实施例5：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)的制备[0044] 依次将1.20克(5.73mmol)4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)和1.14克(5.15mmol)2-二乙氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ-1)，1.04克(8.58mmol)N,N-二甲苯胺，12毫升N,N-二甲基甲酰胺加入50毫升的反应瓶中，加热至120℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应0.5小时，关闭反应，过滤，滤液浓缩，40℃真空干燥得到黄色油状产物4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)，收率50.6％。\n[0045] 实施例6：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)的制备[0046] 依次将1.20克(5.73mmol)4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)和1.71克(6.86mmol)2-二丙氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ-2)，3.62克(45.76mmol)吡啶，12毫升氯仿加入50毫升的反应瓶中，加热至40℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应10小时，关闭反应，过滤，滤液浓缩，40℃真空干燥得到黄色油状产物4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)，收率84.2％。\n[0047]\n[0048] 实施例7：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)的制备[0049] 依次将1.20克(5.73mmol)4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)和1.14克(4.57mmol)2-二丙氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ-2)，1.67克(22.83mmol)二乙胺，60毫升甲苯加入100毫升的三口烧瓶中，加热至100℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应2小时，关闭反应，过滤，滤液浓缩，40℃真空干燥得到黄色油状产物4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)，收率73.4％。\n[0050] 实施例8：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)的制备[0051] 依次将1.20克(5.73mmol)4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)和1.43克(5.73mmol)2-二丙氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ-2)，0.58克(5.73mmol)三乙胺，60毫升甲醇加入100毫升的三口烧瓶中，加热至60℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应\n8小时，关闭反应，过滤，滤液浓缩，40℃真空干燥得到黄色油状产物4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)，收率81.7％。\n[0052] 实施例9：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)的制备[0053] 依次将1.20克(5.73mmol)4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)和1.57克(6.30mmol)2-二丙氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ-2)，1.40克(11.46mmol)4-二甲氨基吡啶，60毫升异丙醇加入100毫升的三口烧瓶中，室温25℃搅拌，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，反应12小时，关闭反应，过滤，滤液浓缩，40℃真空干燥得到黄色油状产物4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)，收率73.5％。\n[0054] 实施例10：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)的制备[0055] 依次将1.20克(5.73mmol)4-氯-6-硝基喹唑啉(Ⅲ)和1.29克(5.17mmol)2-二丙氨基-N-(3-氨基苯基)乙酰胺(Ⅱ-2)，1.04克(8.58mmol)N,N-二甲苯胺，12毫升N,N-二甲基甲酰胺加入50毫升的反应瓶中，加热至120℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应0.5小时，关闭反应，过滤，滤液浓缩，40℃真空干燥得到黄色油状产物4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)，收率66.3％。\n[0056] 实施例11：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)的制备[0057] 依次将0.40克(1.01mmol)4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)，0.40克(6.34mmol)甲酸铵，0.04克5％Pd/C(Pd质量负载量为5％)，4.0毫升氯仿加入到反应瓶中，室温25℃搅拌，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，反应\n12小时，过滤，滤液浓缩，25℃真空干燥，得到棕褐色油状产物4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)，收率79.2％。\n[0058]\n[0059] 实施例12：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)的制备[0060] 依次将0.40克(1.01mmol)4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b1)，1.20克(19.18mmol)80％水合肼，0.20克5％Pd/C，20.0毫升甲苯加入到50毫升的反应瓶中，加热至100℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应0.5小时，冷却过滤，滤液浓缩，25℃真空干燥得到棕褐色油状产物4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)，收率65.7％。\n[0061] 实施例13：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-13)的制备[0062] 依次将0.40克(1.01mmol)4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-11)，0.08克浓盐酸(质量浓度36％～38％)，0.40克铁粉，20.0毫升甲醇加入到50毫升的反应瓶中，加热至40℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应8小时，冷却过滤，滤液浓缩，25℃真空干燥得到棕褐色油状产物4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)，收率44.6％。\n[0063] 实施例14：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)的制备[0064] 依次将0.40克(1.01mmol)4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-11)，0.40克醋酸，1.20克铁粉，20.0毫升异丙醇加入到50毫升的反应瓶中，加热至80℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应3小时，冷却过滤，滤液浓缩，25℃真空干燥得到棕褐色油状产物4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)，收率76.0％。\n[0065] 实施例15：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)的制备[0066] 依次将0.40克(0.95mmol)4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)，0.40克(6.34mmol)甲酸铵，0.04克5％Pd/C，4.0毫升氯仿加入到反应瓶中，室温25℃搅拌，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，反应12小时，过滤，滤液浓缩，25℃真空干燥得到棕褐色固体产物4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)，收率73.2％，熔点84～85℃。1H NMR(500MHz,CDCl3)δ:0.95(t,J＝7.3Hz,6H)；\n1.48-1.55(m,4H)；2.51(t,J＝7.8Hz,4H)；7.03(d,J＝2.4Hz,1H)；7.06-7.08(m,1H)；7.16(dd,J＝2.4,8.9Hz,1H)；7.27(s,1H)；7.32(t,J＝8.1Hz,1H)；7.66-7.69(m,2H)；8.24(t,J＝2.0Hz,1H)；8.57(s,1H)；9.51(s,1H)。\n[0067]\n[0068] 实施例16：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)的制备[0069] 依次将0.40克(0.95mmol)4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)，1.20克(19.18mmol)80wt％水合肼，0.20克5％Pd/C，20.0毫升甲苯加入到50毫升的反应瓶中，加热至100℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应\n0.5小时，冷却过滤，滤液浓缩，25℃真空干燥得到棕褐色固体产物4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)，收率70.5％，熔点84～85℃。1H NMR同实施例15。\n[0070] 实施例17：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)的制备[0071] 依次将0.40克(0.95mmol)4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)，0.08克浓盐酸(质量浓度36～38％)，0.40克铁粉，20.0毫升甲醇加入到50毫升的反应瓶中，加热至40℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应8小时，冷却过滤，滤液浓缩，25℃真空干燥得到棕褐色固体产物4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)，收率64.4％，熔点84～85℃。1H NMR同实施例15。\n[0072] 实施例18：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)的制备[0073] 依次将0.40克(0.95mmol)4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-硝基喹唑啉(Ⅰ-b2)，0.40克醋酸，1.20克铁粉，20.0毫升异丙醇加入到50毫升的反应瓶中，加热至80℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，搅拌反应3小时，冷却过滤，滤液浓缩，25℃真空干燥得到棕褐色固体产物4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)，收率67.3％，熔点84～85℃。1H NMR同实施例15。\n[0074] 实施例19：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-乙酰氨基喹唑啉(Ⅰ-1)的制备[0075] 依次将0.20克(0.55mmol)4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)，0.13克(1.64mmol)吡啶，2.0毫升四氢呋喃加入到反应瓶中，-10℃搅拌条件下滴加\n0.449克(4.40mmol)乙酸酐，滴毕，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1)，-10℃条件下反应12小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物加入10毫升乙酸乙酯将其溶解，获得溶解液，向溶解液中加入0.40克柱层析硅胶(300～400目柱层析硅胶)，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为1：10的石油醚/乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，根据TLC检测收集含式(Ⅰ-1)所示的化合物的洗脱液(Rf值为0.5)，收集液浓缩，50℃干燥得到式(Ⅰ-1)所示的4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-乙酰氨基喹唑啉淡黄色固体，收率67.3％，熔点136～138℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ:0.89(t,J＝7.3Hz,6H)；1.44-1.52(m,4H)；2.14(s,\n3H)；2.51(t,J＝7.4Hz,4H)；3.19(s,2H)；7.30-7.36(m,2H)；7.57(d,J＝7.8Hz,1H)；7.75(d,J＝8.9Hz,1H)；7.85(dd,J＝1.8,7.9Hz,1H)；8.09(s,1H)；8.50(s,1H)；8.66(d,J＝\n1.3Hz,1H)；9.60(s,1H)；9.80(s,1H)；10.27(s,1H)。\n[0076] 实施例20：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-异丁酰氨基喹唑啉(Ⅰ-2)的制备\n[0077] 依次将0.20克(0.55mmol)4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)，0.04克(0.55mmol)二乙胺，10.0毫升氯仿加入到50毫升的反应瓶中，10℃搅拌条件下滴加0.087克(0.55mmol)异丁酸酐和5.0毫升氯仿混合溶液，滴毕，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，10℃条件下反应8小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物加入\n20毫升乙醇将其溶解，获得溶解液，向溶解液中加入0.20克柱层析硅胶(300～400目柱层析硅胶)，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为1：5的石油醚/乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，根据TLC检测收集含式(Ⅰ-2)所示的化合物的洗脱液(Rf值为0.4)，收集液浓缩，50℃干燥得到式(Ⅰ-2)所示的4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-异丁酰氨基喹唑啉灰白色固体，收率73.4％，熔点144～145℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ:1.04(t,J＝\n7.1Hz,6H)；1.17(d,J＝6.8Hz,6H)；2.62(q,J＝7.1Hz,4H)；2.68(dd,J＝6.8,13.7Hz,1H)；\n3.17(s,2H)；7.30(t,J＝8.0Hz,1H)；7.36(d,J＝8.9Hz,1H)；7.59(d,J＝8.0Hz,1H)；7.75(d,J＝8.9Hz,1H)；7.85(dd,J＝2.2,9.0Hz,1H)；8.09(t,J＝2.0Hz,1H)；8.50(s,1H)；8.75(d,J＝2.2Hz,1H)；9.66(s,1H)；9.81(s,1H)；10.17(s,1H)。\n[0078] 实施例21：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-苯甲酰氨基喹唑啉(Ⅰ-3)的制备\n[0079] 依次将0.20克(0.55mmol)4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)，0.11克(1.09mmol)三乙胺，10.0毫升乙酸乙酯加入到50毫升的反应瓶中，0℃搅拌条件下滴加0.249克(1.10mmol)苯甲酸酐和5.0毫升乙酸乙酯溶液，滴毕，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1)，25℃条件下反应6小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物加入\n20毫升氯仿将其溶解，获得溶解液，向溶解液中加入0.20克柱层析硅胶(300～400目柱层析硅胶)，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为10：1的石油醚/乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，根据TLC检测收集含式(Ⅰ-3)所示的化合物的洗脱液(Rf值为0.6)，收集液浓缩，50℃干燥得到式(Ⅰ-3)所示的4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-苯甲酰氨基喹唑啉灰白色固体，收率43.5％，熔点140～142℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ:1.04(t,J＝\n7.1Hz,6H)；2.62(q,J＝7.1Hz,4H)；3.18(s,2H)；7.28-7.40(m,2H)；7.55-7.68(m,4H)；7.82(d,J＝8.9Hz,1H)；7.99-8.09(m,3H)；8.12(t,J＝2.0Hz,1H)；8.55(s,1H)；8.92(d,J＝\n2.1Hz,1H)；9.67(s,1H)；9.86(s,1H)；10.61(s,1H)。\n[0080] 实施例22：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-丙酰氨基喹唑啉(Ⅰ-4)的制备[0081] 依次将0.20克(0.55mmol)4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)，0.067克(0.55mmol)4-二甲氨基吡啶，15.0毫升甲苯加入到50毫升的反应瓶中，5℃搅拌条件下滴加0.286克(2.20mmol)丙酸酐和4.0毫升甲苯的溶液，滴毕，加热至50℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1)，反应3小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物加入\n20毫升四氢呋喃将其溶解，获得溶解液，向溶解液中加入0.40克柱层析硅胶(300～400目柱层析硅胶)，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为5：1的石油醚/乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，根据TLC检测收集含式(Ⅰ-4)所示的化合物的洗脱液(Rf值为0.5)，收集液浓缩，50℃干燥得到式(Ⅰ-4)所示的4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-丙酰氨基喹唑啉灰白色固体，收率75.3％，熔点132～133℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ:1.04(t,J＝\n7.1Hz,6H)；1.15(t,J＝7.6Hz,3H)；2.42(q,J＝7.5Hz,2H)；2.61(q,J＝7.1Hz,4H)；3.17(s,\n2H)；7.31(t,J＝8.0Hz,1H)；7.37(d,J＝8.7Hz,1H)；7.59(d,J＝8.8Hz,1H)；7.76(d,J＝\n8.9Hz,1H)；7.85(dd,J＝2.1,9.0Hz,1H)；8.10(t,J＝1.9Hz,1H)；8.51(s,1H)；8.73(d,J＝\n1.9Hz,1H)；9.66(s,1H)；9.81(s,1H)；10.20(s,1H)。\n[0082] 实施例23：4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-丁酰氨基喹唑啉(Ⅰ-5)的制备[0083] 依次将0.20克(0.55mmol)4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a1)，0.067克(0.55mmol)4-二甲氨基吡啶，10.0毫升苯加入到50毫升的反应瓶中，5℃搅拌条件下滴加0.348克(2.20mmol)丁酸酐和5.0毫升苯的溶液，滴毕，加热至50℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1)，反应3小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物加入20毫升四氢呋喃将其溶解，获得溶解液，向溶解液中加入0.40克柱层析硅胶(300～400目柱层析硅胶)，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为1：1的石油醚/乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，根据TLC检测收集含式(Ⅰ-5)所示的化合物的洗脱液(Rf值为0.4)，收集液浓缩，50℃干燥得到式(Ⅰ-5)所示的4-[3-(2-二乙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-丁酰氨基喹唑啉灰白色固体，收率72.1％，熔点128～130℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ:0.97(t,J＝7.4Hz,\n3H)；1.04(t,J＝7.1Hz,6H)；1.67(dt,J＝14.7,7.4Hz,2H)；2.38(t,J＝7.3Hz,2H)；2.63(q,J＝7.1Hz,4H)；3.18(s,2H)；7.27–7.40(m,2H)；7.58(d,J＝8.0Hz,1H)；7.75(d,J＝8.9Hz,\n1H)；7.85(dd,J＝9.0,2.1Hz,1H)；8.09(s,1H)；8.50(s,1H)；8.71(d,J＝1.9Hz,1H)；9.66(s,1H)；9.80(s,1H)；10.20(s,1H)。\n[0084] 实施例24：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-乙酰氨基喹唑啉(Ⅰ-6)的制备[0085] 依次将0.216克(0.55mmol)4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)，0.13克(1.64mmol)吡啶，2.2毫升乙醚加入到反应瓶中，-10℃搅拌条件下滴加\n0.345克(4.39mmol)乙酰氯，滴毕，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，-\n10℃条件下反应12小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物加入20毫升乙酸乙酯将其溶解，获得溶解液，向溶解液中加入0.54克柱层析硅胶(300～400目柱层析硅胶)，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为1：1的石油醚/乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，根据TLC检测收集含式(Ⅰ-6)所示的化合物的洗脱液(Rf值为0.6)，收集液浓缩，50℃干燥得到式(Ⅰ-\n6)所示的4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-乙酰氨基喹唑啉淡黄色固体，收率\n67.3％，熔点136～138℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ:0.89(t,J＝7.3Hz,6H)；1.44-1.52(m,\n4H)；2.14(s,3H)；2.51(t,J＝7.4Hz,4H)；3.19(s,2H)；7.30-7.36(m,2H)；7.57(d,J＝\n7.8Hz,1H)；7.75(d,J＝8.9Hz,1H)；7.85(dd,J＝1.8,7.9Hz,1H)；8.09(s,1H)；8.50(s,1H)；\n8.66(d,J＝1.3Hz,1H)；9.60(s,1H)；9.80(s,1H)；10.27(s,1H)。\n[0086] 实施例25：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-苯甲酰氨基喹唑啉(Ⅰ-7)的制备\n[0087] 依次将0.216克(0.55mmol)4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)，0.04克(0.55mmol)二乙胺，15.0毫升二氯甲烷加入到50毫升的反应瓶中，10℃搅拌条件下滴加0.077克(0.55mmol)苯甲酰氯和5.0毫升二氯甲烷溶液，滴毕，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1)，10℃条件下反应8小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物加入\n20毫升乙醇将其溶解，获得溶解液，向溶解液中加入0.27克柱层析硅胶(300～400目柱层析硅胶)，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为10：1的石油醚/乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，根据TLC检测收集含式(Ⅰ-7)所示的化合物的洗脱液(Rf值为0.5)，收集液浓缩，50℃干燥得到式(Ⅰ-7)所示的4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-苯甲酰氨基喹唑啉灰白色固体，收率67.7％，熔点184～185℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ:0.90(t,J＝\n7.4Hz,6H)；1.46-1.50(m,4H)；2.50-2.52(m,4H)；3.19(s,2H)；7.31-7.37(m,2H)；7.57-\n7.66(m,4H)；7.82(d,J＝9.0Hz,1H)；8.03(dd,J＝2.2,9.0Hz,1H)；8.05-8.08(m,2H)；8.13(t,J＝2.0Hz,1H)；8.55(s,1H)；8.92(d,J＝7.2Hz,1H)；9.61(s,1H)；9.87(s,1H)；10.61(s,\n1H)。\n[0088] 实施例26：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-丁酰氨基喹唑啉(Ⅰ-8)的制备[0089] 依次将0.216克(0.55mmol)4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)，0.11克(1.09mmol)三乙胺，15.0毫升乙腈加入到50毫升的反应瓶中，0℃搅拌条件下滴加0.117克(1.10mmol)正丁酰氯和5.0毫升乙腈溶液，滴毕，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1)，25℃条件下反应6小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物加入20毫升氯仿将其溶解，获得溶解液，向溶解液中加入0.25克柱层析硅胶(300～400目柱层析硅胶)，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为1：10的石油醚/乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，根据TLC检测收集含式(Ⅰ-8)所示的化合物的洗脱液(Rf值为0.4)，收集液浓缩，50℃干燥得到式(Ⅰ-8)所示的4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-丁酰氨基喹唑啉灰白色固体，收率73.2％，熔点128～129℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ:0.90(t,J＝7.4Hz,6H)；\n0.97(t,J＝7.2Hz,3H)；1.44-1.52(m,4H)；1.64-1.72(m,2H)；2.38(t,J＝7.3Hz,2H)；2.51(t,J＝6.7Hz,4H)；3.19(s,2H)；7.29-7.36(m,2H)；7.57(d,J＝7.4Hz,1H)；7.75(d,J＝\n7.0Hz,1H)；7.85-7.88(m,1H)；8.09(s,1H)；8.50(s,1H)；8.72(d,J＝1.7Hz,1H)；9.59(s,\n1H)；9.81(s,1H)；10.20(s,1H)。\n[0090] 实施例27：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-丙酰氨基喹唑啉(Ⅰ-9)的制备[0091] 依次将0.216克(0.55mmol)4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)，0.067克(0.55mmol)4-二甲氨基吡啶，15毫升甲苯加入到50毫升的反应瓶中，5℃搅拌条件下滴加0.204克(2.20mmol)丙酰氯和5.5毫升甲苯溶液，滴毕，加热至50℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1)，反应3小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物加入20毫升四氢呋喃将其溶解，获得溶解液，向溶解液中加入0.50克柱层析硅胶(300～400目柱层析硅胶)，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为1：4的石油醚/乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，根据TLC检测收集含式(Ⅰ-9)所示的化合物的洗脱液(Rf值为0.7)，收集液浓缩，50℃干燥得到式(Ⅰ-9)所示的4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-丙酰氨基喹唑\n1\n啉灰白色固体，收率53.2％，熔点118～119℃。H NMR(500MHz,DMSO)δ:0.90(t,J＝7.4Hz,\n6H)；1.15(t,J＝7.6Hz,3H)；1.43-1.53(m,4H)；2.41(q,J＝7.5Hz,2H)；2.50-2.52(m,4H),\n3.19(s,2H)；7.29-7.36(m,2H)；7.56-7.58(m,1H)；7.75(d,J＝9.0Hz,1H)；7.85(dd,J＝\n2.2,9.0Hz,1H)；8.09(t,J＝2.0Hz,1H)；8.50(s,1H)；8.71(d,J＝2.1Hz,1H)；9.60(s,1H)；\n9.81(s,1H)；10.20(s,1H)。\n[0092] 实施例28：4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-异丁酰氨基喹唑啉(Ⅰ-10)的制备\n[0093] 依次将0.216克(0.55mmol)4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-氨基喹唑啉(Ⅰ-a2)，0.067克(0.55mmol)4-二甲氨基吡啶，15.0毫升甲苯加入到50毫升的反应瓶中，5℃搅拌条件下滴加0.234克(2.20mmol)异丁酰氯和5.0毫升甲苯的溶液，滴毕，加热至50℃，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1)，反应3小时，过滤，滤液蒸除溶剂，浓缩物加入20毫升四氢呋喃将其溶解，获得溶解液，向溶解液中加入0.50克柱层析硅胶(300～400目柱层析硅胶)，混匀后，蒸除溶剂，得干燥的浓缩物与硅胶的混合物，将混合物装柱，然后以体积比为4：1的石油醚/乙酸乙酯混合溶液为洗脱剂，洗脱，TLC跟踪检测(展开剂为乙酸乙酯/石油醚＝1：1(v/v))，根据TLC检测收集含式(Ⅰ-10)所示的化合物的洗脱液(Rf值为\n0.3)，收集液浓缩，50℃干燥得到式(Ⅰ-10)所示的4-[3-(2-二丙氨基乙酰氨基)苯胺基]-6-异丁酰氨基喹唑啉灰白色固体，收率71.1％，熔点148～150℃。1H NMR(500MHz,DMSO)δ:\n0.90(t,J＝7.3Hz,6H)；1.17(d,J＝6.8Hz,6H)；1.41–1.55(m,4H)；2.51(dd,J＝1.8,3.6Hz,\n4H)；2.64–2.75(m,1H)；3.19(s,2H)；7.27–7.38(m,2H)；7.55–7.61(m,1H)；7.75(d,J＝\n8.9Hz,1H)；7.86(dd,J＝2.2,9.0Hz,1H)；8.09(d,J＝1.9Hz,1H)；8.50(s,1H)；8.74(d,J＝\n2.1Hz,1H)；9.60(s,1H)；9.82(s,1H)；10.17(s,1H)。\n[0094] 实施例29：抗癌活性体外测试\n[0095] 将实施例中制得的化合物(Ⅰ)进行人肺癌和人乳腺癌生物活性测试。\n[0096] 测试方法：四氮唑盐还原法(MTT法)。\n[0097] 细胞株：人肺癌细胞株A-549和人乳腺癌细胞株MCF-7。上述肿瘤细胞株购自中国科学院上海生命科学院细胞库。\n[0098] 实验步骤如下：\n[0099] (1)样品的准备：对于可溶样品，每1mg用40μL DMSO溶解，取2μL用1000μL培养基稀释，使浓度为100μg/mL，再用培养液连续稀释至使用浓度。\n[0100] (2)细胞的培养\n[0101] 1)培养基的配制:每1000mL培养基中含80万单位青霉素，1.0g链霉素，10％灭活胎牛血清。\n[0102] 2)细胞的培养：将肿瘤细胞接种于培养基中，置37℃，5％CO2培养箱中培养，3～5d传代。\n[0103] 3)测定样品对肿瘤细胞生长的抑制作用\n[0104] 将细胞用EDTA-胰酶消化液消化，并用培养基稀释成1×106/mL，加到96孔细胞培养板中，每孔100μL，置37℃，5％CO2培养箱中培养。接种24h后，加入用培养基稀释的100μg/mL、10μg/mL或1μg/mL样品，每孔100μL，每个浓度加3孔，置37℃，5％CO2培养箱中培养，72h后在细胞培养孔中加入5mg/mL的MTT，每孔10μL，置37℃孵育3h，加入DMSO，每孔150μL，用振荡器振荡，使甲臢完全溶解，用酶标仪在570nm波长下比色。以同样条件用不含样品，含同样浓度DMSO的培养基培养的细胞作为对照，计算样品对肿瘤细胞生长的IC50。\n[0105] 测试的结果如下表所示：\n[0106]